冰冻亚型红细胞融化洗涤后保存条件及使用效期的优化选择

邱玉霞　韩惠云　张国平等

[摘要] 目的 优化选择冰冻亚型红细胞融化洗涤后的保存条件及使用效期，保证其在血型血清学试验中的应用效果。 方法 从冰冻保存的亚型红细胞中，选择10份储存量较大、弱抗原与抗血清的反应强度为2﹢～3﹢ 的标本，融化洗涤后将压积红细胞各一分为二，分别以AB型血浆和MAP红细胞保存液按1.5倍的比例悬浮，加入终浓度为0.05mg/mL的硫酸庆大霉素混匀后，再各等分为1、2、3、4四组，第1组始终放置2～6℃冰箱保存，第2、3、4组每天在室温分别放置0.5、1和2h后，再放入2～6℃冰箱保存，于保存0、10、20、30、40、50、60d时，分别检测四组红细胞上清中的FHb含量及红细胞A、B抗原的反应强度。以红细胞每天置室温1h再恢复2～6℃储存的模式下，FHb浓度达1.0g/L，同时红细胞血型抗原减弱达1﹢的最小储存天数再减10d作为其使用效期。 结果 （1）四组红细胞随着保存时间延长，上清FHb均逐渐升高；室温放置时间越长，上升幅度越大；以MAP作为保存介质，每天室温分别放置0、0.5、1、2h，FHb达到1.0g/L的时间分别为>60d、60d、50d、30d；以AB型血浆作为保存介质，则分别为50、40、30、10d。（2）四组红细胞随着保存时间延长，红细胞血型抗原的反应强度逐渐减弱；室温放置时间越长，抗原出现减弱的时间越早；以MAP作为保存介质，每天室温分别放置0、0.5、1、2h，血型抗原减弱达到1﹢的时间分别为>60、>60、60、40d；以AB型血浆作为保存介质，则分别为>60、60、50、20d。 结论 冰冻亚型红细胞融化洗涤后的保存质量与保存介质、温度、时间密切相关。以MAP红细胞保存液作为保存介质，置2～6℃冰箱储存，室温下使用时间每天控制在1h以内为其最佳保存条件；以MAP红细胞保存液作为保存介质的使用效期确定为40d；以血浆作为保存介质的使用效期则确定为20d。

[关键词] 冰冻亚型红细胞；融化洗涤；保存；质量

[中图分类号] R329.2 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2014）17-12-04

[Abstract] Objective To optimize the preservation conditions and validity period of frozen subgroup red blood cells after melting and washing to ensure its effects in blood group serology test. Methods 10 samples with large storage capacity and weak antigenicity and antiserum reaction intensity of 2+-3+ were selected from frozenly preserved subgroup red blood cells. After melting and washing， the packed red blood cells were divided into two shares which were mixed with 1.5 times of AB subgroup plasma and MAP red blood cell preservation fluid for suspension. Adding gentamicin sulfate with final concentration of 0.05mg/mL then equally diving each of the two shares into four groups. Group 1 was preserved in the fridge under temperature of 2-6℃， and Group 2， 3 and 4 were kept under room temperature for 0.5h， 1h and 2h each day before preservation in the fridge under temperature of 2-6℃. The supernatant FHb content and the reaction intensity of red blood cell antigen A and B were tested at 0d， 10d， 20d， 30d， 40d， 50d and 60d after preservation. With red blood cells kept under room temperature for 1h each day before preservation in the fridge under temperature of 2-6℃， the validity period was defined as the minimal storage days （for FHb concentration to reach 1.0g/L and the blood group antigen reaction intensity to decrease to 1+） minus 10d. Results （1） The supernatant FHb content gradually increased with prolonged preservation of red blood cells， the longer preservation under room temperature， the greater increase. With MAP as the preservation medium， it took >60d， 60d， 50d， 30d for FHb to reach 1.0g/L for red blood cells kept under room temperature for 0h， 0.5h， 1h and 2h respectively. With AB subgroup plasma as the preservation medium， it took 50d， 40d， 30d and 10d respectively. （2） Blood group antigen reaction intensity gradually decreased with prolonged preservation of red blood cells， the longer preservation under room temperature， the earlier appearance of decreased antigen reaction intensity. With MAP as the preservation medium， it took >60d， >60d， 60d， 40d for the blood group antigen reaction intensity to decrease to 1+ for red blood cells kept under room temperature for 0h， 0.5h， 1h and 2h respectively. With AB subgroup plasma as the preservation medium， it took>60d， 60d， 50d， s0d respectively. Conclusion The preservation quality of frozen subgroup red blood cells after melting and washing is closely related to the preservation medium， temperature and time. The optimal preservation conditions are as follows： using MAP red blood cell preservation fluid as the preservation medium， preservation in fridge under temperature of 2-6℃， application under room temperature for no more than 1h each day. The validity period was defined as 40d with MAP red blood cell preservation fluid as the preservation medium and 20d with plasma as the preservation medium.endprint

