复方柴胡提取物中空栓制备工艺优选及质量控制

李 丽，李 璐，王金莉

（1.辽宁医学院畜牧兽医学院，辽宁 锦州 121001；2.辽宁省营口市鲅鱼圈区动物疫病预防控制中心，辽宁 营口 115007）

柴胡（Bupleuri Radix）为伞形科植物柴胡（Bupleurum chinense DC.）或狭叶柴胡（Bupleurum scorzoneri folium Willd.）的干燥根。柴胡提取物（Radix Bupleuri Extract）主要有效成分为柴胡皂苷和挥发油，具有退热、疏肝解郁、升阳气等功能[1]。本研究采用正交试验优选复方柴胡提取物中空栓制备工艺，并对中空栓质量进行评价。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 仪器 DK-S26型电热恒温水浴锅、DHG-9140型电热恒温鼓风干燥箱，上海精宏实验设备有限公司生产；JJ200型电子天平，上海精密仪器生产。

1.1.2 主要药品及试剂 柴胡提取物由辽宁医学院畜牧兽医学院动物药学实验室提供，1 g相当于原生药15 g；氟尼辛葡甲胺，湖北威德利化学有限责任公司；PEG4000、PEG400，上海江莱生物科技有限公司；半合成脂肪酸甘油酯38#，湖北东信药业有限公司。

1.2 复方柴胡提取物中空栓基质的筛选 选择半合成脂肪酸甘油酯和PEG混合物（在PEG4000中加入30%PEG400）进行试验[2]，以基质与药物的混合均匀程度、硬度、融变时限作为考察指标，对不同基质进行筛选。结果选择半合成脂肪酸甘油酯:PEG混合物（3:1）作为栓剂基质。结果见表1。

表1 复方柴胡提取物中空栓基质筛选Tab le1 Selection of matrix of Com pound Bup leurum extract ho llow suppository

1.3 复方柴胡提取物中空栓剂置换价测定 以柴胡提取物与氟尼辛葡甲胺4:1比例混合物为模型药物，用半合成脂肪酸甘油酯:PEG混合物（3:1）作为栓剂基质，进行置换价测定。

1.3.1 制备纯基质栓 称取适量半合成脂肪酸甘油酯和PEG混合物水浴加热至60℃，熔化后倾入栓剂模型中，室温下静置约1 min，将栓模倒转，使中心未凝的基质流出,形成空腔，冷却。称取适量的半合成脂肪酸甘油酯和PEG混合物填入栓壳内，封口，冷却，刮平，启模得纯基质栓10枚，称重，每粒平均重G克。

1.3.2 制备含药中空栓 称取适量柴胡提取物和氟尼辛葡甲胺混合物，过100目筛，置乳钵中研细。另取半合成脂肪酸甘油酯和PEG混合物适量置蒸发皿中，于水浴上熔化。当基质溶化时，可停止加热，搅拌使全部熔化后倾入栓剂模型中,室温下静置约1 min，将栓模倒转，形成空腔，放冷后称取适量的柴胡提取物和氟尼辛葡甲胺混合物填入壳内，封口，放冷，刮平，启模得含药栓10粒，称重，得每粒平均重M克。每粒含主药量W克。

1.3.3 置换价的计算[2]利用公式计算出复方柴胡提取物中空栓的置换价（displacement value,DV）：

式中，G-纯基质平均栓重；M-含药栓平均栓重；W-每枚栓的平均含药重。

利用测得置换价计算出制备含药栓需要的基质重量x：

式中，y-处方中药物的剂量；n-拟制备栓剂的枚数。

1.4 复方柴胡提取物中空栓制备

1.4.1 正交试验设计 以药物与基质的比例（A）、药液温度（B）及脱模时间（C）为考察因素，以外观质量和融变时限为考察指标，采用L9（34）正交表进行正交试验。因素水平见表2，正交试验设计见表3。

