鼻咽癌中环氧化酶—2的实验研究

陈广理　王俊周　郭晓民　等

【摘要】 目的 研究环氧化酶-2在鼻咽癌中的表达， 探讨其与鼻咽癌的增生、浸润及转移的关系。方法 在26例鼻咽癌及相应癌旁组织和10例正常鼻咽部黏膜组织中， 应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测环氧化酶-2 mRNA的表达。结果 在鼻咽癌组织中环氧化酶-2 mRNA高表达， 在正常鼻咽部黏膜环氧化酶-2 mRNA中低表达， 差异具有统计学意义（P<0.01）。结论 环氧化酶-2与鼻咽癌的生长、浸润及转移有密切关系。

【关键词】 鼻咽癌；环氧化酶-2；逆转录-聚合酶链反应

环氧化酶-2（cyclooxygenase-2， COX-2）是前列腺素（PGs）合成过程中主要限速酶， 不仅在炎症等过程中发挥重要作用， 而且还与肿瘤的增生、浸润和转移密切相关[1]。鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma， NPC）是具有极高的浸润和转移能力的肿瘤本实验通过RT-PCR方法研究在鼻咽癌中COX-2的表达， 探讨COX-2在鼻咽癌的增生、浸润及转移中的作用。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 鼻咽癌及相应癌旁组织26例， 来源于本院鼻咽部活检标本， 其中有淋巴结转移病例19例、无淋巴结转移病例7例。癌旁组织取自肿瘤边缘5 mm以外区域， 10例正常鼻咽部黏膜组织取于鼻咽部正常的手术患者。病理学诊断均为鳞状细胞癌， 其中高分化3例、中分化4例、低分化19例。其中男19例， 女7例， 年龄最小27岁， 最大78岁， 平均年龄（48.026±5.517）岁， 术前均未经化疗或放疗。

1. 2 主要试剂与仪器 逆转录酶MLV（MBI）， TRIzol试剂（GibCO）， dNTP（MBI）， TaqDNA聚合酶（MBI）， GDS8000型凝胶成像系统（UVP）， PTC-200 PCR仪（MJA）， Grab-it 4.0分析软件为Gelworks 1D interdiate， DU650型紫外光分光光度仪（BECKMAN）。

1. 3 引物设计 泳道M：Marker；泳道1～2分别是COX-2 mRNA在无淋巴结转移的鼻咽癌组织和有淋巴结转移鼻咽癌组织中的PCR产物（236 bp）；泳道3～4分别是COX-2 mRNA在癌旁组织和正常鼻咽部黏膜中的PCR产物（236 bp）。

1. 4 组织RNA提取和cDNA合成 取约50 mg组织放入匀浆器中， 匀浆加入1 ml TRIzol， 用氯仿和异丙醇逐步提取RNA， 溶于焦碳酸二乙脂水中， 然后应用紫外分光光度仪检测定量。

1. 5 RT-PCR反应 以cDNA为模板， 扩增COX-2 （236 bp）及β-actin （300 bp）等基因片断。

PCR反应体系为25 μl， 含上述基因cDNA 2.0 μl， dNTP 的终浓度0.2 mmol/L， 10×Buffer 2.5 μl， Mg2+的终浓度2.0 mmol/L， TaqDNA聚合酶1 U， 上游和下游引物的终浓度各0.2 μmol/L。β-actin为内参照物。

PCR反应条件为95℃预变性5 min， 95℃ 1 min、50℃ 1 min、72℃ 1 min， 然后72℃延伸5 min。反应结束后取5 μl产物电泳， 用grab-It成像系统照像， 然后分析各条带的积分吸光密度值， 以目的基因与β-actin的相对积分吸光密度值记录结果。

1. 6 统计学方法 采用SPSS17.0统计学软件对数据进行统计学分析。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验。P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2. 2 在鼻咽癌癌旁组织和正常鼻咽部黏膜中COX-2 mRNA低表达， 见图1， 相对平均吸光度值分别为：（0.2069±0.0372）、（0.2183±0.0417）。二值差异无统计学意义（t=1.358， P>0.05）。

