食管鳞状细胞癌组织中SASH1和FBXO32蛋白的表达

丁小莹，郭长青

郑州大学第一附属医院消化内科 郑州 450052

食管癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，居肿瘤死亡的第4位，其发生发展是一个多基因、多步骤相互作用的复杂过程。SASH1基因是编码衔接蛋白的 SLY基因家族中的一员[1]，FBXO32属于FBX蛋白家族，二者均为新的候选抑癌基因，参与了许多恶性肿瘤的生物学行为，在结肠癌、胃癌、肺癌、黑色素瘤、神经胶质瘤等多种肿瘤组织中的表达均下降[2-6]。作者检测了食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma，ESCC)组织及正常食管黏膜组织中SASH1和FBXO32蛋白的表达，探讨二者与ESCC发生发展的关系及临床意义。

1 材料与方法

1.1 标本来源 选用郑州大学第一附属医院2012年2月至2013年3月胸外科手术中切除的食管癌标本76例及相应的正常食管黏膜组织(距癌组织边缘的距离＞5 cm)，患者术前均未接受放化疗或免疫治疗，术后均经病理证实为ESCC。76例ESCC患者中男57例，女19例;年龄43～74岁;有淋巴结转移29例，无淋巴结转移47例;病理学分级:低分化25例，中分化33例，高分化18例;按照国际抗癌联盟(UICC)标准进行TNM分期:Ⅰ、Ⅱ期45例，Ⅲ、Ⅳ期31例。

1.2 SASH1和FBXO32蛋白的免疫组化染色 所有标本均经甲醛固定，石蜡包埋，连续切片。SASH1、FBXO32兔抗人多克隆抗体均购自北京博奥森生物技术有限公司，使用时分别按1∶300和1∶200稀释;免疫组化SP试剂盒及DAB显色液均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。采用SP三步法，按照试剂盒说明进行操作，DAB显色，苏木素复染，盐酸乙醇分色。以PBS取代一抗作为阴性对照。

1.3 结果判定 由两位病理医师双盲阅片，SASH1阳性判定标准为细胞核中出现明显的棕黄色颗粒，FBXO32阳性判定标准为细胞质内出现棕黄色或褐色颗粒。200倍视野下每张切片选10个代表区，计数阳性细胞，计算阳性细胞百分比。阳性程度的判断标准如下。①按阳性细胞百分比计分:0为0分，＜10%为1分，10% ～为2分，51% ～为 3分，≥75%为4分。②按染色强度计分:无染色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。两项积分相乘，＜3分为阴性，≥3分为阳性。

1.4 统计学处理 采用 SPSS 11.0处理数据。应用配对χ2检验比较ESCC与正常食管黏膜组织中SASH1和FBXO32蛋白阳性表达率的差异，应用χ2检验比较不同人口学特征及临床病理因素的ESCC患者SASH1和FBXO32蛋白阳性表达率的差异，应用列联系数评估ESCC组织中SASH1与FBXO32蛋白表达的关联性。检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 ESCC和正常食管黏膜组织中 SASH1和FBXO32蛋白的表达 见图1，表1、2。由表1、2知，SASH1蛋白在ESCC组织中的阳性表达率为35.5%，低于正常食管黏膜组织(53.9%);FBXO32蛋白在ESCC组织中的阳性表达率为36.8%，低于正常食管黏膜组织(55.3%)。

图1 ESCC组织(A)及正常食管黏膜组织(B)中SASH1和FBXO32蛋白的表达(SP，×200)

表1 ESCC及正常食管黏膜组织中SASH1蛋白的表达 例

表2 ESCC及正常食管黏膜组织中FBXO32蛋白的表达 例

2.2 ESCC组织中SASH1和FBXO32蛋白的表达与患者一般人口学特征及临床病理因素的关系ESCC组织中SASH1及FBXO32蛋白的表达与ESCC的分化程度、TNM分期及淋巴结转移有关，与性别、年龄无关，见表3。

表3 ESCC组织中SASH1和FBXO32蛋白的表达与患者一般人口学特征及临床病理因素的关系 阳性例数(%)

2.3 ESCC组织中SASH1和FBXO32蛋白表达的关联性分析 见表4。ESCC组织中SASH1和FBXO32蛋白的表达呈正关联(rP=0.417，P＜0.001)。

表4 ESCC组织中SASH1和FBXO32蛋白表达的关联性 例

3 讨论

SASH1基因是近年来发现的候选抑癌基因，除淋巴样干细胞外，广泛地表达于多种正常组织。SASH1蛋白包含1个SH3和2个SAM结构域，通过这两种作用多样化的结构域在细胞内信号转导通路中发挥重要作用[7-8]。Zeller等[9]研究证明其在多种肿瘤组织中表达下调。有证据[6，10]证明 SASH1基因可以影响肿瘤细胞的成瘤能力及通过核质穿梭而影响肿瘤的发生发展。Martini等[10]研究表明SASH1蛋白能够抑制细胞转移。以上研究表明SASH1基因与肿瘤的发生发展有密切关系。该研究表明SASH1在ESCC组织中低表达，而在正常食管黏膜组织中高表达，且SASH1蛋白与TNM分期、分化程度及淋巴结转移有关，而与性别、年龄无关。说明SASH1在ESCC的发生发展及淋巴结转移中发挥重要作用，与上述研究相符。

