二种中药水提取物对荷瘤小鼠免疫功能的影响

敖亮+潘正刚+何昌栋+杨松涛

摘要：目的探讨中药生地及菟丝子水提物对S180荷瘤小鼠肿瘤细胞免疫及体液免疫的影响。方法选取接种S180肿瘤7d的荷瘤小鼠，抽取乳白色腹水并用无菌生理盐水稀释成1×10个/L细胞悬液（活细胞比率>95%），在小鼠右前肢腋窝皮下注射0.2 mL肿瘤细胞悬液，制成实体瘤动物模型。设空白对照组，肿瘤对照组，菟丝子低剂量组、高剂量组，生地低剂量组、高剂量组，每组10只，按0.02 mL/g给予灌胃12天后，将小鼠摘除眼球静脉取血1～2 mL，进行C3、C4、IgG、CD4、CD8检测并分析。结果在 C3（1∶5）OD值浓度中，与肿瘤对照组比较，菟丝子低剂量组P<0.01，菟丝子高剂量组及生地低、高剂量组P>0.05；在C4（1∶10）OD值浓度中，与肿瘤对照组比较，菟丝子低、高剂量组P值均<0.01，生地高剂量组P<0.05；但生地高剂量组，菟丝子低、高剂量组间比较，P>0.05，无明显差异。在IgG（1∶5000）中，与肿瘤对照组比较，生地低、高剂量组P<0.01，在CD4（1∶5）中，与肿瘤对照组比较，生地高剂量P<0.05；在 CD8（1∶1）中，与肿瘤对照组比较，菟丝子低剂量组P<0.05。结论生地及菟丝子水提物可增强小鼠体液免疫及细胞免疫，以增强体液免疫为主，可提高荷瘤小鼠的免疫功能。

关键词：S180荷瘤小鼠；中药影响；细胞免疫；体液免疫

中图分类号：R285.5文献标志码：A文章编号：1007-2349（2014）03-0056-02

中医理论认为，肿瘤病的特点是“正虚邪实”。《医宗必读》说：“积之成也，正气不足，而后邪气踞之。”现代医学证实机体免疫力低下是肿瘤形成的主要原因之一。[1]研究中药提高机体的功能状况，改善免疫功能而非直接去杀癌细胞。调节机体免疫功能状态，使机体的抗肿瘤免疫功能得以加强.是中药抗肿瘤重要机制之一。本实验研究生地及菟丝对S180荷瘤小鼠肿瘤生长对细胞免疫及体液免疫的影响。

1材料与方法

1.1主要材料健康km小鼠，雌性（20±2）g。购于四川省简阳达硕动物有限公司。S180肉瘤细胞株由成都中医药大学实验室提供。生地及菟丝，购于成都中医药大学附属医院，经鉴定符合药典标准。

1.2实验方法

1.2.1制取药物根据中国药典2000年版（按成人60 kg体重计算用量（地黄9～15 g，菟丝6～12 g）及临床用药量的药效，菟丝子100 g，生地黄300 g粉碎后常规以10、8、6倍水煮沸后温火煮90、60、45 min去渣取汁，合并3次药液，进一步经水浴锅水浴浓缩为1.0 g/mL的浓缩液，菟丝子100 mL、地黄300 mL入冰箱2度冷藏。

1.2.2动物造模、分组及给药选取接种S180肿瘤7d的荷瘤腹水小鼠，抽取乳白色腹水并用无菌生理盐水稀释成1×10个/L细胞悬液（活细胞比率﹥95%），在小鼠右腋皮下注射0.2 mL肿瘤细胞悬液，制成实体瘤动物模型[2]。将荷瘤小鼠随机分为6组，每组10只，分别设计空白对照组，肿瘤对照组，菟丝子低倍组（5倍剂），菟丝子高倍组（10倍剂），生地低倍组（5倍剂），生地高倍组（10倍剂）。阴性对照组灌服生理盐水0.2 mL，阳性对照组分别按5倍、10倍剂量灌服中药0.2 mL，灌胃量为0.025 g/mL，0.2 mL/d，连续用药12 d后，将小鼠摘除眼球静脉取血1～2 mL，进行C3、C4、IgG、CD4、CD8检测并分析。

