甘肃不同产区红芪中指标性成分含量的比较△

李成义，王燕，强正泽，杨建成，王明伟

(甘肃中医学院，甘肃 兰州 730000)

甘肃不同产区红芪中指标性成分含量的比较△

李成义，王燕，强正泽，杨建成，王明伟*

(甘肃中医学院，甘肃 兰州730000)

目的：采用高效液相色谱法，测定甘肃不同产区红芪中毛蕊异黄酮和芒柄花素含量，对产区与指标性成分的相关性进行研究。方法：色谱柱为TC-C18(2)柱(250mm×4.6mm，5μm)，TC-C18保护柱(10mm×4.6mm，5μm)，流动相为乙腈-0.01%磷酸水溶液(梯度洗脱)，流速为1.0mL·min-1，检测波长为248nm，柱温为30℃，进样量为10μL。结果：经系统聚类分析方法分析，采自陇南市和定西市的16批样品可分为三大类，其中采自陇南市武都区、宕昌县的9个产地的红芪中毛蕊异黄酮和芒柄花素的含量较高，芒柄花素含量在111.72～424.92μg·g-1，毛蕊异黄酮含量在17.20～34.34μg·g-1；而采自定西市岷县、陇西县和宕昌县部分乡镇的红芪中毛蕊异黄酮和芒柄花素的含量较低，芒柄花素含量在74.35～182.88μg·g-1，毛蕊异黄酮含量在2.27～13.56μg·g-1。结论：不同产区红芪药材中指标性成分毛蕊异黄酮和芒柄花素含量存在一定的差异。武都、宕昌产红芪质量优于岷县、陇西等地所产红芪药材，这与武都、宕昌为红芪道地产区一致，可为红芪GAP种植基地的选址提供参考依据。

红芪；毛蕊异黄酮；芒柄花素；HPLC-DAD；聚类分析

红芪又名绵芪、独根、黑芪，为甘肃主产特色药材之一，来源于豆科岩黄芪属植物多序岩黄芪HedysarumpolybotrysHand.-Mazz.[1]的干燥根。红芪始载于梁代陶弘景所撰的《神农本草经集注》，书中提到：“又有赤色者，可作膏贴，俗方多用，道家不须”[2]。红芪，其性微温，味甘，入肺、脾经，具有补气升阳，固表止汗，利水消肿，生津养血，行滞通痹，托毒排脓，敛疮生肌的功能。红芪在中医临床上常作为补益药与其他中药配伍使用，用于治疗气虚引起的各种病症[3]。本研究以甘肃不同产地红芪为研究对象，通过对其指标性成分毛蕊异黄酮和芒柄花素的测定，研究红芪的指标性成分与产地的相关性，为红芪规范化种植基地的选择提供参考和依据。

1 仪器与材料

1.1仪器

Agilent1200型高效液相色谱仪(安捷伦公司)；DAD检测器(美国)；AL104型电子天平[万分之一，梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司]；OHAUSCorporationDVSERIES型电子天平(十万分之一，奥豪斯仪器有限责任公司)；DJ-02型中药粉碎机(上海淀久中药机械制造有限公司)；HHS-4S型电热恒温水浴锅(上海宜昌仪器纱筛厂)；KQ-250TDB型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2材料

毛蕊异黄酮对照品、芒柄花素对照品(成都曼思特生物科技有限公司，批号分别为MUST-13030602，MUST-13050801，纯度均为99%)；乙腈(天津市光复精细化工研究所，色谱纯)；甲醇(天津市津东天正精细化学试剂厂，分析纯)；磷酸(天津市凯信化学工业有限公司，优级纯)；水(娃哈哈纯净水)。

实验所用16批红芪药材样品分别采自甘肃省陇南市武都区、宕昌县和定西市岷县、陇西县，经甘肃中医学院药学院杨扶德教授鉴定均为豆科植物多序岩黄芪HedysarumpolybotrysHand.-Mazz.的干燥根。

2 方法与结果

2.1色谱条件

TC-C18(2)色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)，TC-C18保护柱(10mm×4.6mm，5μm)，流动相为乙腈-0.01%磷酸水溶液，梯度洗脱(0～25min，30%～33%B；25～45min，33%～36%B)，流速为1.0mL·min-1，检测波长为248nm，柱温为30℃，进样量为10μL。在此色谱条件下色谱图分离度良好，见图1。

