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大黄鱼中硫磺素T残留的HPLC分析

2014-10-20沙鸥等

湖北农业科学 2014年16期
关键词:黄鱼大黄鱼硫磺

沙鸥等

摘要:建立了反相高效液相色谱法测定染色大黄鱼(Pseudosciaena crocea)中非法添加色素硫磺素T含量的方法。样品经超声水溶液提取,采用Eclipse XDB-C18色谱柱,以甲醇-0.05%(V/V)甲酸为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为410 nm,外标法测定硫磺素T。结果表明,硫磺素T在0.40~65.0 mg/L范围内线性关系良好(R2=0.9 994),检出限为0.02 mg/L(S/N=3),3个浓度水平下的加标回收率为91.0%~98.1%,相对标准偏差(n=6)为1.21%~2.26%。

关键词:大黄鱼(Pseudosciaena crocea);硫磺素T;高效液相色谱法;测定

中图分类号:O652.2 文献标识码:A 文章编号:0439-8114(2014)16-3910-02

Abstract: A HPLC method was developed for detecting thioflavin T in Pseudosciaena crocea. Sample was added in water and treated with ultrasonic extraction. The thioflavin T was analyzed with Eclipse XDB-C18 column and detected at 410 nm, with a mobile phase of methanol-0.05%(V/V) formic acid solution at a flow rate of 1.0 mL/min. The linearity was obtained in the range of 0.40~65.0 mg/L (R2=0.9 994). The determination limit (S/N=3) was 0.02 mg/L. The recovery of three different concentration were in the range of 91.0%~98.6%. RSD (n=6) was in the range of 1.12%~2.26%.

Key words: Pseudosciaena crocea; thioflavin T; HPLC; determination

黄鱼有大黄鱼(Pseudosciaena crocea)与小黄鱼(Psendosciaena polyactis)之分,又名黄花鱼。黄鱼中含有丰富的微量元素、蛋白质和维生素,深受消费者青睐。由于黄鱼的保鲜期短,其产量远远低于需求量,因此黄鱼价格一直居高不下,尤其是大黄鱼,价格都在几十元1 kg,这导致“黄鱼造假”情况时有发生。目前市售黄鱼造假主要以染色黄鱼为主,如染色白姑鱼和三牙鱼等,也有不法商贩将品质较差的黄鱼染色后冒充野生黄鱼,以获得高额利润。据市场调研及报纸报道,目前向“伪黄鱼”或黄鱼中添加的染料主要为黄色化工染料或人工黄色合成色素[1-6]。

硫磺素T又称碱性黄1,为芳香胺类碱性工业染料[7],常用于生化研究中生物组织学染色,该类染料水溶性好,水溶液呈黄色,对生物染色快且效果好,但严禁将其作为食品添加剂使用,部分商贩以硫磺素T对黄鱼染色。目前,硫磺素T的高效液相色谱检测分析方法少见报道。市售“伪黄鱼”中非法添加的硫磺素T,作为一个新型潜在食品安全风险点,建立和完善相应的分析方法,可为该类产品质量控制、食品安全执法管理提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

市购大黄鱼;硫磺素T(纯度:95.8%),购于国药集团化学有限公司。

1.2 仪器与试剂

1260型高效液相色谱仪(美国安捷伦),配紫外-可见可变波长检测器,色谱柱:Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6×150 mm,5 μm);UV-2501紫外可见分光光度计(日本岛津);MiliQ Biocel超纯水机(美国默克密理博)。

甲醇(色谱纯);其他试剂均为分析纯,去离子水;所用玻璃器皿均在使用前用稀HNO3溶液浸泡24 h,并用去离子水洗涤3次以上,晾干。

1.3 方法

1.3.1 样品处理 由于硫磺素T为水溶性色素,因此直接向染色黄鱼中加入蒸馏水,进行超声提取,30 ℃提取10 min,再加甲醇稀释,经醇沉淀蛋白,提取液过 0.45 μm 微孔滤膜过滤,待测。

1.3.2 色谱条件 色谱柱为Eclipse XDB-C18;流动相A为0.05%(V/V)甲酸溶液,流动相B为甲醇,梯度洗脱,洗脱条件为:0~4 min流动相A由70%降至50%,4~6 min流动相A 50%保持2 min,6~10 min 流动相A由50%升至70%,柱温30 ℃;紫外检测波长410 nm;进样量20 μL;流速1.0 mL/min。