[Key words] Frozen subgroup red blood cell； Melting and washing； Preservation； Quality

甘油作为最常用的细胞内低温保护剂，已广泛应用于红细胞的低温保存。利用该方法保存红细胞，可使红细胞寿命长达10年，甚至延长到21年[1]。我站利用该原理对日常工作中遇到的ABO亚型标本进行冰冻保存，并作为弱阳性参考品对多家单克隆抗血清试剂进行质量评价，从中挑选对亚型检出率高的试剂用于献血者血型鉴定的初、复检，在一定程度上提高了献血者的ABO亚型检出率[2-3]。为进一步将ABO亚型红细胞作为弱阳性质控品，有效应用于献血者ABO血型鉴定的室内质控及医院供血库ABO血型鉴定的质量测评等工作中，本研究对冰冻亚型红细胞融化洗涤后的保存条件及使用效期进行优化选择，报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

9%Nacl注射液（北京博得桑特输血器材公司）；0.9%Nacl注射液、抗-A、抗-B（上海血液生物医药有限责任公司）；1.6%Nacl溶液（由9%和0.9%Nacl注射液按比例配制）；血浆游离血红蛋白测定试剂盒（北京瑞尔达生物科技有限公司）；硫酸庆大霉素（开封制药集团有限公司）；MDF-192型-80℃低温冰箱（大连三洋冷链公司）；HH.W21.600型电热恒温水浴箱（北京光明医疗仪器厂）；LD5-2A型台式离心机（北京雷勃尔公司）。

1.2 红细胞分组和保存

从本站建立的冰冻亚型红细胞信息库[4]中，选择10份储存量较大、弱抗原与抗血清的反应强度为2+～3+的标本，融化洗涤后将压积红细胞各一分为二，分别以AB型血浆和MAP红细胞保存液按1.5倍的比例悬浮，加入终浓度为0.05mg/mL的硫酸庆大霉素混匀后，再各等分为1、2、3、4四组，第1组始终放置2～6℃冰箱保存，第2、3、4组每天在室温分别放置0.5、1和2h后，再放入2～6℃冰箱保存，于保存0、10、20、30、40、50、60d时，分别检测四组红细胞相关质量指标。

1.3 红细胞质量指标检测

用邻甲联苯胺法检测红细胞上清中FHb含量；用盐水试管法[5]检测红细胞A、B抗原。以红细胞每天置室温1h再恢复2～6℃储存的模式下，FHb浓度达1.0g/L，同时红细胞血型抗原减弱达1+的最小储存天数再减10d作为其使用效期。

1.4 统计学方法

采用SPSS17.0统计学软件，FHb检测数据用（）表示，计量资料比较采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

见表1、表2。

3 讨论

红细胞在体外保存过程中可发生一系列生物和毒性改变，且随着储存时间的延长其变化更加显著，统称为“红细胞保存损伤”。包括细胞形态变化、膜结构改变、ATP含量减少、乳酸堆积、K+的流失和Na+的聚集等，其中细胞膜带3蛋白结构的变化和脂质过氧化物反应引起的氧化损伤，可导致红细胞发生裂解[6]，不但严重影响红细胞血型抗原成分的稳定性，而且使细胞内的Hb游离出细胞外。所以测定红细胞抗原的反应性和上清中FHb浓度，可反映红细胞膜的破坏情况，是评价红细胞保存质量的重要指标。本研究通过分组设计，重点观察不同保存介质、保存温度及保存时间对红细胞抗原及FHb的影响程度，从而确定冰冻亚型红细胞融化洗涤后的最佳保存条件及使用效期，以保证其在血型血清学试验中的应用效果。

