灵芝饼茶降脂作用研究及总三萜含量的测定

吴晓娟 汪鋆植 孙文军 於洪建 张泽生

（1.三峡大学 医学院，湖北 宜昌 443002；2.三峡大学 生物与制药学院，湖北 宜昌 443002；3.天津市尖峰天然产物研究开发有限公司，天津 300457；4.天津科技大学 食品工程与生物技术学院，天津 300457）

高脂血症（hyperlipidemia，HL）即脂质代谢紊乱，主要是指血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）水平过高，血清低密度脂蛋白胆固醇（LDL－C）水平过高或血清高密度脂蛋白胆固醇（HDL－C）水平过低.高脂血症是目前公认的心血管疾病的主要危险因素，同时也是导致脂肪肝的主要病因之一.随着人们生活方式和饮食结构的变化，高脂血症的发病率呈逐年上升趋势，已严重影响人们的健康.调整饮食，改善生活方式是防治高脂血症的基本措施［1］，常以茶为饮品不仅可预防和改善高脂血症，还能调节人体多种生理机能，达到降血脂，软化血管，增强人体抵抗力等作用［2］.本研究利用茶籽饼，经灵芝发酵处理［3］，研制了灵芝饼茶，对其降脂作用进行了实验研究，并测定了总三萜的含量为茶籽饼的综合利用、灵芝饼茶的质量控制提供基础.

1 材料和方法

1.1 材料

1）灵芝饼茶的制备.取干燥的茶籽饼，加入适量水拌匀，高压灭菌，然后在超净工作台上接种灵芝进行发酵.将发酵好的茶籽饼制备成颗粒，烘干，包装.

2）实验动物.KM小鼠，雌雄各半，体重20±2g，由三峡大学动物中心提供（生产许可证；SCXK（鄂）2011－0012，使用许可证；SYXK（鄂）2011－0061）.高脂饲料、普通饲料，由三峡大学动物中心提.供辛伐他汀片（安徽永生堂药业有限责任公司，120601）.

3）主要仪器.超净工作台（苏州净设备厂）；分光光度计（南京麒麟分析仪器有限公司），自动生化分析仪（Biosystem）.

1.2 实验方法［4，5］

1）药物配制.灵芝饼茶提取物加水煎煮2次，浓缩为含生药0.6g／mL，辛伐他汀片：将辛伐他汀片碾碎加水混悬成浓度为0.4mg／mL，按人用量10倍给药.

2）高脂饲料的制备.高脂饲料按如下比例配制：基础饲料78.8%，蛋黄粉10%，猪油10%，胆固醇1%，胆酸纳0.2%.

3）动物分组给药.将小鼠随机分成6组，每组10只，除空白组外，其余各组喂养高脂伺料造模.给药组灌胃给予等体积不同药物，空白组，高脂模型组灌胃给予等体积生理盐水.各组小鼠分笼饲养，自由饮食，12h交替照明，温度23～25℃，湿度40%～70%.实验期间，每周称量各组小鼠体重，记录饮食量，饮水量，尿量及各组小鼠体症状况.

4）血脂测定.所有小鼠实验第28d停止喂养高脂饲料，禁食12h，第2d摘除眼球取血，离心取血清，测定总胆固醇（TC）、甘油三醋（TG）、高密度脂蛋白－胆固醇（HDL－C）、低密度脂蛋白（LDL－C）浓度.

2 实验结果与分析

2.1 灵芝饼茶提取物对高脂血症小鼠的影响

1）灵芝饼茶提取物对高脂血症小鼠血脂的影响结果见表1.

表1 灵芝饼茶提取物对高脂血症小鼠血脂的影响（x±s，n＝10）

表1显示，灵芝饼茶提取物组高、低剂量组均能不同程度降低血脂.高剂量组与模型组比较总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL－C）浓度差异有显著性（P＜0.01）.低剂量组与模型组比较TC、LDL－C浓度差异有显著性（P＜0.05）.高、低剂量组均能提高密度脂蛋白比例.

2）灵芝饼茶提取物对高脂血症小鼠体重的影响见表2.表2显示，灵芝饼茶提取物组高、低剂量组均能不同程度的抑制高脂饲料引起的小鼠体重增加，与模型组比较差异有显著性（P＜0.05或P＜0.01）.

