云南省昆明市某奶牛养殖小区乳房炎病原菌分离和药敏试验

文∕刘 琴 曾广厅 谢丽韫 张任华 李惠琼

（云南省昆明市动物卫生监督所）

奶牛乳房炎是目前危害奶牛养殖业的主要疾病之一，每年可造成巨大的经济损失。目前已分离到与奶牛乳房炎有关的病原微生物共有150 多种。虽然有多种病原微生物可引起奶牛乳房炎，但国内外公认的最常见、最主要的病原微生物为金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、乳房链球菌、停乳链球菌和大肠杆菌等。受云南省昆明市某奶牛养殖小区的委托，本文对其小区内临床型乳房炎进行了病原菌分离和药敏试验，以期对其治疗提供指导。

1 试验材料

普通琼脂培养基；血琼脂培养基；M-H培养基；革兰氏染色液；药敏纸片（康泰生物公司产品）：林可霉素（M124）、头孢噻肟（NA16）、头孢哌酮（NA08）、氨苄西林（NA11）、链霉素（M125）、丁胺卡那（NA11）。

选取奶牛养殖小区有乳房炎临床症状的奶牛6 头，无菌采集患病乳区乳样6 个。

2 试验方法

2.1 样本采集

牛只按常规程序挤奶消毒后，用酒精棉球消毒乳头和采样者手指。每个乳头挤去头2～3 把乳后，无菌取乳样约5 mL，盛于灭菌青霉素瓶内贴好标签，于4 h内送检。

2.2 细菌分离培养

将乳样分别划线接种于普通琼脂培养基，置37 ℃温箱培养24 h后观察菌落形态特征，挑取典型菌落涂片，革兰氏染色，镜检。根据菌体形态及染色特性初步判定细菌类属，并进一步用血琼脂培养基纯化培养。

2.3 药敏试验

药敏试验采用纸片扩散法，即用灭菌棉拭子蘸取纯培养菌液（浊度为0.5）均匀涂布在M-H平板上，加盖后放置10 min 左右，待平板面稍干，用镊子将药敏纸片平放在琼脂平板上，并轻压使其紧贴平板表面。将贴好纸片的平板在37 ℃培养箱内培养24 h，观察结果，测量抑菌圈直径（包括药敏纸片直径），计算同一类菌不同菌株的平均抑菌直径。直径小于1.6 cm为不敏感；1.6～2.0 cm 为中度敏感；大于2.0 cm 为高度敏感。

3 结果

3.1 细菌培养结果

经培养和染色形态观察，6 份乳样确定分离到可疑菌株28 株（葡萄球菌16 株、链球菌5 株、双球菌6 株、大肠杆菌1 株），其中具有溶血现象，即有致病性的菌株9 株。在致病性菌株中，链球菌4 株，革兰氏染色阳性，菌落为露滴状，圆形、隆起、半透明，呈α、β或γ溶血，染色镜检形态一致，呈双或短链状、长链状排列；金黄色葡萄球菌4 株，革兰氏染色阳性、平板上菌落较厚，灰白或灰黄色，有光泽、圆形、隆起、不透明，血平板菌落周围形成透明的溶血环；双球菌1 株，形态与链球菌菌落相似，呈α溶血。

由此看出，该牛场乳房炎病原菌主要为链球菌、金黄色葡萄球菌，其次为双球菌。

表1 全部菌株药敏试验结果 单位：cm

表2 溶血性菌株药敏试验结果（抑菌圈） 单位：cm

3.2 药敏试验结果

对全部28 株细菌进行药敏试验，结果见表1，表2。大部分菌株已对常用的抗生素氨苄西林、林可霉素有很强的耐药性。葡萄球菌对丁胺卡那、头孢哌酮、头孢噻肟高度敏感，对链霉素、氨苄西林、林可霉素不敏感。链球菌对丁胺卡那、头孢噻肟、链霉素高度敏感，对头孢哌酮中度敏感，对氨苄西林、林可霉素不敏感。大肠杆菌对6 种抗生素都不敏感。双球菌对氨苄西林、丁胺卡那、头孢噻肟、头孢哌酮高度敏感，对链霉素和林可霉素不敏感。

4 结论

4.1 通过对该小区牛乳的采样检测，发现小区引起乳房炎的病原菌主要为链球菌和金黄色葡萄球菌，其次为双球菌。为了预防此病的发生，要切实加强牛舍的环境卫生管理，要定期对环境进行消毒，避免疾病的互相传播。挤奶操作要熟练，严格按照操作规程进行，每头牛要固定一条毛巾，洗涤后用干净毛巾擦干乳房。挤奶机每次用后均要清洗消毒，防止挤奶设备对牛只的交叉感染。

4.2 要加强对奶牛隐性乳房炎的监测。大多数养殖场（小区）已参加了DHI测定，牛场要高度重视DHI牧场管理报告的应用，对体细胞数超过20 万个/mL的奶牛要进行隐性乳房炎监测，积极干预，避免发展成为临床型乳房炎，在干奶期进行治疗，保证下一个泌乳期乳房健康。

4.3 经对药敏试验结果进行综合分析，确定治疗乳房炎应主要选用丁胺卡那、链霉素、头孢哌酮、头孢噻肟。引起乳房炎的主要病原菌对氨苄西林、林可霉素已有很强的耐药性。随着新的抗菌药物的广泛使用，将会面临新的耐药性的问题，因此有必要在给药途径、药物配合使用上做进一步研究，以达到有效控制本病的目的。