Neuritin在胃癌中的表达水平及意义＊

李维嘉，钟 晨，王锦国，牛少雄，牛建华△，李永康，黄 瑾

（石河子大学医学院：1.第一附属医院普外三科；2.生物化学与分子生物学教研室，新疆石河子832000）

Neuritin是以色列科学家Nedivi等［1］在1993年通过构建谷氨酸类似物海人藻酸（kainic acid，KA）激活型大鼠海马齿状回cDNA文库得到的一个基因。之前的研究表明，Neuritin在神经突起的生长和成熟中起着重要作用［2－4］。但近年来有研究表明，Neuritin的作用不仅局限于神经系统，在神经系统以外的某些肿瘤组织中存在高表达，且在一定程度上参与了肿瘤的发生、发展［5－11］。然而，胃癌作为消化系统常见的恶性肿瘤，目前国内外尚未见Neuritin在胃癌中表达的研究。本研究旨在通过检测Neuritin在胃癌组织中的表达水平，以探讨其与胃癌发生、发展的相关性。

1 材料与方法

1.1 材料 本实验所采用的标本为58例胃癌患者手术存档蜡块（胃癌组织及同一患者的癌旁正常组织），均来自2010～2013年石河子大学医学院第一附属医院病理科，均经本院病理科行病理诊断证实。所有患者均经术后组织病理学确诊为胃癌，有明确的手术时间，术前均未接受化疗和放疗，其中男40例（68.97%），女18例（31.03%）；标本患者年龄35～80岁，平均60岁；隆起型胃癌4例（6.70%），溃疡型胃癌45例（77.59%），浸润型胃癌9例（15.52%）。Neuritin抗体购于Sigma公司（PRS4101），第二抗体购于中杉金桥公司（PV－6001）。

1.2 方法 免疫组织化学染色，每张切片的厚度为4μm。采用Envision两步法：切片脱蜡至水，微波加热（95℃、15min）以修复抗原，H2O2孵育10min以减少背景染色；4℃一抗孵育过夜（1∶200稀释）；PBS振洗3次，每次5min；滴加第二抗体，37℃孵育30min；PBS振洗3次，每次5min。DAB显色后进行苏木素核复染、脱水、透明、封片、干燥。每次实验均以PBS代替第一抗体作为阴性对照。结果判断采用AB值法。A：按切片中细胞显色有无及深浅评分，0分：无着色；1分：浅黄色；2分：棕／深黄色；3分：棕褐色。B：按切片中显色细胞比例评分，1分：显色细胞占切片中细胞总数的10%以下；2分：大于等于10%至小于50%的细胞显色；3分：大于等于50%至小于75%以上细胞显色；4分：75%以上细胞显色。每例样本积分＝A×B，按积分高低划分：小于等于4分：阴性；5～8分：阳性；9～12分：强阳性。

1.3 统计学处理 采用SPSS17.0统计软件对所得数据进行分析处理，百分率比较用χ2检验。检验水准α＝0.05。

2 结 果

2.1 胃癌石蜡组织免疫组织化学染色结果 Neuritin表达的阳性部位位于胞浆和胞核，胞浆着色明显，着色为棕黄色或棕褐黄色；胞核着色较弱，着色为淡黄色或棕黄色。58例胃癌组织中有2例表达为阴性，8例表达为阳性，48例表达为强阳性（图1、2），阳性率为96.55%，强阳性率为82.76%；58例癌旁正常组织中有3例表达为阴性，46例表达为阳性（图3、4），9例表达为强阳性，阳性率为94.83%，强阳性率为15.52%。图5为阴性对照。Neuritin在两组间表达的阳性率比较差异无统计学意义（P＞0.05），见表1，但Neuritin在两组间表达的强阳性率比较差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

图1 胃癌组织中Neuritin蛋白阳性表达（×200）

图2 胃癌组织中Neuritin蛋白强阳性表达（×200）

图3 癌旁正常组织中Neuritin蛋白阳性表达（×200）

2.2 胃癌中Neuritin的表达与临床病理参数的关系 Neuritin高表达与患者的性别、年龄、肿瘤的TNM分期、浸润深度、淋巴结转移、分化程度、病理学类型及有无远处转移均无相关性（均P＞0.05），见表3。

图4 癌旁正常组织中Neuritin蛋白强阳性表达（×200）

图5 阴性对照（×200）

表1 Neuritin在胃癌及癌旁正常组织中表达水平比较［n（%）］

表2 Neuritin在胃癌及癌旁正常组织中表达的强阳性情况［n（%）］

表3 Neuritin的表达水平与胃癌临床病理参数的关系

续表3 Neuritin的表达水平与胃癌临床病理参数的关系

3 讨 论

Neuritin是神经营养因子家族中的一种小分子物质，之前Neuritin的研究一直集中在神经系统，近年来的研究显示在神经系统外的其他组织也有 Neuritin的表达［5－11］。黄瑾等［7］发现Neuritin在人脐静脉内皮细胞、肝细胞等正常人体细胞中存在有表达。Kojima等［5］发现Neuritin在心、肺、卵巢也有一定的表达。Raggo等［12］将转染了Neuritin的3T3细胞注射到裸鼠体内，发现相应部位可出现肿瘤。巴鹏飞等［9］发现Neuritin在肺癌组织中存在高表达，可能参与了肺癌的发生、发展。曹健等［13］发现Neuritin在乳腺癌组织中存在高表达，且与乳腺癌的淋巴结转移、TNM分期相关。黄瑾等［7］发现Neuritin在膀胱癌细胞及胆管内皮癌细胞等细胞株中无表达。而胃癌作为消化系统常见的恶性肿瘤，目前国内外尚未见Neuritin在胃癌中表达的研究。

