单纯性单脐动脉孕妇胎盘及脐带组织中VEGF、eNOS蛋白的表达

许雅娟，翟闪闪，刘月华，罗晓华，张莹莹

郑州大学第三附属医院妇产科 郑州 450052

目前关于单脐动脉(single umbilical artery，SUA)与胎儿生长受限、胎儿染色体异常、胎儿发育异常及出生后的生存质量的相关性研究逐渐引起了产科、新生儿科及超声科等科室的重视[1-4]。人类正常脐带中有两条动脉一条静脉，脐带中仅有一条动脉的称为 SUA。单纯性单脐动脉(isolated single umbilical artery，ISUA)是指不合并畸形的SUA，胎儿结局相对复杂性SUA较好。有研究[5]表明胎盘组织中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase，eNOS)的表达异常可影响胎盘循环，进而导致血氧交换障碍，从而影响胎儿生长发育。该研究通过测定VEGF及eNOS在胎盘和脐带中的表达，分析ISUA胎儿生长发育过程中胎盘循环的供血供氧情况。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取2012年1月至2013年5月郑州大学第三附属医院ISUA足月分娩的孕妇37例为ISUA组，选取同期正常足月分娩孕妇40例作正常对照。2组孕妇均无高血压、肾病、糖尿病及其他合并症。对每个孕妇娩出的胎盘及新生儿分别进行称重，记录数值。

1.2 胎盘及脐带组织中VEGF、eNOS表达的检测采用免疫组化SP方法。取1 cm×1 cm×1 cm母面胎盘组织，取距离胎盘10 cm处的脐带组织1 cm，多聚甲醛固定，常规脱水，石蜡包埋后4 μm厚度连续切片备用。即用型VEGF鼠抗人单克隆抗体和免疫组化Max Visionx试剂盒(鼠/兔)购自福州迈新公司，eNOS兔抗人多克隆抗体(稀释150倍使用)购自武汉博士德生物工程公司。将组织切片脱蜡至水，微波炉抗原修复，H2O2封闭内源性过氧化物酶，滴加一抗4℃过夜，按照Max Visionx试剂盒说明加入二抗，DAB显色，苏木素复染，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。用PBS液代替一抗作阴性对照，用已知阳性切片作阳性对照。

1.3 结果判定 VEGF、eNOS蛋白均以细胞质出现棕黄色颗粒为染色阳性细胞。使用德国Lecia显微照像系统，每张切片选择5个具有代表意义的高倍视野观察eNOS、VEGF蛋白的分布及表达。采用上海山富科学仪器有限公司 Biosens Digital Imaging System V1.6图像分析系统进行分析，以平均灰度值表示eNOS和VEGF蛋白的表达强度。

1.4 统计学处理 采用SPSS 17.0分析，ISUA组和正常对照组胎儿出生体重、胎盘质量、胎盘和脐带组织中eNOS和VEGF蛋白表达的比较采用两独立样本t检验，检验标准α=0.05。

2 结果

2.1 2组孕妇一般情况的比较 正常对照组孕妇娩出的新生儿体重及胎盘质量均大于ISUA组，见表1。

表1 2组孕妇年龄、孕周、胎儿出生体重和胎盘重量的比较

2.2 2组胎盘及脐带组织中VEGF、eNOS蛋白的表达情况 见表2和图1。ISUA组和正常对照组胎盘和脐带组织中eNOS、VEGF均有表达。胎盘组织中eNOS分布于绒毛合体滋养细胞和绒毛血管内皮细胞，VEGF主要分布于绒毛合体滋养细胞，其次是绒毛血管内皮细胞和部分间质。脐带组织中，VEGF、eNOS主要在动脉的内皮细胞表达。

表2 2组胎盘及脐带组织中VEGF、eNOS的表达

3 讨论

研究[6]表明部分SUA妊娠会合并胎儿脐血流和动脉导管血流指标异常，给母胎的血循环造成影响。该研究结果显示ISUA组胎盘质量和胎儿出生体重小于正常对照组，提示ISUA孕妇可能存在影响胎儿胎盘循环及胎儿生长发育的因素。

一氧化氮(nitric oxide，NO)是一种有效的血管舒张因子，对维持胎盘妊娠期间胎盘循环的低阻力高灌注状态起着重要的作用。Sheppard等[7]认为NO通过cGMP来控制子宫、胎盘的血流。eNOS是内源性NO的重要限速酶，能正确反映NO的水平。正常妊娠时胎盘和脐带组织中eNOS对NO的合成起着重要的调控作用。有报道[8-9]缺氧情况下胎儿胎盘循环呈高阻力，血管透壁压力增加及血管应切力的增加，刺激eNOS的表达增加。Lyall等[10]认为胎盘eNOS表达增加是对胎盘高阻力和低灌注的一种代偿反应。该研究中eNOS在ISUA组胎盘及脐带组织中呈高表达，分析原因可能是ISUA的胎儿胎盘循环中存在缺氧情况，循环呈现高阻力和低灌注，作为低氧时机体的一种代偿性保护，刺激胎盘及脐带组织eNOS表达增加，导致NO生成增加，从而舒张血管使血管阻力降低，满足循环的血氧需求。

图1 2组胎盘及脐带组织中VEGF(1)、eNOS(2)蛋白的表达(SP，×400)

VEGF是内皮细胞特异性的有丝分裂原，作为一个重要的血管形成因素，能促进胎盘及脐带新生血管的形成与重建，其生物学功能表现在:①促进血管内皮细胞分裂，诱导纤维蛋白溶解酶原的降解，参与细胞外蛋白水解和基底膜的降解，有利于血管内皮细胞的迁移和增生。②增加血管通透性，促进包括纤维蛋白原在内的血浆蛋白的渗出，形成纤维素网络，为血管芽延伸生长提供良好基质。刘海意等[11]认为滋养细胞因受到氧压力的调控，在缺血缺氧状态下可以使VEGF代偿性的表达上调。Kimura等[12]发现NO具有类似低氧对VEGF的调节效应，NO通过与VEGF的关键性转录调控因子靶向定位结合后，再与VEGF启动子调控元件结合，从而促进VEGF的转录，使其表达上调。该研究中ISUA组胎盘及脐带组织中VEGF表达高于正常对照组，原因可能是ISUA的胎儿胎盘循环中存在高阻力和低灌注的缺氧状况，刺激机体代偿性地上调VEGF的表达，以促进胎盘与脐带的新生血管形成与重建，从而降低循环阻力;也可能是在缺氧情况下，胎儿胎盘循环代偿性引起eNOS的增加，使组织产生更多的NO，更多的NO刺激VEGF表达上调，从而改善循环血氧灌注。

总之，ISUA胎儿胎盘循环中可能存在缺血缺氧情况，引起母胎物质交换障碍，从而影响胎盘生长发育及胎儿生长发育。ISUA胎儿胎盘循环在低氧刺激下代偿性地使VEGF与eNOS的表达增加，通过有效的调节机制，使胎儿胎盘循环的供血供氧可以达到胎儿生长发育的基本需求，使ISUA孕妇达到基本满意的妊娠结局。ISUA孕妇应在严密监测下妊娠，加强ISUA孕妇分娩过程监护。严密随访胎儿出生以后生长发育过程。该研究选取的样本量较少，作者将进一步对ISUA妊娠过程进行更大样本量的研究，从而指导ISUA孕妇的孕期保健，提高新生儿出生体重。

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