由表1可见，四组红细胞随着保存时间延长，上清FHb均逐渐升高；室温放置时间越长，上升幅度越大；以MAP作为保存介质，每天室温分别放置0、0.5、1、2h，FHb达到1.0g/L的时间分别为>60、60、50、30d；以AB型血浆作为保存介质，则分别为50、40、30、10d。由表2可见，四组红细胞随着保存时间延长，红细胞血型抗原的反应强度逐渐减弱；室温放置时间越长，抗原出现减弱的时间越早；以MAP作为保存介质，每天室温分别放置0、0.5、1、2h，血型抗原减弱达到1+的时间分别为>60、>60、60、40d；以AB型血浆作为保存介质，则分别为>60、60、50、20d。由此可见，冰冻亚型红细胞融化洗涤后的保存质量与红细胞的保存介质、保存温度和保存时间密切相关，也充分证明优化选择红细胞保存条件及使用效期的重要性和必要性。

从红细胞的保存介质进行分析，由于红细胞没有细胞核和线粒体，只能通过无氧酵解利用葡萄糖获取能量。在分解葡萄糖产生ATP的同时，也会产生乳酸和丙酮酸等代谢产物，这些产物在体内可被其他组织氧化利用，而在体外状态下却因得不到充分利用而使其pH下降，而pH过低时会引起ATP从红细胞中的释放速率加快，导致红细胞ATP耗竭，从而使红细胞寿命走向终结[7-8]。如果选择含有枸橼酸盐、葡萄糖、腺嘌呤、甘露醇等成分的MAP红细胞保存液作为保存介质，在一定时间内，其中的葡萄糖和腺嘌呤可为保存过程中的红细胞提供足够的ATP[9-11]，甘露醇则具有抵抗红细胞溶解和加固细胞膜的作用，所以能有效维持红细胞的形态与结构，其保存效果明显优于血浆介质。从红细胞的保存温度及保存时间进行分析，因为血液是一种热敏物质，对温度变化十分敏感，温度越高，红细胞代谢速率越快，能量消耗越多[12-13]，随着保存介质中营养物质的不断消耗以及代谢产物的逐渐堆积，进一步加重了红细胞的储存损伤，继而使红细胞裂解死亡。所以，红细胞在2～6℃冰箱保存效果最好，工作中应尽量缩短室温放置时间，从而有效保证红细胞的储存质量。

综上考虑，冰冻亚型红细胞融化洗涤后，以MAP红细胞保存液作为保存介质，于2～6℃冰箱中储存效果最佳，工作中每天室温使用时间应控制在1h以内，且时间越短，保存质量越好。红细胞用MAP保存液保存时，使用有效期确定为40d。该方法适用于将冰冻亚型红细胞作为弱阳性质控品，用于无偿献血者ABO血型鉴定室内质控时所需质控品的制备和保存。红细胞用血浆作为保存介质时，使用有效期确定为20d。该方法适用于对医疗机构供血库进行ABO血型鉴定质量测评、供血库输血技能比武以及血型血清学培训等工作中所需亚型标本的制备和保存。其他工作中如果红细胞能在20d内使用完毕，对悬浮介质也无特殊要求，比如对单克隆试剂进行质量评价、辅助鉴定某些亚型等，则不论选择哪一种保存方法，均能保证红细胞的使用效果。

[参考文献]

[1] 龚裕春，黄晨佳，邱颖婕，等.2组洗涤溶液制备冰冻解冻去甘油红细胞的效果比较[J].中国输血杂志，2010，23（9）：692-693.

[2] 李雪英，田宗斌，邱玉霞，等.6种ABO单克隆抗体试剂的质量评估[J].临床输血与检验，2012，14（4）：324-326.

[3] 邱玉霞，窦茉莉，李雪英.冰冻亚型红细胞在抗血清试剂选择中的应用[J].中国医学创新，2012，9（19）：70-71.

[4] 李雪英，邱玉霞，窦茉莉.冰冻亚型红细胞的保存及应用[J].山东医药，2012，52（35）：90-91.

[5] 叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程[M].第3版.南京：东南大学出版社，2006：246-271.

[6] 魏超，庄远，汪德清.红细胞保存时间与功能变化的研究进展[J].中国输血杂志，2013，26（11）：1152-1155.