表2 正交试验因素水平表Tab le2 Factors and leve ls of orthogonaltest

1.4.2 质量控制

1.4.2.1 颜色检查 视检，观察栓剂的颜色。

1.4.2.2 硬度检查 触检，感受栓剂硬度。

1.4.2.3 重量差异 取3种药栓各6粒，精密称量总重量，求得平均粒重后，再分别精密称各粒的重量，每粒重量与平均粒重相比较，检查有无超出重量差异限度的药粒。

1.4.2.4 融变时限 指栓剂在规定的检查条件下全部融化、软化变形或溶解的限度要求，取3种药栓样品各1粒，将其固定在铁架台上，将3个装有100 mL水的烧杯放入37℃的水浴锅中预热，将每个药栓分别放入烧杯中，观察其溶解时间及状态。

1.4.2.5 微生物限度 取本品5 g，置0.9%无菌氯化钠溶液50 mL中溶解，量取10 mL，500 r/min离心5 min，弃去药渣，上层液再以3 000 r/min离心30 min，弃去上清液，取底部集菌液2 mL，全部洗入增菌培养基中，依照中国兽药典附录微生物限度检查法检查，判定结果。

1.5 数据处理与统计分析 采用统计软件SPSS 13.0中的单因素方差分析（ONE-WAY ANOVA）进行统计分析，试验数据值以平均值±标准差表示。均值的多重比较采用Duncan法进行。

2 结果

2.1 复方柴胡提取物中空栓基质的筛选 以基质与药物的混合均匀程度、硬度、融变时限作为考察指标，选择半合成脂肪酸甘油酯和PEG混合物对不同基质进行筛选。结果选择半合成脂肪酸甘油酯:PEG混合物（3:1）作为栓剂基质。

2.2 复方柴胡提取物中空栓剂置换价测定 共制备纯基质栓10枚，平均栓重G为0.58 g，共制备含药栓10枚，平均栓重M为0.64 g，每枚栓的平均含药重W为0.13 g，经计算复方柴胡提取物中空栓置换价DV为1.86。根据DV，可进一步计算出制备栓剂所需的基质的量x。

2.3 正交试验设计 以外观和融变时限为评价指标进行综合评分，所占分值比例分别为40%、60%；评分标准为：外观满分10分，共制备10枚栓，每枚栓完整光滑0.5分，混合均匀0.5分，外观评分=外观值/最大外观值×0.4×100；按中国兽药典标准执行，融变时限评分=融变时限/最大融变时限×0.6×100，综合评分=时限评分+外观评分[3]。试验结果见表3，方差分析见表4。

表3 正交试验结果Tab le3 Results of orthogonaltest

表4 方差分析表Table4 Variance of analysis

采用综合评分模式，以综合评分结果为指标，方差分析结果表明，A＞B＞C，因素A和因素B对综合评分结果有显著性影响，而因素A与因素B之间差异不显著。由数值直观分析可知，各因素对复方柴胡提取物中空栓制备工艺的影响次序为A2＞A1＞A3，B2＞B1＞B3，C2＞C1＞C3。综合分析结果，选取的制剂制备工艺为A2B2C2，即药粉与基质间比例为1:2，药液温度50℃，脱模时间25 min。

22..44 验证试验

2.4.1 标准曲线 依照文献[3-4]方法进行对照品溶液的制备和供试品的制备，并以吸收度值Y为纵坐标，柴胡总皂苷的浓度X（mg/mL）为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程：Y=1.429 0X+0.995 4，R=0.999 9，表明柴胡皂苷的浓度与吸收度值成线性关系良好（0.65～9.5 mg/mL）。

