大黄鱼中硫磺素T残留的HPLC分析

沙鸥等

摘要：建立了反相高效液相色谱法测定染色大黄鱼（Pseudosciaena crocea）中非法添加色素硫磺素T含量的方法。样品经超声水溶液提取，采用Eclipse XDB-C18色谱柱，以甲醇-0.05%（V/V）甲酸为流动相，流速为1.0 mL/min，检测波长为410 nm，外标法测定硫磺素T。结果表明，硫磺素T在0.40～65.0 mg/L范围内线性关系良好（R2=0.9 994），检出限为0.02 mg/L（S/N=3），3个浓度水平下的加标回收率为91.0%～98.1%，相对标准偏差（n=6）为1.21%～2.26%。

关键词：大黄鱼（Pseudosciaena crocea）；硫磺素T；高效液相色谱法；测定

中图分类号：O652.2 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2014）16-3910-02

Abstract： A HPLC method was developed for detecting thioflavin T in Pseudosciaena crocea. Sample was added in water and treated with ultrasonic extraction. The thioflavin T was analyzed with Eclipse XDB-C18 column and detected at 410 nm， with a mobile phase of methanol-0.05%（V/V） formic acid solution at a flow rate of 1.0 mL/min. The linearity was obtained in the range of 0.40～65.0 mg/L （R2=0.9 994）. The determination limit （S/N=3） was 0.02 mg/L. The recovery of three different concentration were in the range of 91.0%～98.6%. RSD （n=6） was in the range of 1.12%～2.26%.

Key words： Pseudosciaena crocea； thioflavin T； HPLC； determination

黄鱼有大黄鱼（Pseudosciaena crocea）与小黄鱼（Psendosciaena polyactis）之分，又名黄花鱼。黄鱼中含有丰富的微量元素、蛋白质和维生素，深受消费者青睐。由于黄鱼的保鲜期短，其产量远远低于需求量，因此黄鱼价格一直居高不下，尤其是大黄鱼，价格都在几十元1 kg，这导致“黄鱼造假”情况时有发生。目前市售黄鱼造假主要以染色黄鱼为主，如染色白姑鱼和三牙鱼等，也有不法商贩将品质较差的黄鱼染色后冒充野生黄鱼，以获得高额利润。据市场调研及报纸报道，目前向“伪黄鱼”或黄鱼中添加的染料主要为黄色化工染料或人工黄色合成色素[1-6]。

硫磺素T又称碱性黄1，为芳香胺类碱性工业染料[7]，常用于生化研究中生物组织学染色，该类染料水溶性好，水溶液呈黄色，对生物染色快且效果好，但严禁将其作为食品添加剂使用，部分商贩以硫磺素T对黄鱼染色。目前，硫磺素T的高效液相色谱检测分析方法少见报道。市售“伪黄鱼”中非法添加的硫磺素T，作为一个新型潜在食品安全风险点，建立和完善相应的分析方法，可为该类产品质量控制、食品安全执法管理提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

市购大黄鱼；硫磺素T（纯度：95.8%），购于国药集团化学有限公司。

1.2 仪器与试剂

1260型高效液相色谱仪（美国安捷伦），配紫外-可见可变波长检测器，色谱柱：Eclipse XDB-C18色谱柱（4.6×150 mm，5 μm）；UV-2501紫外可见分光光度计（日本岛津）；MiliQ Biocel超纯水机（美国默克密理博）。

甲醇（色谱纯）；其他试剂均为分析纯，去离子水；所用玻璃器皿均在使用前用稀HNO3溶液浸泡24 h，并用去离子水洗涤3次以上，晾干。

1.3 方法

1.3.1 样品处理 由于硫磺素T为水溶性色素，因此直接向染色黄鱼中加入蒸馏水，进行超声提取，30 ℃提取10 min，再加甲醇稀释，经醇沉淀蛋白，提取液过 0.45 μm 微孔滤膜过滤，待测。

1.3.2 色谱条件 色谱柱为Eclipse XDB-C18；流动相A为0.05%（V/V）甲酸溶液，流动相B为甲醇，梯度洗脱，洗脱条件为：0～4 min流动相A由70%降至50%，4～6 min流动相A 50%保持2 min，6～10 min 流动相A由50%升至70%，柱温30 ℃；紫外检测波长410 nm；进样量20 μL；流速1.0 mL/min。