[7] 武世文，文爱清.红细胞储存损伤的研究进展[J].中国输血杂志，2013，26（6）：593-595.

[8] 于青，刘嘉馨，王红，等.红细胞老化及其机制的研究进展[J].中国输血杂志，2012，25（1）：77-80.

[9] 王殿昌，马玉翠，王秀英，等.MAP红细胞悬液保存期内生化指标的动态观察[J].中国医科大学学报，2006，35（2）：207-208.

[10] 李建民，沈莉，张义兵，等.MAP洗涤和保存红细胞的效果观察[J].中国输血杂志，2003，16（2）：104-106.

[11] 沈莉，张义兵，李建民，等.两种洗液制备的洗涤红细胞的对比[J].中国输血杂志，2003，16（1）：28-29.

[12] 马庆，陆瑶，徐雪瑾，等.红细胞深低温长期保存效果的探讨[J].中国输血杂志，2007，20（1）：45-47.

[13] 马庆.深低温长期保存红细胞的效果评价[J].中国输血杂志，2012，25（9）：837-840.

（收稿日期：2014-06-08）endprint

[Key words] Frozen subgroup red blood cell； Melting and washing； Preservation； Quality

甘油作为最常用的细胞内低温保护剂，已广泛应用于红细胞的低温保存。利用该方法保存红细胞，可使红细胞寿命长达10年，甚至延长到21年[1]。我站利用该原理对日常工作中遇到的ABO亚型标本进行冰冻保存，并作为弱阳性参考品对多家单克隆抗血清试剂进行质量评价，从中挑选对亚型检出率高的试剂用于献血者血型鉴定的初、复检，在一定程度上提高了献血者的ABO亚型检出率[2-3]。为进一步将ABO亚型红细胞作为弱阳性质控品，有效应用于献血者ABO血型鉴定的室内质控及医院供血库ABO血型鉴定的质量测评等工作中，本研究对冰冻亚型红细胞融化洗涤后的保存条件及使用效期进行优化选择，报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

9%Nacl注射液（北京博得桑特输血器材公司）；0.9%Nacl注射液、抗-A、抗-B（上海血液生物医药有限责任公司）；1.6%Nacl溶液（由9%和0.9%Nacl注射液按比例配制）；血浆游离血红蛋白测定试剂盒（北京瑞尔达生物科技有限公司）；硫酸庆大霉素（开封制药集团有限公司）；MDF-192型-80℃低温冰箱（大连三洋冷链公司）；HH.W21.600型电热恒温水浴箱（北京光明医疗仪器厂）；LD5-2A型台式离心机（北京雷勃尔公司）。

1.2 红细胞分组和保存

从本站建立的冰冻亚型红细胞信息库[4]中，选择10份储存量较大、弱抗原与抗血清的反应强度为2+～3+的标本，融化洗涤后将压积红细胞各一分为二，分别以AB型血浆和MAP红细胞保存液按1.5倍的比例悬浮，加入终浓度为0.05mg/mL的硫酸庆大霉素混匀后，再各等分为1、2、3、4四组，第1组始终放置2～6℃冰箱保存，第2、3、4组每天在室温分别放置0.5、1和2h后，再放入2～6℃冰箱保存，于保存0、10、20、30、40、50、60d时，分别检测四组红细胞相关质量指标。

1.3 红细胞质量指标检测

用邻甲联苯胺法检测红细胞上清中FHb含量；用盐水试管法[5]检测红细胞A、B抗原。以红细胞每天置室温1h再恢复2～6℃储存的模式下，FHb浓度达1.0g/L，同时红细胞血型抗原减弱达1+的最小储存天数再减10d作为其使用效期。

1.4 统计学方法

采用SPSS17.0统计学软件，FHb检测数据用（）表示，计量资料比较采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