2. 3 在鼻咽癌组织中COX-2 mRNA的表达与在正常鼻咽部黏膜COX-2 mRNA的表达之间， 差异均具有统计学意义（P<0.01）。

3 讨论

鼻咽癌为我国最常见的恶性肿瘤之一， 是极易转移的肿瘤， 通常颈淋巴结转移常为患者最早发现的体征， 颈部肿块为此病首发者约占60%。COX-2在正常组织中不表达或微量表达， 而在病理情况下， COX-2在炎症、肿瘤等组织中表达增高， COX-2的高表达与多种肿瘤的发生发展关系密切[1]。本实验检测表明， COX-2在鼻咽癌组织中均高表达， 在癌旁组织和正常鼻咽部黏膜中低表达。本实验结果表明， 鼻咽癌的增长、浸润及转移与COX-2的高表达有密切的关系。

3. 1 COX-2促进肿瘤新生血管的形成血管内皮生长因子（VEGF）是促进肿瘤新生血管生成的作用最强的因子之一。在肿瘤中高表达的COX-2可促使VEGF生成增加， COX-2与VEGF协同作用， 促进肿瘤新生血管的生成[2]。文献报道， 在鼻咽癌中VEGF高表达， 鼻咽癌的失控增殖能力与VEGF的高表达有密切关系。结合本实验结果， 在鼻咽癌组织中COX-2高表达， 表明COX-2与VEGF共同促进鼻咽癌新生血管的生成。

3. 2 COX-2促进肿瘤细胞的增殖 在肿瘤中COX-2高表达， 促进肿瘤合成大量PGs， 进而促进肿瘤细胞增殖[3]。结合本实验结果， COX-2在鼻咽癌组织中均高表达， 表明COX-2促进了鼻咽癌细胞的增殖。

3. 3 COX-2促进肿瘤的浸润和转移 研究表明， 在肿瘤组织中COX-2表达增高， 同时有基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9的表达升高， E-钙粘连素的表达降低， 共同促进了肿瘤细胞的浸润和转移。鼻咽癌是具有极高浸润和转移能力的肿瘤， 本实验结果显示， COX-2在鼻咽癌组织中均高表达， 表明COX-2促进了鼻咽癌细胞的浸润和转移。

综上所述， 鼻咽癌中COX-2表达升高， 说明了鼻咽癌细胞的增生、浸润及转移与COX-2的高表达有密切关系。因此， COX-2成为了研究和治疗肿瘤的重要靶分子之一， 在抗肿瘤的研究治疗中有重要的意义。

参考文献

[1] Fukazawa EM， Baiocchi G， Soares FA， et al. Cox-2， EGFR， and ERBB-2 Expression in Cervical Intraepithelial Neoplasia and Cervical Cancer Using an Automated Imaging System. Int J Gynecol Pathol， 2014， 33（3）：225-234.

[2] Nagoya H， Futagami S， Shimpuku M， et al. Apurinic/apyrimidinic endonuclease-1 is associated with angiogenesis and VEGF production via upregulation of COX-2 expression in esophageal cancer tissues. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol， 2014， 306（3）：183-190.

[3] Zhao H， Luo F， Li H， et al. Antinociceptive Effect of Tetrandrine on LPS-Induced Hyperalgesia via the Inhibition of IKKβ Phosphorylation and the COX-2/PGE2 Pathway in Mice. PLoS One， 2014， 9（4）：e94586.

[收稿日期：2014-05-05]endprint

【摘要】 目的 研究环氧化酶-2在鼻咽癌中的表达， 探讨其与鼻咽癌的增生、浸润及转移的关系。方法 在26例鼻咽癌及相应癌旁组织和10例正常鼻咽部黏膜组织中， 应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测环氧化酶-2 mRNA的表达。结果 在鼻咽癌组织中环氧化酶-2 mRNA高表达， 在正常鼻咽部黏膜环氧化酶-2 mRNA中低表达， 差异具有统计学意义（P<0.01）。结论 环氧化酶-2与鼻咽癌的生长、浸润及转移有密切关系。

【关键词】 鼻咽癌；环氧化酶-2；逆转录-聚合酶链反应

环氧化酶-2（cyclooxygenase-2， COX-2）是前列腺素（PGs）合成过程中主要限速酶， 不仅在炎症等过程中发挥重要作用， 而且还与肿瘤的增生、浸润和转移密切相关[1]。鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma， NPC）是具有极高的浸润和转移能力的肿瘤本实验通过RT-PCR方法研究在鼻咽癌中COX-2的表达， 探讨COX-2在鼻咽癌的增生、浸润及转移中的作用。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 鼻咽癌及相应癌旁组织26例， 来源于本院鼻咽部活检标本， 其中有淋巴结转移病例19例、无淋巴结转移病例7例。癌旁组织取自肿瘤边缘5 mm以外区域， 10例正常鼻咽部黏膜组织取于鼻咽部正常的手术患者。病理学诊断均为鳞状细胞癌， 其中高分化3例、中分化4例、低分化19例。其中男19例， 女7例， 年龄最小27岁， 最大78岁， 平均年龄（48.026±5.517）岁， 术前均未经化疗或放疗。

