沈阳市及周边地区规模化猪场猪繁殖与呼吸障碍综合征疫苗免疫效果及病原调查

耿庆华，胡 殊，付海滨

（沈阳出入境检验检疫局，辽宁 沈阳 110016）

猪繁殖与呼吸系统综合征（porcine reproductive and respiration syndrome，PRRS）俗称猪蓝耳病，是由猪生殖和呼吸系统综合征病毒引起的目前危害养猪业的主要疾病之一，主要表现为母猪繁殖障碍及不同日龄猪的呼吸道症状[1-2]。我国在1996年由郭宝清等首次在国内疑似PRRSV感染的猪群中分离出PRRSV[3]，证明了该病毒在我国的存在，目前已遍及全国绝大部分省份，多数集约化猪场都遭受到了PRRSV的侵袭。尤其是2006年以来由PRRSV变异株引起的高致病性猪蓝耳病，仔猪发病率高达100%，死亡率50%以上，同时也可造成母猪的高流产率，目前已是严重威胁我国养猪业发展的重要疫病之一[4-6]。本次调查是为了解沈阳市及周边地区近几年该病的感染发病情况和规模化猪场的疫苗保护效果，对沈阳市规模化猪场制定科学的免疫程序起到了指导作用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病料及血清来源 2011年1月～2013年6月，在沈阳市及周边16个市（县）地区的猪场和屠宰场现场采集病料（包括扁桃体、肺脏、脾脏、淋巴结等样品），共收集3 340份病料样品；采集沈阳市5个规模化猪场902份血清样品，送至本实验室检测。

1.1.2 主要试剂及仪器 磁珠核酸提取试剂盒、RT-PCR试剂（包括Taq DNA聚合酶、RNase Inhibitor、dNTP、DL2000、AMV反转录酶、DL2000 Marker），购于宝生物工程（大连）有限公司；无水乙醇、异丙醇等分析试剂，均为国产分析纯试剂；猪繁殖与呼吸障碍综合征抗体检测试剂盒，购自法国LSI公司。

1.2 方法

1.2.1 病毒核酸的提取 组织样品经研磨后，反复冻融3次，然后以10 000 r/min离心10 min，取上清液用Ambion的磁珠核酸提取试剂盒说明书操作提取病毒核酸。

1.2.2 RT-PCR方法检测样品 利用本实验室建立的检测PRRSV的RT-PCR方法检测送检样品。逆转录反应在20μL体系中进行，包括提取样品总RNA 5μL，反转录溶液：50 mmol/LTris-HCl（pH 8.3）、75 mmol/L KCl、3 mmol/L MgCl2、10 mmol/L DTT 4μL、dNTP 6μL、50 pmol/L PRRSV反转录引物1μL、AMV反转录酶（200 U/μL）1μL和RNA酶抑制剂（40 U/μL）1μL，用DEPC水补足至20μL，42℃水浴1 h，70℃ 5 min。将反转录的cDNA于-20℃保存。PCR反应：10×PCR缓冲液5.0μL，ExTaq DNA聚合酶0.5μL，2.5 mmol/L dNTPs 1.0μL，上、下游引物各1.8μL（浓度为10μmol/L），反转录产物cDNA 2.0μL，加DEPC水至50μL。反应条件为：94℃预变性5 min，94℃变性60 s，56℃退火40 s，72℃延伸40 s，共35个循环，72℃延伸10 min。PCR产物利用1%的琼脂糖凝胶电泳检测。

1.2.3 猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒抗体检测方法猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒抗体利用猪繁殖与呼吸障碍综合征抗体检测试剂盒检测。

2 结果

2.1 猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒感染情况检测结果 对来自辽宁地区沈阳、大连、鞍山16个市（县）地区的猪场和屠宰场的样品，猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒感染情况见表1。

表1 2011～2013年猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒感染情况调查表Table1 Survey of PRRS viralinfection in 2011～2013

由表1可知，2011年辽宁省猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒的阳性率为9.28%，2012年为27.3%，2013年上半年为0.6%，3年平均阳性率为12.1%，其中来自丹东和绥中地区的猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒的阳性率最高，分别为36.9%和57.1%。

2

2..22 沈阳市规模化猪场猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒疫苗免疫抗体水平监测 对来自辽宁地区沈阳等地的5个注射过猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒疫苗规模化养猪场采集的株血清进行监测，3年来5个猪场猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒疫苗免疫抗体监测情况详见表2。

表2 2011～2013年猪场猪繁殖与呼吸障碍综合征疫苗免疫效果情况调查表Table2 The imm une effect of PRRS vaccine in 2011～2013

由表2可知，2011年5个猪场猪繁殖与呼吸障碍综合征疫苗免疫抗体合格率为97.3%，2012年为98.8%，2013年上半年为94.8%，3年平均阳性率为97.5%。

2.3 猪场猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒仔猪母源抗体监测情况 对某猪场经过猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒疫苗免疫过母猪产下的仔猪进行母源抗体的检测，分别在仔猪哺乳前、7日龄、14日龄、21日龄、35日龄、42日龄和49日龄时采血分离血清检测仔猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒母源抗体。

如图1所示，仔猪猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒母源抗体在7日龄时达到最大值，直到21日龄维持在较高水平，之后呈现下降趋势。

3 讨论

相比规模化程度较小或散养户而言，规模化程度较高的猪场无论是在蓝耳病抗体免疫阳性率还是在抗体离散度方面均优于较小规模猪场，这应该与规模化猪场较合理、科学的免疫程序应用相关。目前，由于PRRS没有特效治疗措施，从而接种疫苗成为PRRS的主要防控手段，而PRRS会损害免疫系统引起并发和继发感染，甚至会导致免疫失败。因此，养猪业应时刻保持对猪蓝耳病的高度警惕，尤其是较小规模的养殖场更应该高度重视蓝耳病的防控工作，适时接种疫苗，建立个性化猪蓝耳病疫苗免疫程序，平时加强免疫效果的监测工作，配合加强日常饲养管理，是当前猪场防制猪蓝耳病的有效方法。

图1 仔猪PRRSV母源抗体消长规律Fig.1 The grow th and decline law of PRRSV m aternal antibody in pig lets

[1]赵德明，张中秋译.猪病学[M].北京：中国农业大学出版社，2000：205.

[2]Lunnet J K,Rockland B.Immune parameters may signal why some pigs clear PRRS virus[J].Nat Hog Farmer,2007,52(1):12-21.

[3]郭宝清，陈章水，刘文兴，等.从疑似PRRS流产胎儿分离PRRSV的研究[J].中国畜禽传染病，1996，87（2）：1-5.

[4]Rosina S,Dot ti S,Martel li P.How to avoid the introduction of porcine reproductive and respiratory syndrome virus onto afarm[J].Rivista di Suinicoltra,2007,48(4):96-98.

[5]赵爱华，李玉文，齐欣.关于辽宁省规模猪场高致病性猪蓝耳病流行及防控情况的调研报告[J].现代畜牧兽医，2013，2：34-35.

[6]Dotii S,Rosina S,Mar telii P.Porcine reproductive and respir tory syndrome good control limits economic losses[J].Rivistadi Suinicoltura,2007,48(5):28-32.