HPLC测定头痛宁胶囊中大黄素的含量

梁晓莉

(陕西步长制药有限公司，陕西 咸阳 712000)

HPLC测定头痛宁胶囊中大黄素的含量

梁晓莉*

(陕西步长制药有限公司，陕西 咸阳 712000)

目的：建立头痛宁胶囊中大黄素的含量测定方法。方法：采用Kromasil C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱，以甲醇-1%冰醋酸溶液(75∶25)为流动相，流速为1.0 mL·min-1，检测波长为254 nm，柱温为30 ℃。结果：大黄素在10.8～54.0 μg·mL-1呈良好的线性关系(r=0.999 9)，平均回收率为100.56%，RSD=1.26%(n=6)。结论：本方法简便、准确、专属性强、重复性好，可用于头痛宁胶囊中大黄素的质量控制。

头痛宁胶囊；HPLC；大黄素；含量测定

头痛宁胶囊是由天麻、制何首乌、防风、当归等6味中药组成的中成药，具有熄风涤痰、逐瘀止痛的功能。用于偏头痛，紧张性头痛属痰瘀阻络证，证见：痛势甚剧，或攻冲作痛，或痛如锥刺，或连及目齿，伴目眩畏光，胸闷脘胀，恶心呕吐，急躁易怒，反复发作[1]。大黄素是何首乌中主要药效成分，具广泛的生物活性，包括抗菌、抗炎、免疫调节和抗肿瘤等作用[2]。为能有效控制头痛宁胶囊的质量，保证用药安全，对头痛宁胶囊原有质量标准中以大黄素为指标性成分的含量测定方法进行研究优化。

1 仪器与试药

1.1仪器

Agilent1260型高效液相色谱仪(美国Agilent公司)；AG-135型电子天平(瑞士Mettler-Toledo)；KQ-300VDE型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限责任公司)。

1.2试药

对照品大黄素(中国食品药品检定研究院，批号：0756-200211，供含量测定用)；头痛宁胶囊(陕西步长制药有限公司，批号：20140301，20140302，20140303，规格：0.4g/粒)；甲醇为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：KromasilC18(150mm×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇-1%冰醋酸溶液(75∶25)；流速：1.0mL·min-1；检测波长：254nm；柱温：室温；进样量：20μL；理论板数按大黄素峰计算应不低于4000；用外标法计算含量。

2.2溶液制备

2.2.1对照品溶液 取大黄素对照品，精密称定，加甲醇溶解，制成含大黄素0.108mg·mL-1的溶液，即得。

2.2.2供试品溶液 取胶囊内容物约1g，精密称定，置于50mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20mL，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，称定重量，用甲醇补足重量，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液即得。

2.2.3阴性样品溶液 按处方比例称取除制何首乌以外的其余药味，按头痛宁胶囊制备工艺制成缺制何首乌的阴性样品，按照2.2.2项下方法制成阴性样品溶液。

2.3系统适用性试验

取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液各20μL，按照2.1项下色谱条件测定，大黄素的保留时间约6.48min，供试品色谱中大黄素峰与杂峰分离效果良好，阴性对照样品在相应位置上无干扰峰。见图1。

A.大黄素对照品 B.供试品 C.缺制何首乌的阴性对照品1.大黄素图1 头痛宁胶囊及对照品HPLC图

2.4线性关系考察

以质量浓度为0.108mg·mL-1的大黄素对照品溶液作为对照品储备液，分别精密移取1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL置于10mL量瓶中，用甲醇定容，分别得质量浓度为10.8，21.6，32.4，43.2，54.0μg·mL-1的对照品溶液。分别精密吸取20μL注入液相色谱仪，按2.1项下色谱条件测定峰面积，并以峰面积(Y)对质量浓度(X，μg·mL-1)进行线性回归，得线性方程Y=74.109X-1.476 0，r=0.999 9，结果表明大黄素在10.8～54.0 μg·mL-1呈良好线性关系。

2.5精密度试验

吸取质量浓度为21.6μg·mL-1的大黄素对照品溶液，重复进样6次，结果大黄素峰面积RSD=0.69%(n=6)，表明仪器精密度良好。

2.6稳定性试验

取头痛宁胶囊(批号：20140301)内容物约1g，精密称定，按照2.2.2项下方法制备6份供试品溶液，按2.1项色谱条件，精密吸取供试品溶液，分别在0，2，4，6，8，10h进样，记录大黄素峰面积，RSD=0.92%(n=6)，结果表明头痛宁胶囊供试品在10 h内稳定。