2.4.2 样品栓质量控制及柴胡总皂苷含量

2.4.2.1 样品栓质量控制 依据正交优选的最佳工艺，共制备中空栓3批。

颜色检查：视检，制得的栓剂为褐色，表面光滑完整，色泽均匀。

硬度检查：触检，感受三种栓剂硬度。

重量差异：检查结果无超出重量差异限度的栓剂。栓剂质量差异限度检查标准见表5。

表5 栓剂质量差异限度Tab le5 Quality difference limit of suppository

融变时限：制得栓剂均在30 min内融化。

微生物限度：依照中国兽药典附录微生物限度检查法检查，全部符合规定。

三批样品栓质量检查结果表明优选的中空栓制备工艺可行，重复性好，操作简单，适合大生产。硬度及融变时限结果见表6。

2.4.2.2 柴胡总皂苷含量 经测定，柴胡总皂苷含量稳定。结果见表6。

表6 样品栓质量及柴胡总皂苷含量Table6 Quality of samp le suppository and content oftota l saikosaponins

3 讨论

3.1 复方柴胡提取物中空栓处方中主药筛选 柴胡及其提取物具有退热、疏肝解郁、升阳气、提高免疫力等作用[5]，氟尼辛葡甲胺为芬那酸类解热镇痛抗炎药，具有镇痛、解热、抗炎和抗风湿作用[6]。本研究将柴胡提取物与氟尼辛葡甲胺作为复方柴胡提取物中空栓处方的主药，旨在发挥柴胡提取物与氟尼辛葡甲胺在家畜发热性疾病治疗中的协同作用，提高复方柴胡提取物中空栓的疗效。

3.2 复方柴胡提取物中空栓基质的筛选 常用的栓剂基质可分为油脂性基质和水溶性基质两大类。油脂性基质包括可可豆脂、半合成脂肪酸甘油酯及合成脂肪酸酯，水溶性基质包括甘油明胶、聚乙二醇（PEG）及非离子型表面活性剂类。半合成脂肪酸甘油酯熔点适宜，在常温下为固体，遇体温迅速熔化，适用于直肠栓基质，为目前取代天然油脂的较理想的栓剂基质。聚乙二醇无生理作用，遇体温不熔化，在PEG4000中加入30%PEG400效果最佳。本研究选择半合成脂肪酸甘油酯和PEG混合物作为基质，既有利于水溶性药物的溶解，又有利于释放脂溶性药物[2]。

3.3 正交试验设计复方柴胡提取物中空栓制备及质量控制 中空栓剂是1984年由日本学者研发的一种制剂，其外层是由基质制成的空壳，将药物包裹在中空栓壳内而形成中空栓[7-8]。本研究采用半合成脂肪酸甘油酯和PEG混合物为基质，以柴胡提取物和氟尼辛葡甲胺为主药制备复方柴胡提取物中空栓，避免了药物与基质混合后发生硬度、色泽、熔点和融变时限变化而造成的硬度效应，同时也避免了柴胡中有效成分因暴露造成氧化、潮解、变质。经检查复方柴胡提取物中空栓质量符合中国兽药典规定。复方柴胡提取物中空栓的局部刺激试验和体内的药代动力学特点有待于进一步深入研究。

[1]中华人民共和国兽药典委员会.中华人民共和国兽药典：二部[M].北京：中国农业出版社，2010：386.

[2]崔福德.药剂学[M].5版.北京：人民卫生出版社，2004：11.

[3]梁海宁，沈涛，毕映燕，等.正交试验优选萆清栓制备工艺[J].现代中药研究与实践，2012，6：52-53，38.

[4]陈淑，魏亚琴，索志荣.柴胡提取物中总皂苷测定方法研究[J].安徽农业科学，2012，24：11998-11999，12002.

[5]任艳.复方中草药防制肉鸡传染性支气管炎试验[J].现代畜牧兽医，2009，7：72-74.

[6]陈杖榴.兽医药理学[M].3版.北京：中国农业出版社，2009：6.

[7]谢英花，李小云，刘燕，等.甲硝唑中空栓的制备及质量控制[J].河北工业科技，2009，04：234-236.

[8]温向娟，方昆，仝立国，等.枳朴中空栓制备工艺的研究[J].中医药学报，2012，03：103-105.