2 结果与分析

2.1 检测波长

在200～600 nm测定硫磺素T的吸光度，结果如图2所示。硫磺素T的最大吸收波长为410 nm处，在该条件下，干扰较小，且可获得较高的灵敏度，故选择410 nm作为硫磺素T的检测波长。

2.2 样品分析

在上述色谱条件下，标准溶液的保留时间为6.1 min，出峰时间较快，峰形对称（图3），样品中硫磺素T的拖尾因子符合规定，分离度大于1.5。

取0.4～45.0 mg/L范围内的硫磺素T标准溶液，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积对溶液质量浓度进行线性回归，得回归方程y=54.29x-153.7，在0.4～45.0 mg/L范围内呈良好线性关系，R2= 0.999 4，检出限为0.02 mg/L（S/N=3）。endprint

2.3 回收率分析

取不含硫磺素T染色黄鱼浸提液，定量添加硫磺素T标准溶液至1.0，5.0，10.0 mg/L，每个浓度测定6个平行样品，测定结果见表1。表1结果表明，硫磺素T在3个添加水平下的加标回收率在91.0%～98.4%之间，RSD在1.21%～2.26%之间，满足定量分析要求。

2.4 重复性试验

重复性是方法可靠性评价指标之一，是指在重复性条件下，测定的试验结果之间的符合程度。取6份硫磺素T染色的黄鱼1号样品浸提液，平行6次，测定结果分别为1.68，1.64，1.56，1.72，1.73，1.65 mg/L，平均值为1.66 mg/L，RSD为3.73%。

2.5 样品分析

按上述分析方法，对市场上购买的3个批次染色黄鱼样品进行高效液相色谱分析，通过标准曲线计算黄鱼浸泡液中硫磺素T的含量分别为1.66，2.45与2.17 mg/L。

3 结论

本研究建立了染色黄鱼浸泡液中硫磺素T的高效液相色谱定性定量方法，其色谱条件为：Eclipse XDB-C18色谱柱；以0.05%甲酸溶液与甲醇为流动性，梯度洗脱；柱温30 ℃；紫外检测波长410 nm；进样量20 μL；流速1.0 mL/min。本方法对样品的前处理只需超声提取，简单快速，出峰时间短，准确度，精密度符合要求，可用于染色黄鱼中硫磺素T的测定。

参考文献：

[1] 张 倩. 怎么鉴别黄鱼染没染色[J]. 吉林农业（下半月）2012 （2）：29.

[2] 宁德市质监局. 宁德市质监局打击“对大黄鱼注水，染色”行为[J]. 福建质量技术监督，2009（3）： 33.

[3] 李永刚， 刘 潇， 陈 明， 等. 液质联用法检测黄鱼中的碱性橙、碱性嫩黄和酸性橙Ⅱ[J]. 公共卫生与预防医学，2013，24（2）： 97-98.

[4] 郝凤桐. 鱼“被美容”[J]. 饮食科学，2011（5）：11.

[5] GUI WJ， XU Y， SHOU L F， et al. Liquid chromatography-tandem mass spectrometry for the determination of chrysoidine in yellow n tuna[J]. Food Chemistry，2010，122（4）：1230-1234.

[6] 薛仔改. 浅谈食用色素的安全问题[J].现代经济信息，2009（21）： 355，336.

[7] 尤努斯江·吐拉洪， 木妮热·依布拉音，吐尔洪·买买提.食品中碱性黄Ⅱ的提取和检测方法[J]. 安徽农业科学，2012，40（32）： 15908-15910.

（责任编辑 周有祥）endprint

2.3 回收率分析

取不含硫磺素T染色黄鱼浸提液，定量添加硫磺素T标准溶液至1.0，5.0，10.0 mg/L，每个浓度测定6个平行样品，测定结果见表1。表1结果表明，硫磺素T在3个添加水平下的加标回收率在91.0%～98.4%之间，RSD在1.21%～2.26%之间，满足定量分析要求。

2.4 重复性试验

重复性是方法可靠性评价指标之一，是指在重复性条件下，测定的试验结果之间的符合程度。取6份硫磺素T染色的黄鱼1号样品浸提液，平行6次，测定结果分别为1.68，1.64，1.56，1.72，1.73，1.65 mg/L，平均值为1.66 mg/L，RSD为3.73%。