表2 灵芝饼茶提取物对高脂血症小鼠体重的影响（x±s，n＝10）

2.2 灵芝饼茶中总三萜含量的测定［6，7］

1）标准曲线绘制.精密称量2mg对照品灵芝酸A于10mL容量瓶用2mL的甲醇溶解，后用甲醇定容至10mL，摇匀作为母液.分别精密量取对照品母液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL于试管中，水浴挥干溶剂，残渣加入0.2mL香草醛－冰乙酸（5%，w／v）和0.8mL的高氯酸，70℃水浴10min，冷却后加入2mL冰乙酸，在λmax＝534nm处测量吸光度，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，得标准曲线方程为：y＝0.003 0x＋0.239 5，R＝0.999 6.

2）样品测定.称取灵芝饼茶3份，每份2g，加50 mL 95%的乙醇静提2d，减压浓缩至10mL，石油醚脱酯后，分别取1mL至4mLEP管中，水浴挥干溶剂，后加入0.2mL香草醛－冰乙酸（5%，w／v）和0.8 mL的高氯酸，取5μl稀释至10mL.按标准曲线绘制项下依法操作，测定吸光度，根据标准曲线方程计算灵芝饼茶中总三萜含量.结果以灵芝酸A计，灵芝饼茶总三萜的平均含量为1.5%，结果见表3.

精密度、重复性、加样回收率实验满足测定要求.

表3 灵芝饼茶总三萜的含量测定结果

3 讨 论

茶籽饼是茶籽经过榨油后剩下的饼粕.我国每年生产油茶籽100多万t，生产加工茶籽油后，产生70多万t副产品茶籽饼，而大部分茶籽饼没被充分利用，造成了很大的资源浪费.茶籽饼中含有茶皂素、丹宁、黄酮、咖啡碱、蛋白质等多种成分，对茶籽饼进行综合利用，提高附加值，具有十分重要的社会、经济价值［8，9］.因此，针对目前茶籽饼利用不充分的现状，对茶籽饼进行了综合利用研究.利用茶籽饼，经灵芝发酵，制成了灵芝饼茶.茶籽饼经灵芝发酵，既改善了口感，又提高了活性成分含量，为更好的利用茶籽饼资源提供了条件.

导致高脂血症的原因是由于进食含脂肪和胆固醇类食物过多，脂类代谢紊乱，或因脂类产生过多，或因其降解或转运发生障碍都可造成高脂血症.调整饮食，改善生活方式是防治高脂血症的基本措施，本研究以茶籽饼为原料，研制符合我国饮食习惯的功能食品，具有良好的应用前景.本实验以高脂饲料建立实验性高脂血症小鼠模型，研究灵芝饼茶提取物对血脂的影响.结果表明，灵芝饼茶提取物能有效降低高脂血症小鼠血清中TC、TG、LDL－C含量，这对调节脂类代谢，预防动脉粥样硬化等疾病具有积极作用.值得进一步研究应用.此外，本实验测定了总三萜含量，为灵芝饼茶的质量控制提供了依据.研究还发现，灵芝饼茶提取物除降低血脂之外，小鼠体重也明显减轻，这对于肥胖型的高脂血症尤为有益.但灵芝饼茶提取物降血脂作用机制以及有效组分有待进一步研究.

［1］ 曾 锋.高脂血症的预防与治疗［J］.中国实用医药，2013，8（3）：86－87.

［2］ 张冬英，刘仲华，施兆鹏，等.高通量筛选法对普洱茶降血糖血脂作用的研究［J］.茶叶科学，2005，26（1）：49－53.

［3］ 唐粉芳，郭 豫，张 静.灵芝菌丝体降脂作用的实验研究［J］.食品科学，2003，24（4）：145－149.

［4］ 邵元龙，董 英.芝麻饼粕发酵提取物对小鼠高脂血症的预防作用研究［J］.中国食品学报，2010，10（1）：31－34.

［5］ 康文艺，李晓梅，郭曙光.山楂提取物不同部位体内降血脂作用［J］.中成药，2009，31（9）：1342－1345.

［6］ 王 倩，郭志勇，邹 坤.吉祥草根茎化学成分研究［J］.三峡大学学报：自然科学版，2012，34（1）：82－84.

［7］ 江绍琳，江绍玫，曾令聪.分光光度法快速测定灵芝中总三萜含量［J］.江西农业大学学报，2006，28（4）：634－636.

［8］ 刘玲玲，李庆松，曾 亮，等.茶籽饼中茶皂素提取工艺研究［J］.粮食与食品工业，2010，17（4）：17－22.

［9］ Lee H B，Kim E K，Park S J，et al.Isolation and Characterization of Nicotiflorin Obtained by Enzymatic Hydrolysis of Two Precursors in Tea Seed Extract ［J］.J Agric Food Chem，2010，58（8）：4808－4813.