微量离心柱法检测肝癌患者血清甲胎蛋白异质体临床意义分析＊

黄海深，周永均，何兰香，李宇鸣，唐光定，陈国强（.清远市阳山县人民医院检验科，广东清远 5300；.清远市阳山县疾控中心，广东清远 5300）

原发性肝细胞癌（PLC）是最常见的恶性肿瘤之一，且病情进展快，疗效欠佳，病死率较高［1］。近年来，国内PLC发病率呈明显上升的趋势。早期诊治是PLC患者达到最佳治疗效果的关键。甲胎蛋白（AFP）是当前用于PLC早期诊断的最有价值的血清肿瘤标志物，其诊断灵敏度较高，但诊断特异度相对较低，有可能导致部分除PLC以外的良性肝病患者也被诊断为PLC，给PLC的临床诊断和鉴别诊断带来一定的困难［2］。AFP存在多种异质体，依据与小扁豆凝集素（LCA）亲和力的不同，AFP异质体可被分为非结合型（AFP－L1、AFP－L2）和结合型（AFP－L3）。其中AFP－Ll主要出现在良性肝脏疾病中（如慢性肝炎和肝硬化），AFP－L2多由卵黄囊肿癌组织产生，可在孕妇血清中检出，AFP－L3则具有较高的肝癌细胞特异性［3］。已有研究证实，血清AFP－L3对PLC的诊断灵敏度和特异度均高于血清AFP，具有重要的临床应用价值［4］。笔者采用微量离心柱法检测了200例PLC、肝硬化和慢性肝炎患者血清AFP和AFP－L3水平，以探讨血清AFP－L3对PLC的临床诊断价值，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2011年6至2012年10月于阳山县人民医院就诊的PLC及其他肝病患者200例。其中PLC患者80例（PLC组），男58例、女22例，年龄28～71岁，平均（52.3±13.5）岁，均经B超及病理学检查确诊，且符合1999年第四届全国肝癌学术会议修订的PLC诊断标准［5］；肝硬化患者66例（肝硬化组），男48例、女18例，年龄30～68岁，平均（53.1±12.9）岁；慢性肝炎患者54例（慢性肝炎组），男39例、女15例，年龄26～73岁，平均（49.8±11.2）岁。肝硬化及慢性肝炎患者均符合2000年中华医学会传染病与寄生虫病学会、肝病学分会联合修订的病毒性肝炎防治方案中的诊断标准［6］。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 患者禁食12h后，于次日清晨采集空腹静脉血5.0mL，3 000r／min离心10min后分离血清，用于各指标检测。

1.2.2 AFP－L3的分离纯化 采用北京热景生物技术有限公司生产的含有LCA的微量亲和吸附离心管分离纯化AFPL3，具体分离操作严格按照试剂盒操作指南进行。主要原理为：离心柱内装有耦联了LCA的琼脂糖微球（可以特异性结合AFP－L3），当受检者血清流经离心柱时，与LCA结合力强的AFP－L3结合于离心柱内琼脂糖微球表面，经过清洗后，未与琼脂糖微球结合的AFP被洗脱，最后经离心洗脱可获得AFPL3。

1.2.3 AFP的检测 采用郑州安图公司LUMO化学发光分析仪及配套试剂分别检测血清中的总AFP水平和经LCA亲和纯化后的AFP－L3水平，再计算AFP－L3在总AFP中所占比例（AFP－L3%）。以 AFP＞25ng／mL、AFP－L3%≥10%作为临床判断AFP、AFP－L3异常升高的标准，检测结果超过上述标准时，判为检测结果阳性。

1.3 统计学处理 采用SPSS13.0统计学软件进行数据分析；计量资料以表示，组间比较采用t检验；计数资料以百分率表示，组间比较采用卡方检验；P＜0.05为比较差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各研究组血清AFP、AFP－L3%水平和阳性率比较 PLC组患者血清AFP、AFP－L3%水平均高于肝硬化组和慢性肝炎组（P＜0.05）。以 AFP＞25ng／mL，AFP－L3%≥10%作为阳性判断标准，PLC组患者血清AFP阳性率高于肝硬化组和慢性肝炎组（P＜0.05），PLC组患者血清 AFP－L3%阳性率也高于肝硬化组和慢性肝炎组（P＜0.05），见表1。