A.供试品 B.对照品1.毛蕊异黄酮 2.芒柄花素图1 红芪药材及对照品HPLC图

2.2溶液的配制

2.2.1混合对照品溶液的配制 分别精密称取毛蕊异黄酮和芒柄花素对照品1.13，4.05mg，分别置于10mL量瓶中，加甲醇超声溶解，定容于10mL量瓶中，作为对照品贮备液A、B。分别精密吸取这两种对照品贮备液2mL，用甲醇定容至10mL，制成混合对照品溶液。

2.2.2供试品溶液的配制 精密称取红芪药材样品粉末3.0000g，置150mL锥形瓶中，加入甲醇30mL，于80℃水浴回流提取1h，过滤，滤液减压回收甲醇，至一定量后再以适量甲醇定容至10mL量瓶中，进样前以0.45μm微孔滤膜过滤，作为供试品溶液[4]。

2.3线性关系考察

分别精密吸取一定量的混合对照品溶液，将其制成8个系列质量浓度的混合对照品溶液，其中毛蕊异黄酮质量浓度为0.226，0.452，2.260，11.300，22.600，33.900，45.200，61.020μg·mL-1，芒柄花素质量浓度为0.810，1.620，8.100，40.500，81.000，121.500，162.000，218.700μg·mL-1，进样10μL，测定。以质量浓度(μg·mL-1)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，得毛蕊异黄酮回归方程Y=39.538X-0.1456，r=0.9999，结果表明毛蕊异黄酮在0.226～61.020μg·mL-1线性关系良好；得芒柄花素回归方程Y=60.769X-9.0639，r=0.9999，结果表明芒柄花素在0.810～218.700μg·mL-1线性关系良好。

2.4精密度试验

精密吸取2.2.1项下所制毛蕊异黄酮和芒柄花素的混合对照品溶液，连续进样6次，按2.1项下色谱条件测定峰面积，结果毛蕊异黄酮和芒柄花素峰面积积分值的RSD分别为0.05%、0.04%，表明仪器精密度良好。

2.5稳定性试验

取同一产地的红芪供试品溶液(陇西首阳)，于室温下放置，分别于0，4，8，12，20，24h进样检测，按毛蕊异黄酮和芒柄花素的峰面积积分值计算RSD，分别为2.65%，0.72%，表明供试品溶液在24h内稳定性良好。

2.6重复性试验

取同一产地的红芪样品粉末(陇西首阳)，精密称取样品6份，按2.2.2项下方法制成6份供试品溶液，按2.1项下色谱条件分别测定，结果该样品中毛蕊异黄酮和芒柄花素质量分数的RSD分别为1.50%，0.76%，表明方法重复性良好。

2.7加样回收率试验

精密称定已知毛蕊异黄酮和芒柄花素含量的同一产地的红芪样品(陇西首阳)9份，每份约1.0g，精密加入一定量的毛蕊异黄酮和芒柄花素对照品，其加入量分别为该样品中相应成分含量的80%(10.17，222.75μg)、100%(14.69，263.25μg)、120%(18.08，303.75μg)，按2.2.2项下方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件测定，结果毛蕊异黄酮和芒柄花素回收率的RSD分别为2.76%，2.52%。

2.8 不同产地样品中毛蕊异黄酮和芒柄花素的含量测定

16批红芪药材样品的供试品溶液均按2.2.2项下方法制备，按2.1项下所述色谱条件进行测定，分别记录毛蕊异黄酮和芒柄花素相应色谱峰的峰面积，然后将色谱峰峰面积代入相应的回归方程，计算不同产地红芪中毛蕊异黄酮和芒柄花素的质量分数，结果见表1。

表1 不同产地红芪药材中毛蕊异黄酮、芒柄花素的测定 /μg·g-1

2.9聚类分析

此分析方法对所得数据采用Z-Score法进行标准化处理，用欧氏距离平方法(SquaredEuclideandistance)计算样品间相似性程度，选用组间平均距离连接法(Between-groupsLinkage)进行聚类，分析结果见图2。

图2 甘肃不同产区红芪聚类分析树状图

3 讨论

从表1可以看出，采自武都、宕昌9批红芪中芒柄花素和毛蕊异黄酮的含量均高于岷县和陇西县所产红芪。其中分布于米仓山一带的武都安化镇和鱼龙镇所产红芪药材中2个异黄酮类成分的含量相对较高，这进一步诠释了道地药材“米仓红芪”的内在意义。