2 结果与分析

2.1 检测波长

在200~600 nm测定硫磺素T的吸光度,结果如图2所示。硫磺素T的最大吸收波长为410 nm处,在该条件下,干扰较小,且可获得较高的灵敏度,故选择410 nm作为硫磺素T的检测波长。

2.2 样品分析

在上述色谱条件下,标准溶液的保留时间为6.1 min,出峰时间较快,峰形对称(图3),样品中硫磺素T的拖尾因子符合规定,分离度大于1.5。

取0.4~45.0 mg/L范围内的硫磺素T标准溶液,按上述色谱条件测定峰面积,以峰面积对溶液质量浓度进行线性回归,得回归方程y=54.29x-153.7,在0.4~45.0 mg/L范围内呈良好线性关系,R2= 0.999 4,检出限为0.02 mg/L(S/N=3)。endprint

2.3 回收率分析

取不含硫磺素T染色黄鱼浸提液,定量添加硫磺素T标准溶液至1.0,5.0,10.0 mg/L,每个浓度测定6个平行样品,测定结果见表1。表1结果表明,硫磺素T在3个添加水平下的加标回收率在91.0%~98.4%之间,RSD在1.21%~2.26%之间,满足定量分析要求。

2.4 重复性试验

重复性是方法可靠性评价指标之一,是指在重复性条件下,测定的试验结果之间的符合程度。取6份硫磺素T染色的黄鱼1号样品浸提液,平行6次,测定结果分别为1.68,1.64,1.56,1.72,1.73,1.65 mg/L,平均值为1.66 mg/L,RSD为3.73%。

2.5 样品分析

按上述分析方法,对市场上购买的3个批次染色黄鱼样品进行高效液相色谱分析,通过标准曲线计算黄鱼浸泡液中硫磺素T的含量分别为1.66,2.45与2.17 mg/L。

3 结论

本研究建立了染色黄鱼浸泡液中硫磺素T的高效液相色谱定性定量方法,其色谱条件为:Eclipse XDB-C18色谱柱;以0.05%甲酸溶液与甲醇为流动性,梯度洗脱;柱温30 ℃;紫外检测波长410 nm;进样量20 μL;流速1.0 mL/min。本方法对样品的前处理只需超声提取,简单快速,出峰时间短,准确度,精密度符合要求,可用于染色黄鱼中硫磺素T的测定。

参考文献:

[1] 张 倩. 怎么鉴别黄鱼染没染色[J]. 吉林农业(下半月)2012 (2):29.

[2] 宁德市质监局. 宁德市质监局打击“对大黄鱼注水,染色”行为[J]. 福建质量技术监督,2009(3): 33.

[3] 李永刚, 刘 潇, 陈 明, 等. 液质联用法检测黄鱼中的碱性橙、碱性嫩黄和酸性橙Ⅱ[J]. 公共卫生与预防医学,2013,24(2): 97-98.

[4] 郝凤桐. 鱼“被美容”[J]. 饮食科学,2011(5):11.

[5] GUI WJ, XU Y, SHOU L F, et al. Liquid chromatography-tandem mass spectrometry for the determination of chrysoidine in yellow n tuna[J]. Food Chemistry,2010,122(4):1230-1234.

[6] 薛仔改. 浅谈食用色素的安全问题[J].现代经济信息,2009(21): 355,336.

[7] 尤努斯江·吐拉洪, 木妮热·依布拉音,吐尔洪·买买提.食品中碱性黄Ⅱ的提取和检测方法[J]. 安徽农业科学,2012,40(32): 15908-15910.

(责任编辑 周有祥)endprint

2.3 回收率分析

取不含硫磺素T染色黄鱼浸提液,定量添加硫磺素T标准溶液至1.0,5.0,10.0 mg/L,每个浓度测定6个平行样品,测定结果见表1。表1结果表明,硫磺素T在3个添加水平下的加标回收率在91.0%~98.4%之间,RSD在1.21%~2.26%之间,满足定量分析要求。

2.4 重复性试验

重复性是方法可靠性评价指标之一,是指在重复性条件下,测定的试验结果之间的符合程度。取6份硫磺素T染色的黄鱼1号样品浸提液,平行6次,测定结果分别为1.68,1.64,1.56,1.72,1.73,1.65 mg/L,平均值为1.66 mg/L,RSD为3.73%。