1.2.3取材将小鼠摘除眼球静脉取血1～2 mL，取血后用ELISAS试剂盒检测C3、C4、IGG、CD4、CD8的值。

1.3统计学分析数据用SPSS17.0统计软件处理，组间比较采用t检验，数据以（x±s）表示，P<0.05为差异，具有统计学意义。

2实验结果

3讨论

根据每天观察小鼠毛发，精神状态，活动量及排尿量对照，空白对照组，健康小鼠皮毛洁白，有光泽，精神状态好，活动量大，排尿少，垫料干燥。肿瘤对照组，荷瘤小鼠皮毛稀疏，无光泽，精神萎靡，活动少，外力刺激，缓慢移动，排尿多，垫料较湿，中药灌服组在两者之间。在体液免疫中，C3（1∶5）OD值浓度中，与肿瘤对照组比较，菟丝子低倍剂量P<0.01，证明菟丝子低倍剂量对体液免疫中的C3有影响作用，菟丝子高倍组及生地A、B与肿瘤对照组比较，P>0.05，说明对C3浓度无免疫作用。在C4（1∶10）OD值浓度中，生地高倍剂量P<0.05，对体液免疫中的C4有响作用，菟丝子低倍剂量及菟丝子高倍剂量均P<0.01，对体液免疫中的C4有明显影响作用，但在生地高倍剂量，菟丝子低倍剂量及菟丝子高倍剂量中组间比较，P>0.05，无明显差异。在IgG（1∶5000）中，生地低剂量与生地高剂量组均P<0.01，对IgG免疫有显著影响作用。在细胞免疫中，CD4（1∶5）中生地高剂量P<0.05，对细胞免疫有影响作用，CD8（1∶1）中菟丝子低剂量P<0.05，对细胞免疫有影响作用。在解剖小鼠过程中，肿瘤组肝脏明显肿大，充血明显，中药灌服组肝脏肿大及充血没有肿瘤组明显，怀疑是肝脏静脉回流受阻，出现肝脏肿大，中药对肝脏肿大有一定抑制作用。根据观察肝脏及ELISAS试剂盒检测C3、C4、IGG、CD4、CD8值结果显示，可以推断生地及菟丝可增强小鼠体液免疫及细胞免疫，以增强体液免疫位为主，可提高荷瘤小鼠的免疫功能。

参考文献：

[1]周洁，李竹庭 中药与肿瘤免疫[J].天津中医药 2004，21（3）.

[2]杨悦，姬宏飞，王波，安巍巍红松松塔加压热提取物对S180荷瘤小鼠肿瘤生长及胸腺、脾指数的影响[J].实用肿瘤学杂志 2011，25（3）：37.endprint

摘要：目的探讨中药生地及菟丝子水提物对S180荷瘤小鼠肿瘤细胞免疫及体液免疫的影响。方法选取接种S180肿瘤7d的荷瘤小鼠，抽取乳白色腹水并用无菌生理盐水稀释成1×10个/L细胞悬液（活细胞比率>95%），在小鼠右前肢腋窝皮下注射0.2 mL肿瘤细胞悬液，制成实体瘤动物模型。设空白对照组，肿瘤对照组，菟丝子低剂量组、高剂量组，生地低剂量组、高剂量组，每组10只，按0.02 mL/g给予灌胃12天后，将小鼠摘除眼球静脉取血1～2 mL，进行C3、C4、IgG、CD4、CD8检测并分析。结果在 C3（1∶5）OD值浓度中，与肿瘤对照组比较，菟丝子低剂量组P<0.01，菟丝子高剂量组及生地低、高剂量组P>0.05；在C4（1∶10）OD值浓度中，与肿瘤对照组比较，菟丝子低、高剂量组P值均<0.01，生地高剂量组P<0.05；但生地高剂量组，菟丝子低、高剂量组间比较，P>0.05，无明显差异。在IgG（1∶5000）中，与肿瘤对照组比较，生地低、高剂量组P<0.01，在CD4（1∶5）中，与肿瘤对照组比较，生地高剂量P<0.05；在 CD8（1∶1）中，与肿瘤对照组比较，菟丝子低剂量组P<0.05。结论生地及菟丝子水提物可增强小鼠体液免疫及细胞免疫，以增强体液免疫为主，可提高荷瘤小鼠的免疫功能。