见表1、表2。

3 讨论

红细胞在体外保存过程中可发生一系列生物和毒性改变，且随着储存时间的延长其变化更加显著，统称为“红细胞保存损伤”。包括细胞形态变化、膜结构改变、ATP含量减少、乳酸堆积、K+的流失和Na+的聚集等，其中细胞膜带3蛋白结构的变化和脂质过氧化物反应引起的氧化损伤，可导致红细胞发生裂解[6]，不但严重影响红细胞血型抗原成分的稳定性，而且使细胞内的Hb游离出细胞外。所以测定红细胞抗原的反应性和上清中FHb浓度，可反映红细胞膜的破坏情况，是评价红细胞保存质量的重要指标。本研究通过分组设计，重点观察不同保存介质、保存温度及保存时间对红细胞抗原及FHb的影响程度，从而确定冰冻亚型红细胞融化洗涤后的最佳保存条件及使用效期，以保证其在血型血清学试验中的应用效果。

由表1可见，四组红细胞随着保存时间延长，上清FHb均逐渐升高；室温放置时间越长，上升幅度越大；以MAP作为保存介质，每天室温分别放置0、0.5、1、2h，FHb达到1.0g/L的时间分别为>60、60、50、30d；以AB型血浆作为保存介质，则分别为50、40、30、10d。由表2可见，四组红细胞随着保存时间延长，红细胞血型抗原的反应强度逐渐减弱；室温放置时间越长，抗原出现减弱的时间越早；以MAP作为保存介质，每天室温分别放置0、0.5、1、2h，血型抗原减弱达到1+的时间分别为>60、>60、60、40d；以AB型血浆作为保存介质，则分别为>60、60、50、20d。由此可见，冰冻亚型红细胞融化洗涤后的保存质量与红细胞的保存介质、保存温度和保存时间密切相关，也充分证明优化选择红细胞保存条件及使用效期的重要性和必要性。

从红细胞的保存介质进行分析，由于红细胞没有细胞核和线粒体，只能通过无氧酵解利用葡萄糖获取能量。在分解葡萄糖产生ATP的同时，也会产生乳酸和丙酮酸等代谢产物，这些产物在体内可被其他组织氧化利用，而在体外状态下却因得不到充分利用而使其pH下降，而pH过低时会引起ATP从红细胞中的释放速率加快，导致红细胞ATP耗竭，从而使红细胞寿命走向终结[7-8]。如果选择含有枸橼酸盐、葡萄糖、腺嘌呤、甘露醇等成分的MAP红细胞保存液作为保存介质，在一定时间内，其中的葡萄糖和腺嘌呤可为保存过程中的红细胞提供足够的ATP[9-11]，甘露醇则具有抵抗红细胞溶解和加固细胞膜的作用，所以能有效维持红细胞的形态与结构，其保存效果明显优于血浆介质。从红细胞的保存温度及保存时间进行分析，因为血液是一种热敏物质，对温度变化十分敏感，温度越高，红细胞代谢速率越快，能量消耗越多[12-13]，随着保存介质中营养物质的不断消耗以及代谢产物的逐渐堆积，进一步加重了红细胞的储存损伤，继而使红细胞裂解死亡。所以，红细胞在2～6℃冰箱保存效果最好，工作中应尽量缩短室温放置时间，从而有效保证红细胞的储存质量。

综上考虑，冰冻亚型红细胞融化洗涤后，以MAP红细胞保存液作为保存介质，于2～6℃冰箱中储存效果最佳，工作中每天室温使用时间应控制在1h以内，且时间越短，保存质量越好。红细胞用MAP保存液保存时，使用有效期确定为40d。该方法适用于将冰冻亚型红细胞作为弱阳性质控品，用于无偿献血者ABO血型鉴定室内质控时所需质控品的制备和保存。红细胞用血浆作为保存介质时，使用有效期确定为20d。该方法适用于对医疗机构供血库进行ABO血型鉴定质量测评、供血库输血技能比武以及血型血清学培训等工作中所需亚型标本的制备和保存。其他工作中如果红细胞能在20d内使用完毕，对悬浮介质也无特殊要求，比如对单克隆试剂进行质量评价、辅助鉴定某些亚型等，则不论选择哪一种保存方法，均能保证红细胞的使用效果。

[参考文献]

[1] 龚裕春，黄晨佳，邱颖婕，等.2组洗涤溶液制备冰冻解冻去甘油红细胞的效果比较[J].中国输血杂志，2010，23（9）：692-693.

[2] 李雪英，田宗斌，邱玉霞，等.6种ABO单克隆抗体试剂的质量评估[J].临床输血与检验，2012，14（4）：324-326.