本研究发现，Neuritin在胃癌及癌旁正常组织中均有表达，显微镜下大部分胃癌癌旁正常组织切片中Neuritin着色为棕黄色，着色细胞比例大于50%，表明胃癌癌旁正常组织存在Neuritin表达；显微镜下大部分胃癌组织切片中Neuritin着色为棕褐色，着色细胞比例大于75%，统计学分析表明胃癌组织中Neuritin的表达程度明显高于癌旁正常组织组中Neuritin的表达程度（P＜0.05），表明Neuritin在胃癌组织中存在高表达。钟晨［14］研究表明，Neuritin的高表达能够部分抑制Notch信号途径配体JAG1蛋白的内吞，进而抑制Notch信号途径的激活。还有学者发现Notch1信号通路的激活可以抑制胃癌细胞的增殖［15］。所以，Neuritin的高表达或许在一定程度上通过影响Notch信号途径的激活促进了胃癌细胞的增殖，进而影响了胃癌的发生、发展。但Neuritin在胃癌组织中的高表达是否能够通过影响Notch1通路从而影响胃癌的发生、发展，这还有待于进一步研究。本研究表明Neuritin的表达与胃癌患者的年龄、肿瘤的分化程度及病理学类型无相关性，这与曹健等［13］在乳腺癌中的研究结果相似。但是，曹健等［13］发现Neuritin的表达与乳腺癌的淋巴结转移、TNM分期相关，而本研究发现Neuritin的表达与胃癌的淋巴结转移、TNM分期等没有相关性，这或许是因为本实验样本量有限，有待于扩大样本量进一步研究。

综上所述，Neuritin在胃癌组织与癌旁正常组织中的表达水平存在差异，胃癌组织中Neuritin存在高表达，并且Neuritin有可能成为胃癌预防和治疗的一个新靶点。

［1］Nedivi E，Hevroni D，Naot D，et al.Numerous candidate plasticity－related gense revealed by differential cDNA cloning［J］.Nature，1993，363（6431）：718－722.

［2］Putz U，Harwell C，Nedivi E.Soluble CPG15expressed during early development rescues cortical progenitor from apoptosis［J］.Nat Neurosci，2005，8（3）：323－331.

［3］Cantallops I，Haas K，Cline HT.Postsynaptic CPG15promotes synaptic maturation and presynaptic axon arbor elaboration in vivo［J］.Nat Neurosci，2000，3（10）：1004－1011.

［4］Klussmann S，Martin－villalba A.Molecular targets in spinal cord injury［J］.J Mol Med（Berl），2005，83（9）：657－671.

［5］Kojima N，Shiojiri N，Sakai Y，et al.Expression of neuritin during liver maturation and regeneration［J］.FEBS Lett，2005，579（21）：4562－4566.

［6］Seale P，Ishibashi J，Holterman C，et al.Muscle satellite cell－specific genes identified by genetic profiling of MyoD－deficient myogenic cell［J］.Dev Biol，2004，275（2）：287－300.

［7］黄瑾，杨磊，应康，等.Neuritin cDNA的克隆及表达［J］.复旦学报：自然科学版，2001，40（5）：521－524.

［8］徐芬，巴鹏飞，张树军，等.人部分正常与肿瘤细胞株中neuritin表达的检测［J］.农垦医学，2007，29（3）：161－164.

［9］巴鹏飞，赵瑾，李新丽，等.Neuritin基因在肺癌及正常肺组织中表达的检测［J］.农垦医学，2007，29（4）：254－256.

［10］李乐翔，赵永更，张磊，等.Neuritin基因在胶质瘤组织中的表达研究［J］.中华神经外科疾病研究杂志，2009，8（5）：409－412.

［11］Zhang L，Zhao YG，Wang CG，et al.Neuritin expression and its relation with proliferation，apoptosis，and angiogenesis in human astrocytoma［J］.Med Oncol，2011，28（3）：907－912.

［12］Raggo C，Ruhl R，McAllister S，et al.Novel cellular genes essential for transformation of endothelial cells by Kaposi′s sarcoma－associated herpesvirus［J］.Cancer Res，2005，65（12）：5084－5095.

［13］曹健，王瑞，侯进，等.乳腺癌组织中神经营养因子Neuritin的表达及其临床意义［J］吉林大学学报：医学版，2013，39（4）：799－803.

［14］钟晨.Neuritin对Neuralized介导的Notch信号途径配体JAG1泛素化的影响［D］.石河子：石河子大学，2011.

［15］默娟，李红.Notch1信号通路对胃癌细胞增殖的影响［J］.山东医药，2012，52（7）：15－17.