1. 2 主要试剂与仪器 逆转录酶MLV（MBI）， TRIzol试剂（GibCO）， dNTP（MBI）， TaqDNA聚合酶（MBI）， GDS8000型凝胶成像系统（UVP）， PTC-200 PCR仪（MJA）， Grab-it 4.0分析软件为Gelworks 1D interdiate， DU650型紫外光分光光度仪（BECKMAN）。

1. 3 引物设计 泳道M：Marker；泳道1～2分别是COX-2 mRNA在无淋巴结转移的鼻咽癌组织和有淋巴结转移鼻咽癌组织中的PCR产物（236 bp）；泳道3～4分别是COX-2 mRNA在癌旁组织和正常鼻咽部黏膜中的PCR产物（236 bp）。

1. 4 组织RNA提取和cDNA合成 取约50 mg组织放入匀浆器中， 匀浆加入1 ml TRIzol， 用氯仿和异丙醇逐步提取RNA， 溶于焦碳酸二乙脂水中， 然后应用紫外分光光度仪检测定量。

1. 5 RT-PCR反应 以cDNA为模板， 扩增COX-2 （236 bp）及β-actin （300 bp）等基因片断。

PCR反应体系为25 μl， 含上述基因cDNA 2.0 μl， dNTP 的终浓度0.2 mmol/L， 10×Buffer 2.5 μl， Mg2+的终浓度2.0 mmol/L， TaqDNA聚合酶1 U， 上游和下游引物的终浓度各0.2 μmol/L。β-actin为内参照物。

PCR反应条件为95℃预变性5 min， 95℃ 1 min、50℃ 1 min、72℃ 1 min， 然后72℃延伸5 min。反应结束后取5 μl产物电泳， 用grab-It成像系统照像， 然后分析各条带的积分吸光密度值， 以目的基因与β-actin的相对积分吸光密度值记录结果。

1. 6 统计学方法 采用SPSS17.0统计学软件对数据进行统计学分析。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验。P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2. 2 在鼻咽癌癌旁组织和正常鼻咽部黏膜中COX-2 mRNA低表达， 见图1， 相对平均吸光度值分别为：（0.2069±0.0372）、（0.2183±0.0417）。二值差异无统计学意义（t=1.358， P>0.05）。

2. 3 在鼻咽癌组织中COX-2 mRNA的表达与在正常鼻咽部黏膜COX-2 mRNA的表达之间， 差异均具有统计学意义（P<0.01）。

3 讨论

鼻咽癌为我国最常见的恶性肿瘤之一， 是极易转移的肿瘤， 通常颈淋巴结转移常为患者最早发现的体征， 颈部肿块为此病首发者约占60%。COX-2在正常组织中不表达或微量表达， 而在病理情况下， COX-2在炎症、肿瘤等组织中表达增高， COX-2的高表达与多种肿瘤的发生发展关系密切[1]。本实验检测表明， COX-2在鼻咽癌组织中均高表达， 在癌旁组织和正常鼻咽部黏膜中低表达。本实验结果表明， 鼻咽癌的增长、浸润及转移与COX-2的高表达有密切的关系。

3. 1 COX-2促进肿瘤新生血管的形成血管内皮生长因子（VEGF）是促进肿瘤新生血管生成的作用最强的因子之一。在肿瘤中高表达的COX-2可促使VEGF生成增加， COX-2与VEGF协同作用， 促进肿瘤新生血管的生成[2]。文献报道， 在鼻咽癌中VEGF高表达， 鼻咽癌的失控增殖能力与VEGF的高表达有密切关系。结合本实验结果， 在鼻咽癌组织中COX-2高表达， 表明COX-2与VEGF共同促进鼻咽癌新生血管的生成。

3. 2 COX-2促进肿瘤细胞的增殖 在肿瘤中COX-2高表达， 促进肿瘤合成大量PGs， 进而促进肿瘤细胞增殖[3]。结合本实验结果， COX-2在鼻咽癌组织中均高表达， 表明COX-2促进了鼻咽癌细胞的增殖。