2.7重复性试验

取头痛宁胶囊(批号：20140301)内容物约1g，精密称定，按照2.2.2项下方法制备6份供试品溶液，按2.1项色谱条件，分别测定，记录峰面积。计算供试品中大黄素质量分数为0.525 2mg·g-1，RSD=0.44%(n=6)，表明供试品重复性良好。

2.8加样回收率试验

取已知浓度的头痛宁胶囊(批号：20140301)内容物约0.5g，共6份，精密称定，加入具塞锥形瓶中，分别精密加入质量浓度为0.108mg·mL-1的对照品溶液2mL，再精密加入甲醇18mL，精密称定，超声处理30min，放置室温，精密称定，用甲醇补足重量。按照2.2.2供试品制备方法，依2.1项色谱条件测定，记录峰面积，计算回收率，结果见表1。

2.9供试品含量测定

取20140301，20140302，201403033批头痛宁胶囊装量差异项下的样品内容物，按2.2项下操作，制备供试品溶液，按2.1项色谱条件进样测定，计算大黄素的质量分数，结果分别为0.525 2，0.520 6，0.532 6mg·g-1。

表1 头痛宁胶囊中大黄素加样回收率试验

注：大黄素对照品加入量均为0.216 mg

3 讨论

参考《中国药典》2010年版一部及文献报道，对大黄素含量测定方法进行考察。以甲醇为溶剂，分别考察了超声提取、加热回流等方法的提取效果[5]，其中超声提取法的提取效果最好。在流动相系统的选择中，比较甲醇-1%冰醋酸(70∶30)、甲醇-0.1%磷酸(80∶20)、乙腈-水(80∶20)等流动相[6-7]，结果选用甲醇-1%冰醋酸溶液(75∶25)为流动相能达到满意的分离效果，供试品中大黄素峰达到基线分离，峰形对称且分离度较好，出峰时间缩短为6.84 min。

为控制头痛宁胶囊的质量，保证用药安全有效，本研究以大黄素为指标性成分进行方法学考察，与头痛宁胶囊原标准比较，其分离度更好，出峰时间缩短，检测结果更加精准，表明该方法稳定、可靠、重复性好，可全面反映头痛宁胶囊的质量，为头痛宁胶囊中大黄素质量控制的进一步提高提供科学依据。

[1] 国家食品药品监督管理局.国家中成药标准汇编·中成药地方标准上升国家标准部分[S].经络·肢体·脑系分册.2002：59-61.

[2] 丁艳，黄志华.大黄素药理作用研究进展[J].中国药理与临床，2007，23(5)：235-238.

[3] 王梅，唐志华，宋忠兴.头痛宁胶囊中大黄素转移率的研究[J].陕西中医，2007，28(10)：1401-1402.

[4] 李庆杰，刘永强，常艳茹，等.头痛宁片质量标准的研究[J].时珍国医国药，2006，17(10)：2011-2012.

[5] 叶其蓁，周子晔，林观样.浙产何首乌根与叶中大黄素含量比较[J].中国药业，2012，21(3)：3-4.

DeterminationofEmodininToutongningCapsulesbyHPLC

LIANG Xiaoli

(Buchang Pharmaceutical Limited Company，Xianyang 712000，China)

Objective：To establish an HPLC method for the determination of the content of emodin in extracts of Toutongning Capsules.Methods：HPLC was applied.Diamonsil(R)C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)was used as the chromatographic column with methanol-1% glacial acetic acid(75∶25)as the mobile phase.The flow rate was 1.0 mL·min-1，which was determined under 254 nm.The column temperature was 30 ℃.Results：The linear range of emodin was 10.8～54.0 μg·mL-1(r=0.999 9)with an average recovery of 100.56%(RSD=1.26%，n=6).Conclusion：This method is simple and accurate，with good specificity and repeatability，which can serve as a scientific quantitative analysis methed for Toutongning capsules.

Toutongning capsules；HPLC；Emodin；Content determination

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梁晓莉，工程师，研究方向：中药制剂检验；E-mail：409121544@qq.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.10.013

2014-07-14)