2.5 样品分析

按上述分析方法，对市场上购买的3个批次染色黄鱼样品进行高效液相色谱分析，通过标准曲线计算黄鱼浸泡液中硫磺素T的含量分别为1.66，2.45与2.17 mg/L。

3 结论

本研究建立了染色黄鱼浸泡液中硫磺素T的高效液相色谱定性定量方法，其色谱条件为：Eclipse XDB-C18色谱柱；以0.05%甲酸溶液与甲醇为流动性，梯度洗脱；柱温30 ℃；紫外检测波长410 nm；进样量20 μL；流速1.0 mL/min。本方法对样品的前处理只需超声提取，简单快速，出峰时间短，准确度，精密度符合要求，可用于染色黄鱼中硫磺素T的测定。

参考文献：

[1] 张 倩. 怎么鉴别黄鱼染没染色[J]. 吉林农业（下半月）2012 （2）：29.

[2] 宁德市质监局. 宁德市质监局打击“对大黄鱼注水，染色”行为[J]. 福建质量技术监督，2009（3）： 33.

[3] 李永刚， 刘 潇， 陈 明， 等. 液质联用法检测黄鱼中的碱性橙、碱性嫩黄和酸性橙Ⅱ[J]. 公共卫生与预防医学，2013，24（2）： 97-98.

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[6] 薛仔改. 浅谈食用色素的安全问题[J].现代经济信息，2009（21）： 355，336.

[7] 尤努斯江·吐拉洪， 木妮热·依布拉音，吐尔洪·买买提.食品中碱性黄Ⅱ的提取和检测方法[J]. 安徽农业科学，2012，40（32）： 15908-15910.

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2.3 回收率分析

取不含硫磺素T染色黄鱼浸提液，定量添加硫磺素T标准溶液至1.0，5.0，10.0 mg/L，每个浓度测定6个平行样品，测定结果见表1。表1结果表明，硫磺素T在3个添加水平下的加标回收率在91.0%～98.4%之间，RSD在1.21%～2.26%之间，满足定量分析要求。

2.4 重复性试验

重复性是方法可靠性评价指标之一，是指在重复性条件下，测定的试验结果之间的符合程度。取6份硫磺素T染色的黄鱼1号样品浸提液，平行6次，测定结果分别为1.68，1.64，1.56，1.72，1.73，1.65 mg/L，平均值为1.66 mg/L，RSD为3.73%。

2.5 样品分析

按上述分析方法，对市场上购买的3个批次染色黄鱼样品进行高效液相色谱分析，通过标准曲线计算黄鱼浸泡液中硫磺素T的含量分别为1.66，2.45与2.17 mg/L。

3 结论

本研究建立了染色黄鱼浸泡液中硫磺素T的高效液相色谱定性定量方法，其色谱条件为：Eclipse XDB-C18色谱柱；以0.05%甲酸溶液与甲醇为流动性，梯度洗脱；柱温30 ℃；紫外检测波长410 nm；进样量20 μL；流速1.0 mL/min。本方法对样品的前处理只需超声提取，简单快速，出峰时间短，准确度，精密度符合要求，可用于染色黄鱼中硫磺素T的测定。

参考文献：

[1] 张 倩. 怎么鉴别黄鱼染没染色[J]. 吉林农业（下半月）2012 （2）：29.

[2] 宁德市质监局. 宁德市质监局打击“对大黄鱼注水，染色”行为[J]. 福建质量技术监督，2009（3）： 33.

[3] 李永刚， 刘 潇， 陈 明， 等. 液质联用法检测黄鱼中的碱性橙、碱性嫩黄和酸性橙Ⅱ[J]. 公共卫生与预防医学，2013，24（2）： 97-98.

[4] 郝凤桐. 鱼“被美容”[J]. 饮食科学，2011（5）：11.

[5] GUI WJ， XU Y， SHOU L F， et al. Liquid chromatography-tandem mass spectrometry for the determination of chrysoidine in yellow n tuna[J]. Food Chemistry，2010，122（4）：1230-1234.

[6] 薛仔改. 浅谈食用色素的安全问题[J].现代经济信息，2009（21）： 355，336.

[7] 尤努斯江·吐拉洪， 木妮热·依布拉音，吐尔洪·买买提.食品中碱性黄Ⅱ的提取和检测方法[J]. 安徽农业科学，2012，40（32）： 15908-15910.

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