3. 3 COX-2促进肿瘤的浸润和转移 研究表明， 在肿瘤组织中COX-2表达增高， 同时有基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9的表达升高， E-钙粘连素的表达降低， 共同促进了肿瘤细胞的浸润和转移。鼻咽癌是具有极高浸润和转移能力的肿瘤， 本实验结果显示， COX-2在鼻咽癌组织中均高表达， 表明COX-2促进了鼻咽癌细胞的浸润和转移。

综上所述， 鼻咽癌中COX-2表达升高， 说明了鼻咽癌细胞的增生、浸润及转移与COX-2的高表达有密切关系。因此， COX-2成为了研究和治疗肿瘤的重要靶分子之一， 在抗肿瘤的研究治疗中有重要的意义。

参考文献

[1] Fukazawa EM， Baiocchi G， Soares FA， et al. Cox-2， EGFR， and ERBB-2 Expression in Cervical Intraepithelial Neoplasia and Cervical Cancer Using an Automated Imaging System. Int J Gynecol Pathol， 2014， 33（3）：225-234.

[2] Nagoya H， Futagami S， Shimpuku M， et al. Apurinic/apyrimidinic endonuclease-1 is associated with angiogenesis and VEGF production via upregulation of COX-2 expression in esophageal cancer tissues. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol， 2014， 306（3）：183-190.

[3] Zhao H， Luo F， Li H， et al. Antinociceptive Effect of Tetrandrine on LPS-Induced Hyperalgesia via the Inhibition of IKKβ Phosphorylation and the COX-2/PGE2 Pathway in Mice. PLoS One， 2014， 9（4）：e94586.

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【摘要】 目的 研究环氧化酶-2在鼻咽癌中的表达， 探讨其与鼻咽癌的增生、浸润及转移的关系。方法 在26例鼻咽癌及相应癌旁组织和10例正常鼻咽部黏膜组织中， 应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测环氧化酶-2 mRNA的表达。结果 在鼻咽癌组织中环氧化酶-2 mRNA高表达， 在正常鼻咽部黏膜环氧化酶-2 mRNA中低表达， 差异具有统计学意义（P<0.01）。结论 环氧化酶-2与鼻咽癌的生长、浸润及转移有密切关系。

【关键词】 鼻咽癌；环氧化酶-2；逆转录-聚合酶链反应

环氧化酶-2（cyclooxygenase-2， COX-2）是前列腺素（PGs）合成过程中主要限速酶， 不仅在炎症等过程中发挥重要作用， 而且还与肿瘤的增生、浸润和转移密切相关[1]。鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma， NPC）是具有极高的浸润和转移能力的肿瘤本实验通过RT-PCR方法研究在鼻咽癌中COX-2的表达， 探讨COX-2在鼻咽癌的增生、浸润及转移中的作用。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 鼻咽癌及相应癌旁组织26例， 来源于本院鼻咽部活检标本， 其中有淋巴结转移病例19例、无淋巴结转移病例7例。癌旁组织取自肿瘤边缘5 mm以外区域， 10例正常鼻咽部黏膜组织取于鼻咽部正常的手术患者。病理学诊断均为鳞状细胞癌， 其中高分化3例、中分化4例、低分化19例。其中男19例， 女7例， 年龄最小27岁， 最大78岁， 平均年龄（48.026±5.517）岁， 术前均未经化疗或放疗。

1. 2 主要试剂与仪器 逆转录酶MLV（MBI）， TRIzol试剂（GibCO）， dNTP（MBI）， TaqDNA聚合酶（MBI）， GDS8000型凝胶成像系统（UVP）， PTC-200 PCR仪（MJA）， Grab-it 4.0分析软件为Gelworks 1D interdiate， DU650型紫外光分光光度仪（BECKMAN）。

1. 3 引物设计 泳道M：Marker；泳道1～2分别是COX-2 mRNA在无淋巴结转移的鼻咽癌组织和有淋巴结转移鼻咽癌组织中的PCR产物（236 bp）；泳道3～4分别是COX-2 mRNA在癌旁组织和正常鼻咽部黏膜中的PCR产物（236 bp）。

1. 4 组织RNA提取和cDNA合成 取约50 mg组织放入匀浆器中， 匀浆加入1 ml TRIzol， 用氯仿和异丙醇逐步提取RNA， 溶于焦碳酸二乙脂水中， 然后应用紫外分光光度仪检测定量。