FBXO32蛋白是SCF泛素蛋白连接酶的重要组成部分，参与多种细胞过程，如信号转导、细胞周期进程和细胞泛素化等[11]。有研究[12]发现 FBXO32作为凋亡调节基因可通过前存活信号进行负性调节。此外，体内外研究[13-15]表明，FBXO32通过TGF-β/SMAD4信号通路可增加肿瘤细胞凋亡，从而抑制肿瘤生长，其表达下调可加速恶性肿瘤的增殖、浸润、转移及广泛播种等生物学行为。该研究显示FBXO32在ESCC组织中低表达，且与肿瘤TNM分期、分化程度及淋巴结转移有关，而与性别、年龄无关。

此外，该研究结果还显示，ESCC组织中SASH1与FBXO32蛋白的表达呈正关联，表明在ESCC的发生发展中SASH1与FBXO32具有协同作用。

综上所述，ESCC中SASH1与FBXO32蛋白的表达降低，且均与肿瘤的TNM分期、分化程度及淋巴结转移有关，提示二者在ESCC的发生发展中具有协同作用;二者有望成为ESCC诊断、基因治疗的新靶点以及预后判断的重要指标。

[1]Beer S，Scheikl T，Reis B，et al.Impaired immune responses and prolonged allograft survival in Sly1 mutant mice[J].Mol Cell Biol，2005，25(21):9646

[2]Rimkus C，Martini M，Friederichs J，et al.Prognostic significance of downregulated expression of the candidate tumour suppressor gene SASH1 in colon cancer[J].Br J Cancer，2006，95(10):1419

[3]陈致奋.SASH1在人胃癌组织中的表达及RNAi抑制GES-1细胞中SASH1基因表达的研究[D].福州:福建医科大学，2008.

[4]Chen EG，Chen YF，Dong LL，et al.Effects of SASH1 on lung cancer cell proliferation，apoptosis，and invasion invitro[J].Tumor Biol，2012，33(5):1393

[5]Lin S，Zhang J，Xu J，et al.Effects of SASH1 on melanoma cell proliferation and apoptosis in vitro[J].Mol Med Rep，2012，6(6):1243

[6]Yang L，Liu M，Gu Z，et al.Overexpression of SASH1 related to the decreased invasion ability of human glioma U251 cells[J].Tumour Biol，2012，33(6):2255

[7]Lindvall JM，Blomberg KE，Wennborg A，et al.Differential expression and molecular characterisation of Lmo7，Myo1e，Sash1，and Mcoln2 genes in Btk-defective B-cells[J].Cell Immunol，2005，235(1):46

[8]Dubois F，Vandermoere F，Gernez A，et al.Differential 14-3-3 affinity capture reveals new downstream targets of phosphatidylinositol 3-kinase signaling[J].Mol Cell Proteomics，2009，8(11):2487

[9]Zeller C，Hinzmann B，Seitz S，et al.SASH1:a candidate tumor suppressor gene on chromosome 6q24.3 is downregulated in breast cancer[J].Oncogene，2003，22(19):2972

[10]Martini M，Gnann A，Scheikl D，et al.The candidate tumor suppressor SASH1 interacts with the actin cytoskeleton and stimulates cell-matrix adhesion[J].Int J Biochem Cell Biol，2011，43(11):1630

[11]张明慧，郭炜，董稚明，等.食管鳞状细胞癌中FBXO32基因表达及其临床意义[J].临床与实验病理学杂志，2013，29(6):632

[12]Tan J，Yang X，Zhuang L，et al.Pharmacologic disruption of Polycomb-repressive complex 2-mediated gene repression selectively induces apoptosis in cancer cells[J].Genes Dev，2007，21(9):1050

[13]Chou JL，Su HY，Chen LY，et al.Promoter hypermethylation of FBXO32，a novel TGF-beta/SMAD4 target gene and tumor suppressor，is associated with poor prognosis in human ovarian cancer[J].Lab Invest，2010，90(3):414

[14]Chan MW，Huang YW，Hartman-Frey C，et al.Aberrant transforming growth factor beta1 signaling and SMAD4 nuclear translocation confer epigenetic repression of ADAM19 in ovarian cancer[J].Neoplasia，2008，10(9):908

[15]Nilsson EE，Skinner MK.Role of transforming growth factor beta in ovarian surface epithelium biology and ovarian cancer[J].Reprod Biomed Online，2002，5(3):254