[3] 邱玉霞，窦茉莉，李雪英.冰冻亚型红细胞在抗血清试剂选择中的应用[J].中国医学创新，2012，9（19）：70-71.

[4] 李雪英，邱玉霞，窦茉莉.冰冻亚型红细胞的保存及应用[J].山东医药，2012，52（35）：90-91.

[5] 叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程[M].第3版.南京：东南大学出版社，2006：246-271.

[6] 魏超，庄远，汪德清.红细胞保存时间与功能变化的研究进展[J].中国输血杂志，2013，26（11）：1152-1155.

[7] 武世文，文爱清.红细胞储存损伤的研究进展[J].中国输血杂志，2013，26（6）：593-595.

[8] 于青，刘嘉馨，王红，等.红细胞老化及其机制的研究进展[J].中国输血杂志，2012，25（1）：77-80.

[9] 王殿昌，马玉翠，王秀英，等.MAP红细胞悬液保存期内生化指标的动态观察[J].中国医科大学学报，2006，35（2）：207-208.

[10] 李建民，沈莉，张义兵，等.MAP洗涤和保存红细胞的效果观察[J].中国输血杂志，2003，16（2）：104-106.

[11] 沈莉，张义兵，李建民，等.两种洗液制备的洗涤红细胞的对比[J].中国输血杂志，2003，16（1）：28-29.

[12] 马庆，陆瑶，徐雪瑾，等.红细胞深低温长期保存效果的探讨[J].中国输血杂志，2007，20（1）：45-47.

[13] 马庆.深低温长期保存红细胞的效果评价[J].中国输血杂志，2012，25（9）：837-840.

（收稿日期：2014-06-08）endprint

[Key words] Frozen subgroup red blood cell； Melting and washing； Preservation； Quality

甘油作为最常用的细胞内低温保护剂，已广泛应用于红细胞的低温保存。利用该方法保存红细胞，可使红细胞寿命长达10年，甚至延长到21年[1]。我站利用该原理对日常工作中遇到的ABO亚型标本进行冰冻保存，并作为弱阳性参考品对多家单克隆抗血清试剂进行质量评价，从中挑选对亚型检出率高的试剂用于献血者血型鉴定的初、复检，在一定程度上提高了献血者的ABO亚型检出率[2-3]。为进一步将ABO亚型红细胞作为弱阳性质控品，有效应用于献血者ABO血型鉴定的室内质控及医院供血库ABO血型鉴定的质量测评等工作中，本研究对冰冻亚型红细胞融化洗涤后的保存条件及使用效期进行优化选择，报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

9%Nacl注射液（北京博得桑特输血器材公司）；0.9%Nacl注射液、抗-A、抗-B（上海血液生物医药有限责任公司）；1.6%Nacl溶液（由9%和0.9%Nacl注射液按比例配制）；血浆游离血红蛋白测定试剂盒（北京瑞尔达生物科技有限公司）；硫酸庆大霉素（开封制药集团有限公司）；MDF-192型-80℃低温冰箱（大连三洋冷链公司）；HH.W21.600型电热恒温水浴箱（北京光明医疗仪器厂）；LD5-2A型台式离心机（北京雷勃尔公司）。

1.2 红细胞分组和保存

从本站建立的冰冻亚型红细胞信息库[4]中，选择10份储存量较大、弱抗原与抗血清的反应强度为2+～3+的标本，融化洗涤后将压积红细胞各一分为二，分别以AB型血浆和MAP红细胞保存液按1.5倍的比例悬浮，加入终浓度为0.05mg/mL的硫酸庆大霉素混匀后，再各等分为1、2、3、4四组，第1组始终放置2～6℃冰箱保存，第2、3、4组每天在室温分别放置0.5、1和2h后，再放入2～6℃冰箱保存，于保存0、10、20、30、40、50、60d时，分别检测四组红细胞相关质量指标。

1.3 红细胞质量指标检测

用邻甲联苯胺法检测红细胞上清中FHb含量；用盐水试管法[5]检测红细胞A、B抗原。以红细胞每天置室温1h再恢复2～6℃储存的模式下，FHb浓度达1.0g/L，同时红细胞血型抗原减弱达1+的最小储存天数再减10d作为其使用效期。

1.4 统计学方法

采用SPSS17.0统计学软件，FHb检测数据用（）表示，计量资料比较采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