1. 5 RT-PCR反应 以cDNA为模板， 扩增COX-2 （236 bp）及β-actin （300 bp）等基因片断。

PCR反应体系为25 μl， 含上述基因cDNA 2.0 μl， dNTP 的终浓度0.2 mmol/L， 10×Buffer 2.5 μl， Mg2+的终浓度2.0 mmol/L， TaqDNA聚合酶1 U， 上游和下游引物的终浓度各0.2 μmol/L。β-actin为内参照物。

PCR反应条件为95℃预变性5 min， 95℃ 1 min、50℃ 1 min、72℃ 1 min， 然后72℃延伸5 min。反应结束后取5 μl产物电泳， 用grab-It成像系统照像， 然后分析各条带的积分吸光密度值， 以目的基因与β-actin的相对积分吸光密度值记录结果。

1. 6 统计学方法 采用SPSS17.0统计学软件对数据进行统计学分析。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验。P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2. 2 在鼻咽癌癌旁组织和正常鼻咽部黏膜中COX-2 mRNA低表达， 见图1， 相对平均吸光度值分别为：（0.2069±0.0372）、（0.2183±0.0417）。二值差异无统计学意义（t=1.358， P>0.05）。

2. 3 在鼻咽癌组织中COX-2 mRNA的表达与在正常鼻咽部黏膜COX-2 mRNA的表达之间， 差异均具有统计学意义（P<0.01）。

3 讨论

鼻咽癌为我国最常见的恶性肿瘤之一， 是极易转移的肿瘤， 通常颈淋巴结转移常为患者最早发现的体征， 颈部肿块为此病首发者约占60%。COX-2在正常组织中不表达或微量表达， 而在病理情况下， COX-2在炎症、肿瘤等组织中表达增高， COX-2的高表达与多种肿瘤的发生发展关系密切[1]。本实验检测表明， COX-2在鼻咽癌组织中均高表达， 在癌旁组织和正常鼻咽部黏膜中低表达。本实验结果表明， 鼻咽癌的增长、浸润及转移与COX-2的高表达有密切的关系。

3. 1 COX-2促进肿瘤新生血管的形成血管内皮生长因子（VEGF）是促进肿瘤新生血管生成的作用最强的因子之一。在肿瘤中高表达的COX-2可促使VEGF生成增加， COX-2与VEGF协同作用， 促进肿瘤新生血管的生成[2]。文献报道， 在鼻咽癌中VEGF高表达， 鼻咽癌的失控增殖能力与VEGF的高表达有密切关系。结合本实验结果， 在鼻咽癌组织中COX-2高表达， 表明COX-2与VEGF共同促进鼻咽癌新生血管的生成。

3. 2 COX-2促进肿瘤细胞的增殖 在肿瘤中COX-2高表达， 促进肿瘤合成大量PGs， 进而促进肿瘤细胞增殖[3]。结合本实验结果， COX-2在鼻咽癌组织中均高表达， 表明COX-2促进了鼻咽癌细胞的增殖。

3. 3 COX-2促进肿瘤的浸润和转移 研究表明， 在肿瘤组织中COX-2表达增高， 同时有基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9的表达升高， E-钙粘连素的表达降低， 共同促进了肿瘤细胞的浸润和转移。鼻咽癌是具有极高浸润和转移能力的肿瘤， 本实验结果显示， COX-2在鼻咽癌组织中均高表达， 表明COX-2促进了鼻咽癌细胞的浸润和转移。

综上所述， 鼻咽癌中COX-2表达升高， 说明了鼻咽癌细胞的增生、浸润及转移与COX-2的高表达有密切关系。因此， COX-2成为了研究和治疗肿瘤的重要靶分子之一， 在抗肿瘤的研究治疗中有重要的意义。

参考文献

[1] Fukazawa EM， Baiocchi G， Soares FA， et al. Cox-2， EGFR， and ERBB-2 Expression in Cervical Intraepithelial Neoplasia and Cervical Cancer Using an Automated Imaging System. Int J Gynecol Pathol， 2014， 33（3）：225-234.

[2] Nagoya H， Futagami S， Shimpuku M， et al. Apurinic/apyrimidinic endonuclease-1 is associated with angiogenesis and VEGF production via upregulation of COX-2 expression in esophageal cancer tissues. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol， 2014， 306（3）：183-190.

[3] Zhao H， Luo F， Li H， et al. Antinociceptive Effect of Tetrandrine on LPS-Induced Hyperalgesia via the Inhibition of IKKβ Phosphorylation and the COX-2/PGE2 Pathway in Mice. PLoS One， 2014， 9（4）：e94586.

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