硝酸益康唑克霉唑乳膏的制备及质量控制

2014-10-16高松田徐兴亚

实用药物与临床 2014年1期

高松田，徐兴亚，周泉

0 引言

手足癣［1］(Tinea manuum and pedis)是皮肤科临床中的常见病和多发病，一般外用单方或复方抗真菌药物。我所临床常使用益康唑克霉唑癣药水［2］(双唑癣药水，苏药制字 H04002328)，但因其二甲基亚砜含量达40%，乙醇含量达50%以上，对皮肤有一定的刺激作用。所以，笔者根据需要研制了硝酸益康唑克霉唑乳膏，临床疗效显著，现将其制备和质量控制方法报道如下。

1 仪器与试药

Shimadzu Lc-20Ad HPLC色谱仪(日本岛津)，Shimadzu Spd-M20a检测器，Shimadzu Lc Solution色谱工作站;Mettler AB135-S电子分析天平(十万分之一，德国梅特勒公司)。

硝酸益康唑对照品(中国药品生物制品检定所，批号:100214-199802，含量:100.0%);硝酸益康唑原料(药用，江苏恩华药业股份有限公司，批号:20111102，含量:99.3%);克霉唑对照品(中国药品生物制品检定所，批号:100037-200306，含量:100.0%)、克霉唑原料(药用，常州亚邦制药有限公司，批号:20110401，含量:99.1%);硝酸益康唑克霉唑乳膏［扬州市疾病预防控制中心皮肤病性病防治所制剂室自制，规格:30 g/盒(克霉唑0.3 g，硝酸益康唑 0.3 g)，批号:20120814、20120824］。液状石蜡、甘油等辅料均为药用规格，甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为扬州制药厂生产的超纯水。

健康家兔4只，体重3.8～4.2 kg，雌雄各半，扬州大学农学院提供，实验动物生产许可证号:SCXK(苏)2005-0003。

2 处方及制备

2.1 处方克霉唑1 g，硝酸益康唑1 g，液状石蜡10 g，聚山梨酯-80 3.5 g，脱水山梨醇油酸酯1.5 g，单硬脂酸甘油酯5 g，十六醇10 g，白凡士林5 g，甘油10 g，羟苯乙酯0.5 g，二甲基亚砜6 mL，纯化水48 mL，总量为100 g。

2.2 制备方法取单硬脂酸甘油酯、十六醇、白凡士林及液状石蜡加热熔解至75℃左右(油相);另取甘油、聚山梨酯-80、脱水山梨醇油酸酯、羟苯乙酯，纯化水加热至75℃左右(水相)，将油相缓缓加入水相中，随加随搅，温度至50℃，加入克霉唑硝酸益康唑二甲基亚砜(克霉唑和硝酸益康唑溶于二甲基亚砜溶液中)溶液，搅匀即得。

3 质量控制

3.1 性状本品为白色乳膏

3.2 鉴别

3.2.1 克霉唑［3］①取本品适量(约相当于克霉唑20 mg)，加0.5 mol/L硫酸溶液10 mL，在水浴中微温，搅拌使克霉唑溶解，放冷，滤过，取滤液2 mL，加三硝基苯酚试液数滴即生成黄色沉淀。②取上述滤液1 mL，缓缓滴加硫酸1 mL，并不断振摇，溶液显橙黄色，加水3 mL稀释后颜色消失;再加硫酸3 mL，复显橙黄色。

3.2.2 硝酸益康唑［3］取含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间与对照品溶液主峰的保留时间一致。

3.3 检查应符合2010版《中国药典》(二部)附录中乳膏剂项下有关的各项规定［3］。

3.4 含量测定

3.4.1 溶液的制备 ①供试品溶液的制备:取本品约1 g(相当于克霉唑与硝酸益康唑各10 mg)，精密称定，置100 mL量瓶中，加甲醇75 mL，置75℃水浴中温热5 min，时时振摇，取出后强烈振摇5 min，使克霉唑与硝酸益康唑充分溶解，冷却至室温，用磷酸盐缓冲液稀释至刻度，摇匀，置冰浴中2 h，滤膜滤过，取续滤液放至室温作为供试品溶液。②对照品溶液的制备:精密称取克霉唑与硝酸益康唑各10 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇75 mL使溶解，用磷酸盐缓冲液稀释至刻度，摇匀，精密量取5 mL，置10 mL量瓶中，用75%甲醇磷酸盐缓冲液溶解并稀释至刻度，制成对照品溶液。③阴性样品溶液的制备:取除克霉唑与硝酸益康唑以外的其他组分，按处方配比配制成空白样品，按供试品溶液的处理方法，制成阴性样品溶液。

3.4.2 色谱条件色谱柱:Alltech Alltima C18(4.6 mm ×150 mm，5 μm)色谱柱;流动相:磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾与磷酸氢二钾各2.5 g，加水溶解并稀释至1 000 mL)-甲醇(25∶75);流速:1.0 mL/min;柱温:18℃;检测波长:264 nm;进样量为20 μL。对照品、供试品和阴性对照色谱图见图1。克霉唑与硝酸益康唑的分离度与理论塔板数均符合要求。阴性对照对测定无干扰。

图1 HPLC图谱

3.4.3 标准曲线的绘制精密称取克霉唑对照品20.26 mg与硝酸益康唑对照品19.48 mg，置同一200 mL量瓶中，加甲醇150 mL使溶解，用磷酸盐缓冲液稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。精密量取对照品储备液 0.25、0.5、2.5、5.0、10.0、25.0、50.0、75.0 mL，分别置 100 mL 量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。精密量取上述溶液各20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，以克霉唑与硝酸益康唑的峰面积(A)对其浓度(C:μg/mL)进行线性回归，回归方程分别为克霉唑A=2.162 9C+1.395 4，r=0.999 9;硝酸益康唑A=2.860 2C+1.420 5，r=0.999 9。结果表明，克霉唑在0.253～101.3 μg/mL、硝酸益康唑在 0.244 ～97.4 μg/mL的范围内均与峰面积呈良好的线性关系。

3.4.4 稳定性试验取批号为20120824的样品，按“3.4.1”项下方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下，在 0、1、2、3、4、6、8 h 分别进样 20 μL，记录各色谱峰峰面积，结果克霉唑与硝酸益康唑色谱峰峰面积的RSD(n=7)分别为1.1%、1.4%，表明供试品溶液在8 h内稳定。

3.4.5 精密度试验取批号为20120824的样品，按“3.4.1”项下方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下连续进样5次，克霉唑与硝酸益康唑色谱峰峰面积的RSD(n=5)分别为0.8%、1.0%。

3.4.6 回收率试验称取批号为20120824的样品9份，每份约0.25 g，精密称定，分别置50 mL量瓶中。精密称取克霉唑对照品19.80 mg与硝酸益康唑对照品20.49 mg，置同一50 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2.0、3.0、5.0 mL各3份，分别加入上述9个50 mL量瓶中，按“3.4.1”项下的方法制备供试品溶液。精密量取20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图。结果显示克霉唑与硝酸益康唑的回收率分别为99.87%、101.11%，RSD%分别为 1.4%、1.8%。见表1。