关键词：S180荷瘤小鼠；中药影响；细胞免疫；体液免疫

中图分类号：R285.5文献标志码：A文章编号：1007-2349（2014）03-0056-02

中医理论认为，肿瘤病的特点是“正虚邪实”。《医宗必读》说：“积之成也，正气不足，而后邪气踞之。”现代医学证实机体免疫力低下是肿瘤形成的主要原因之一。[1]研究中药提高机体的功能状况，改善免疫功能而非直接去杀癌细胞。调节机体免疫功能状态，使机体的抗肿瘤免疫功能得以加强.是中药抗肿瘤重要机制之一。本实验研究生地及菟丝对S180荷瘤小鼠肿瘤生长对细胞免疫及体液免疫的影响。

1材料与方法

1.1主要材料健康km小鼠，雌性（20±2）g。购于四川省简阳达硕动物有限公司。S180肉瘤细胞株由成都中医药大学实验室提供。生地及菟丝，购于成都中医药大学附属医院，经鉴定符合药典标准。

1.2实验方法

1.2.1制取药物根据中国药典2000年版（按成人60 kg体重计算用量（地黄9～15 g，菟丝6～12 g）及临床用药量的药效，菟丝子100 g，生地黄300 g粉碎后常规以10、8、6倍水煮沸后温火煮90、60、45 min去渣取汁，合并3次药液，进一步经水浴锅水浴浓缩为1.0 g/mL的浓缩液，菟丝子100 mL、地黄300 mL入冰箱2度冷藏。

1.2.2动物造模、分组及给药选取接种S180肿瘤7d的荷瘤腹水小鼠，抽取乳白色腹水并用无菌生理盐水稀释成1×10个/L细胞悬液（活细胞比率﹥95%），在小鼠右腋皮下注射0.2 mL肿瘤细胞悬液，制成实体瘤动物模型[2]。将荷瘤小鼠随机分为6组，每组10只，分别设计空白对照组，肿瘤对照组，菟丝子低倍组（5倍剂），菟丝子高倍组（10倍剂），生地低倍组（5倍剂），生地高倍组（10倍剂）。阴性对照组灌服生理盐水0.2 mL，阳性对照组分别按5倍、10倍剂量灌服中药0.2 mL，灌胃量为0.025 g/mL，0.2 mL/d，连续用药12 d后，将小鼠摘除眼球静脉取血1～2 mL，进行C3、C4、IgG、CD4、CD8检测并分析。