见表1、表2。

3 讨论

红细胞在体外保存过程中可发生一系列生物和毒性改变，且随着储存时间的延长其变化更加显著，统称为“红细胞保存损伤”。包括细胞形态变化、膜结构改变、ATP含量减少、乳酸堆积、K+的流失和Na+的聚集等，其中细胞膜带3蛋白结构的变化和脂质过氧化物反应引起的氧化损伤，可导致红细胞发生裂解[6]，不但严重影响红细胞血型抗原成分的稳定性，而且使细胞内的Hb游离出细胞外。所以测定红细胞抗原的反应性和上清中FHb浓度，可反映红细胞膜的破坏情况，是评价红细胞保存质量的重要指标。本研究通过分组设计，重点观察不同保存介质、保存温度及保存时间对红细胞抗原及FHb的影响程度，从而确定冰冻亚型红细胞融化洗涤后的最佳保存条件及使用效期，以保证其在血型血清学试验中的应用效果。

由表1可见，四组红细胞随着保存时间延长，上清FHb均逐渐升高；室温放置时间越长，上升幅度越大；以MAP作为保存介质，每天室温分别放置0、0.5、1、2h，FHb达到1.0g/L的时间分别为>60、60、50、30d；以AB型血浆作为保存介质，则分别为50、40、30、10d。由表2可见，四组红细胞随着保存时间延长，红细胞血型抗原的反应强度逐渐减弱；室温放置时间越长，抗原出现减弱的时间越早；以MAP作为保存介质，每天室温分别放置0、0.5、1、2h，血型抗原减弱达到1+的时间分别为>60、>60、60、40d；以AB型血浆作为保存介质，则分别为>60、60、50、20d。由此可见，冰冻亚型红细胞融化洗涤后的保存质量与红细胞的保存介质、保存温度和保存时间密切相关，也充分证明优化选择红细胞保存条件及使用效期的重要性和必要性。

从红细胞的保存介质进行分析，由于红细胞没有细胞核和线粒体，只能通过无氧酵解利用葡萄糖获取能量。在分解葡萄糖产生ATP的同时，也会产生乳酸和丙酮酸等代谢产物，这些产物在体内可被其他组织氧化利用，而在体外状态下却因得不到充分利用而使其pH下降，而pH过低时会引起ATP从红细胞中的释放速率加快，导致红细胞ATP耗竭，从而使红细胞寿命走向终结[7-8]。如果选择含有枸橼酸盐、葡萄糖、腺嘌呤、甘露醇等成分的MAP红细胞保存液作为保存介质，在一定时间内，其中的葡萄糖和腺嘌呤可为保存过程中的红细胞提供足够的ATP[9-11]，甘露醇则具有抵抗红细胞溶解和加固细胞膜的作用，所以能有效维持红细胞的形态与结构，其保存效果明显优于血浆介质。从红细胞的保存温度及保存时间进行分析，因为血液是一种热敏物质，对温度变化十分敏感，温度越高，红细胞代谢速率越快，能量消耗越多[12-13]，随着保存介质中营养物质的不断消耗以及代谢产物的逐渐堆积，进一步加重了红细胞的储存损伤，继而使红细胞裂解死亡。所以，红细胞在2～6℃冰箱保存效果最好，工作中应尽量缩短室温放置时间，从而有效保证红细胞的储存质量。

综上考虑，冰冻亚型红细胞融化洗涤后，以MAP红细胞保存液作为保存介质，于2～6℃冰箱中储存效果最佳，工作中每天室温使用时间应控制在1h以内，且时间越短，保存质量越好。红细胞用MAP保存液保存时，使用有效期确定为40d。该方法适用于将冰冻亚型红细胞作为弱阳性质控品，用于无偿献血者ABO血型鉴定室内质控时所需质控品的制备和保存。红细胞用血浆作为保存介质时，使用有效期确定为20d。该方法适用于对医疗机构供血库进行ABO血型鉴定质量测评、供血库输血技能比武以及血型血清学培训等工作中所需亚型标本的制备和保存。其他工作中如果红细胞能在20d内使用完毕，对悬浮介质也无特殊要求，比如对单克隆试剂进行质量评价、辅助鉴定某些亚型等，则不论选择哪一种保存方法，均能保证红细胞的使用效果。

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（收稿日期：2014-06-08）endprint