通过实验数据分析及相应的方法学考察，结果表明所采用的同时测定红芪药材中两种化合物含量的检测方法简便、可靠、准确，且具有一定的实用性，可用于红芪药材样品的质量控制。

采用SPSS13.0软件中系统聚类分析法[5-6]，以红芪药材中毛蕊异黄酮和芒柄花素的含量为考察指标，对16个产地的红芪药材样品进行了化学模式识别研究。分析结果显示，不同产区红芪药材中毛蕊异黄酮和芒柄花素含量存在一定的差异。采自陇南市和定西市的16批样品可分为三大类，其中采自陇南市武都区、宕昌县9个产地的红芪中毛蕊异黄酮和芒柄花素的含量较高，芒柄花素含量在111.72～424.92μg·g-1，毛蕊异黄酮含量在17.20～34.34μg·g-1，可以认为这几个产地红芪品质较优；而采自定西市岷县、陇西县和宕昌县部分地区的红芪中毛蕊异黄酮和芒柄花素含量较低，芒柄花素含量在74.35～182.88μg·g-1，毛蕊异黄酮含量在2.27～13.56μg·g-1，其红芪品质较差。总体而言，产自武都、宕昌的红芪品质优于岷县、陇西产红芪，这与武都、宕昌为红芪道地产区一致，可为红芪GAP种植基地的选址提供参考依据。

[1] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：142.

[2] 李时珍.本草纲目[M].校点本.第二册.北京：人民卫生出版社，1979：696.

[3] 权菊香.红芪的药理研究进展[J].时珍国药研究，1997，8(2)：178-180.

[4] 梁丽娟，赵奎君，屠鹏飞，等.HPLC法同时测定黄芪中4种黄酮类成分的含量[J].中国药房，2010，21(15)：1385-1387.

[5] 李辉，叶青.不同产地北柴胡质量的化学模式识别研究[J].中国药师，2005，8(3)：214-215.

[6] 董海荣，王睿，赵卉，等.不同产地苦杏仁质量的化学模式识别研究[J].辽宁中医杂志，2009，36(12)：2147-2149.

ComparativeStudyAboutContentsofMarkComponentsinHedysariRadixfromDifferentHabitatsinGansuProvince

LI Chengyi，WANG Yan，QIANG Zhengze，YANG Jiancheng，WANG Mingwei*

(Gansu College of Traditional Chinese Medicine，Lanzhou 730000，China)

Objective：To determine the contents of calycosin and formononetin in Hedysari Radix from different habitats by HPLC and explore the correlation between production areas and mark components.Methods：The sample was separated on TC-C18(2)(250 mm×4.6 mm，5 μm)column.The mobile phase consisted of acetonitrile and 0.01% phosphoric acid solution(gradient elution)at a flow rate of 1.0 mL·min-1.The UV detection wave length was set at 248 nm.The column temperature was set at 30 ℃.The injection volume was set at 10 μL.Results：The 16 samples from different habitats were divided into 3 categories according to the result of hierarchical cluster analysis.The content of formononetin in Hedysari Radix from Wudu and Tanchang was between 111.72～424.92 μg·g-1，and calycosin between 17.20～34.34 μg·g-1；The content of formononetin in Hedysari Radix from Minxian and Longxi was between 74.35～182.88 μg·g-1，and calycosin between 2.27～13.56 μg·g-1.Conclusion：The contents of calycosin and formononetin in Hedysari Radix from different habitats marked difference.It was found that those Hedysari Radix produced in Wudu and Tanchang are higher quality than those in Minxian and Longxi，which was consistent with the idea that Wudu and Tanchang were the genuine producing area of Hedysari Radix，and it can provide reference for establishing GAP base of Hedysari Radix.

Hedysari Radix；Calycosin；Formononetin；HPLC-DAD；Hierarchical cluster analysis

国家自然科学基金委员会资助项目(地区科学基金项目)——甘肃地产药材红芪道地性与生态因子的相关性研究(81360621)

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王明伟，讲师，研究方向：中药品种与质量研究；Tel：(0931)8765390，E-mail：wmw2009@126.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.10.004

2014-07-01)