1.2.3取材将小鼠摘除眼球静脉取血1～2 mL，取血后用ELISAS试剂盒检测C3、C4、IGG、CD4、CD8的值。

1.3统计学分析数据用SPSS17.0统计软件处理，组间比较采用t检验，数据以（x±s）表示，P<0.05为差异，具有统计学意义。

2实验结果

3讨论

根据每天观察小鼠毛发，精神状态，活动量及排尿量对照，空白对照组，健康小鼠皮毛洁白，有光泽，精神状态好，活动量大，排尿少，垫料干燥。肿瘤对照组，荷瘤小鼠皮毛稀疏，无光泽，精神萎靡，活动少，外力刺激，缓慢移动，排尿多，垫料较湿，中药灌服组在两者之间。在体液免疫中，C3（1∶5）OD值浓度中，与肿瘤对照组比较，菟丝子低倍剂量P<0.01，证明菟丝子低倍剂量对体液免疫中的C3有影响作用，菟丝子高倍组及生地A、B与肿瘤对照组比较，P>0.05，说明对C3浓度无免疫作用。在C4（1∶10）OD值浓度中，生地高倍剂量P<0.05，对体液免疫中的C4有响作用，菟丝子低倍剂量及菟丝子高倍剂量均P<0.01，对体液免疫中的C4有明显影响作用，但在生地高倍剂量，菟丝子低倍剂量及菟丝子高倍剂量中组间比较，P>0.05，无明显差异。在IgG（1∶5000）中，生地低剂量与生地高剂量组均P<0.01，对IgG免疫有显著影响作用。在细胞免疫中，CD4（1∶5）中生地高剂量P<0.05，对细胞免疫有影响作用，CD8（1∶1）中菟丝子低剂量P<0.05，对细胞免疫有影响作用。在解剖小鼠过程中，肿瘤组肝脏明显肿大，充血明显，中药灌服组肝脏肿大及充血没有肿瘤组明显，怀疑是肝脏静脉回流受阻，出现肝脏肿大，中药对肝脏肿大有一定抑制作用。根据观察肝脏及ELISAS试剂盒检测C3、C4、IGG、CD4、CD8值结果显示，可以推断生地及菟丝可增强小鼠体液免疫及细胞免疫，以增强体液免疫位为主，可提高荷瘤小鼠的免疫功能。

参考文献：

[1]周洁，李竹庭 中药与肿瘤免疫[J].天津中医药 2004，21（3）.

[2]杨悦，姬宏飞，王波，安巍巍红松松塔加压热提取物对S180荷瘤小鼠肿瘤生长及胸腺、脾指数的影响[J].实用肿瘤学杂志 2011，25（3）：37.endprint

摘要：目的探讨中药生地及菟丝子水提物对S180荷瘤小鼠肿瘤细胞免疫及体液免疫的影响。方法选取接种S180肿瘤7d的荷瘤小鼠，抽取乳白色腹水并用无菌生理盐水稀释成1×10个/L细胞悬液（活细胞比率>95%），在小鼠右前肢腋窝皮下注射0.2 mL肿瘤细胞悬液，制成实体瘤动物模型。设空白对照组，肿瘤对照组，菟丝子低剂量组、高剂量组，生地低剂量组、高剂量组，每组10只，按0.02 mL/g给予灌胃12天后，将小鼠摘除眼球静脉取血1～2 mL，进行C3、C4、IgG、CD4、CD8检测并分析。结果在 C3（1∶5）OD值浓度中，与肿瘤对照组比较，菟丝子低剂量组P<0.01，菟丝子高剂量组及生地低、高剂量组P>0.05；在C4（1∶10）OD值浓度中，与肿瘤对照组比较，菟丝子低、高剂量组P值均<0.01，生地高剂量组P<0.05；但生地高剂量组，菟丝子低、高剂量组间比较，P>0.05，无明显差异。在IgG（1∶5000）中，与肿瘤对照组比较，生地低、高剂量组P<0.01，在CD4（1∶5）中，与肿瘤对照组比较，生地高剂量P<0.05；在 CD8（1∶1）中，与肿瘤对照组比较，菟丝子低剂量组P<0.05。结论生地及菟丝子水提物可增强小鼠体液免疫及细胞免疫，以增强体液免疫为主，可提高荷瘤小鼠的免疫功能。

关键词：S180荷瘤小鼠；中药影响；细胞免疫；体液免疫

中图分类号：R285.5文献标志码：A文章编号：1007-2349（2014）03-0056-02

中医理论认为，肿瘤病的特点是“正虚邪实”。《医宗必读》说：“积之成也，正气不足，而后邪气踞之。”现代医学证实机体免疫力低下是肿瘤形成的主要原因之一。[1]研究中药提高机体的功能状况，改善免疫功能而非直接去杀癌细胞。调节机体免疫功能状态，使机体的抗肿瘤免疫功能得以加强.是中药抗肿瘤重要机制之一。本实验研究生地及菟丝对S180荷瘤小鼠肿瘤生长对细胞免疫及体液免疫的影响。

1材料与方法

1.1主要材料健康km小鼠，雌性（20±2）g。购于四川省简阳达硕动物有限公司。S180肉瘤细胞株由成都中医药大学实验室提供。生地及菟丝，购于成都中医药大学附属医院，经鉴定符合药典标准。