2.5 样品分析

按上述分析方法,对市场上购买的3个批次染色黄鱼样品进行高效液相色谱分析,通过标准曲线计算黄鱼浸泡液中硫磺素T的含量分别为1.66,2.45与2.17 mg/L。

3 结论

本研究建立了染色黄鱼浸泡液中硫磺素T的高效液相色谱定性定量方法,其色谱条件为:Eclipse XDB-C18色谱柱;以0.05%甲酸溶液与甲醇为流动性,梯度洗脱;柱温30 ℃;紫外检测波长410 nm;进样量20 μL;流速1.0 mL/min。本方法对样品的前处理只需超声提取,简单快速,出峰时间短,准确度,精密度符合要求,可用于染色黄鱼中硫磺素T的测定。

参考文献:

[1] 张 倩. 怎么鉴别黄鱼染没染色[J]. 吉林农业(下半月)2012 (2):29.

[2] 宁德市质监局. 宁德市质监局打击“对大黄鱼注水,染色”行为[J]. 福建质量技术监督,2009(3): 33.

[3] 李永刚, 刘 潇, 陈 明, 等. 液质联用法检测黄鱼中的碱性橙、碱性嫩黄和酸性橙Ⅱ[J]. 公共卫生与预防医学,2013,24(2): 97-98.

[4] 郝凤桐. 鱼“被美容”[J]. 饮食科学,2011(5):11.

[5] GUI WJ, XU Y, SHOU L F, et al. Liquid chromatography-tandem mass spectrometry for the determination of chrysoidine in yellow n tuna[J]. Food Chemistry,2010,122(4):1230-1234.

[6] 薛仔改. 浅谈食用色素的安全问题[J].现代经济信息,2009(21): 355,336.

[7] 尤努斯江·吐拉洪, 木妮热·依布拉音,吐尔洪·买买提.食品中碱性黄Ⅱ的提取和检测方法[J]. 安徽农业科学,2012,40(32): 15908-15910.

(责任编辑 周有祥)endprint

2.3 回收率分析

取不含硫磺素T染色黄鱼浸提液,定量添加硫磺素T标准溶液至1.0,5.0,10.0 mg/L,每个浓度测定6个平行样品,测定结果见表1。表1结果表明,硫磺素T在3个添加水平下的加标回收率在91.0%~98.4%之间,RSD在1.21%~2.26%之间,满足定量分析要求。

2.4 重复性试验

重复性是方法可靠性评价指标之一,是指在重复性条件下,测定的试验结果之间的符合程度。取6份硫磺素T染色的黄鱼1号样品浸提液,平行6次,测定结果分别为1.68,1.64,1.56,1.72,1.73,1.65 mg/L,平均值为1.66 mg/L,RSD为3.73%。

2.5 样品分析

按上述分析方法,对市场上购买的3个批次染色黄鱼样品进行高效液相色谱分析,通过标准曲线计算黄鱼浸泡液中硫磺素T的含量分别为1.66,2.45与2.17 mg/L。

3 结论

本研究建立了染色黄鱼浸泡液中硫磺素T的高效液相色谱定性定量方法,其色谱条件为:Eclipse XDB-C18色谱柱;以0.05%甲酸溶液与甲醇为流动性,梯度洗脱;柱温30 ℃;紫外检测波长410 nm;进样量20 μL;流速1.0 mL/min。本方法对样品的前处理只需超声提取,简单快速,出峰时间短,准确度,精密度符合要求,可用于染色黄鱼中硫磺素T的测定。

参考文献:

[1] 张 倩. 怎么鉴别黄鱼染没染色[J]. 吉林农业(下半月)2012 (2):29.

[2] 宁德市质监局. 宁德市质监局打击“对大黄鱼注水,染色”行为[J]. 福建质量技术监督,2009(3): 33.

[3] 李永刚, 刘 潇, 陈 明, 等. 液质联用法检测黄鱼中的碱性橙、碱性嫩黄和酸性橙Ⅱ[J]. 公共卫生与预防医学,2013,24(2): 97-98.

[4] 郝凤桐. 鱼“被美容”[J]. 饮食科学,2011(5):11.

[5] GUI WJ, XU Y, SHOU L F, et al. Liquid chromatography-tandem mass spectrometry for the determination of chrysoidine in yellow n tuna[J]. Food Chemistry,2010,122(4):1230-1234.

[6] 薛仔改. 浅谈食用色素的安全问题[J].现代经济信息,2009(21): 355,336.

[7] 尤努斯江·吐拉洪, 木妮热·依布拉音,吐尔洪·买买提.食品中碱性黄Ⅱ的提取和检测方法[J]. 安徽农业科学,2012,40(32): 15908-15910.

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