表1 各研究组患者血清AFP、AFP－L3%水平和阳性率比较

2.2 不同AFP水平PLC患者血清AFP－L3%水平和阳性率比较 根据血清AFP水平，将PLC患者分为AFP低水平组（AFP＜200ng／mL）、AFP中水平组（200～400ng／mL）、AFP高水平组（AFP＞400ng／mL），各组患者间血清 AFP－L3%水平和阳性率比较差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

表2 不同AFP水平PLC患者血清AFP－L3%水平和阳性率比较

3 讨 论

PLC是一种严重威胁人体生命健康的疾病，就全球范围而言，在癌症类疾病中，PLC患者病死率居第三位，仅次于胃癌和肺癌，国内每年PLC死亡患者占全世界PLC死亡患者总数中的45%［7］。至今为止，AFP仍是临床用于诊断PLC的最重要肿瘤标志物，已被广泛用于PLC筛查、诊断、疗效评价和预后评估等。但妊娠、活动性肝病、胚胎性肿瘤等因素也可导致血清AFP浓度出现不同程度的升高，这给PLC的临床诊断带来了很大的困难。尤其对于血清AFP浓度尚未出现明显升高的PLC患者而言，仅检测血清AFP很难实现与肝硬化、慢性肝炎的鉴别诊断［8］。本研究结果显示，PLC患者血清AFP水平虽然明显高于肝硬化和慢性肝炎患者，但肝硬化和肝炎患者血清AFP水平也有不同程度的升高，以AFP＞25ng／mL作为阳性判断标准，肝硬化和慢性肝炎患者中还是存在较高的AFP阳性率。因此，单纯血清AFP检测在良、恶性肝病鉴别诊断方面存在一定的局限性，有必要寻找敏感性和特异性更高的PLC诊断标志物［9］。

在PLC临床诊断中，AFP仍然具有不可替代的作用，但随着对其研究的不断深入，AFP－L3在PLC早期诊断、鉴别诊断、疗效评价和预后评估等方面的应用价值逐渐受到重视。AFPL3是Purves等［10］于1970年首次发现的LCA结合型AFP异质体，为肝癌细胞所特有。研究还发现，AFP－L3的阳性率与PLC肿瘤组织体积大小及血清总AFP浓度无关，对血清AFP浓度较低的PLC具有较高的早期诊断价值，且相比影像学检查，血清AFP－L3检测可使PLC的诊断时间提前9～12个月［11］。本研究结果显示，不同 AFP浓度的PLC患者血清AFP－L3%水平和阳性率比较差异无统计学意义（P＞0.05），提示血清AFP－L3%在低血清AFP浓度PLC的早期诊断和PLC与良性肝病的鉴别诊断中具有极为重要的价值［12］。美国食品药品监督管理局（FDA）已于2005年10月批准将AFP－L3应用于临床，国内在1999年第四届全国肝癌学术会议上也将AFP－L3列为诊断肝癌的特异性指标。此外，AFP－L3还与PLC的恶性程度相关，可用于PLC疗效评价和预后评估，也可以用作良、恶性肝病鉴别诊断及良性肝病恶变的预警指标［13－15］。

本研究显示，以AFP－L3%≥10%作为诊断PLC的阳性判断标准，则PLC患者AFP－L3%阳性率为87.5%，明显高于肝硬化组（25.8%）和慢性肝炎组（24.1%）的阳性率（P＜0.05）；尤其在AFP＜200ng／mL的低浓度PLC患者中，AFP－L3%阳性率为86.7%，与肝硬化和慢性肝炎患者比较差异亦有统计学意义（P＜0.05）。上述结果也证实AFP－L3%适用于低血清AFP浓度PLC患者的早期诊断，对PLC与慢性肝炎、肝硬化等良性肝病的鉴别诊断具有重要意义。尤其是低血清AFP浓度的慢性肝炎、肝硬化等良性肝病患者，定期检测、动态监测血清AFP－L3%水平，有助于及时发现疾病的恶变倾向，尽早明确诊断［16］。与此同时，对于AFP－L3%≥10%的肝病患者，有必要进行定期随访和密切追踪。

AFP－L3检测方法多利用其具有与LCA特异性结合的特性建立和发展而来，其中亲和吸附离心管法因技术成熟，临床应用较多［17］。本研究中采用的国产微量离心柱法试剂对在血清AFP－L3分离纯化和检测方面具有操作简便快捷、稳定性好、成本低廉等特点，适宜在基层医疗机构中推广应用［18］。

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