1.2实验方法

1.2.1制取药物根据中国药典2000年版（按成人60 kg体重计算用量（地黄9～15 g，菟丝6～12 g）及临床用药量的药效，菟丝子100 g，生地黄300 g粉碎后常规以10、8、6倍水煮沸后温火煮90、60、45 min去渣取汁，合并3次药液，进一步经水浴锅水浴浓缩为1.0 g/mL的浓缩液，菟丝子100 mL、地黄300 mL入冰箱2度冷藏。

1.2.2动物造模、分组及给药选取接种S180肿瘤7d的荷瘤腹水小鼠，抽取乳白色腹水并用无菌生理盐水稀释成1×10个/L细胞悬液（活细胞比率﹥95%），在小鼠右腋皮下注射0.2 mL肿瘤细胞悬液，制成实体瘤动物模型[2]。将荷瘤小鼠随机分为6组，每组10只，分别设计空白对照组，肿瘤对照组，菟丝子低倍组（5倍剂），菟丝子高倍组（10倍剂），生地低倍组（5倍剂），生地高倍组（10倍剂）。阴性对照组灌服生理盐水0.2 mL，阳性对照组分别按5倍、10倍剂量灌服中药0.2 mL，灌胃量为0.025 g/mL，0.2 mL/d，连续用药12 d后，将小鼠摘除眼球静脉取血1～2 mL，进行C3、C4、IgG、CD4、CD8检测并分析。

1.2.3取材将小鼠摘除眼球静脉取血1～2 mL，取血后用ELISAS试剂盒检测C3、C4、IGG、CD4、CD8的值。

1.3统计学分析数据用SPSS17.0统计软件处理，组间比较采用t检验，数据以（x±s）表示，P<0.05为差异，具有统计学意义。

2实验结果

3讨论

根据每天观察小鼠毛发，精神状态，活动量及排尿量对照，空白对照组，健康小鼠皮毛洁白，有光泽，精神状态好，活动量大，排尿少，垫料干燥。肿瘤对照组，荷瘤小鼠皮毛稀疏，无光泽，精神萎靡，活动少，外力刺激，缓慢移动，排尿多，垫料较湿，中药灌服组在两者之间。在体液免疫中，C3（1∶5）OD值浓度中，与肿瘤对照组比较，菟丝子低倍剂量P<0.01，证明菟丝子低倍剂量对体液免疫中的C3有影响作用，菟丝子高倍组及生地A、B与肿瘤对照组比较，P>0.05，说明对C3浓度无免疫作用。在C4（1∶10）OD值浓度中，生地高倍剂量P<0.05，对体液免疫中的C4有响作用，菟丝子低倍剂量及菟丝子高倍剂量均P<0.01，对体液免疫中的C4有明显影响作用，但在生地高倍剂量，菟丝子低倍剂量及菟丝子高倍剂量中组间比较，P>0.05，无明显差异。在IgG（1∶5000）中，生地低剂量与生地高剂量组均P<0.01，对IgG免疫有显著影响作用。在细胞免疫中，CD4（1∶5）中生地高剂量P<0.05，对细胞免疫有影响作用，CD8（1∶1）中菟丝子低剂量P<0.05，对细胞免疫有影响作用。在解剖小鼠过程中，肿瘤组肝脏明显肿大，充血明显，中药灌服组肝脏肿大及充血没有肿瘤组明显，怀疑是肝脏静脉回流受阻，出现肝脏肿大，中药对肝脏肿大有一定抑制作用。根据观察肝脏及ELISAS试剂盒检测C3、C4、IGG、CD4、CD8值结果显示，可以推断生地及菟丝可增强小鼠体液免疫及细胞免疫，以增强体液免疫位为主，可提高荷瘤小鼠的免疫功能。

参考文献：

[1]周洁，李竹庭 中药与肿瘤免疫[J].天津中医药 2004，21（3）.

[2]杨悦，姬宏飞，王波，安巍巍红松松塔加压热提取物对S180荷瘤小鼠肿瘤生长及胸腺、脾指数的影响[J].实用肿瘤学杂志 2011，25（3）：37.endprint