不同真菌菌株对蛴螬的毒力测定

章骏

摘要：选择几种真菌的不同菌株及其混合物对蛴螬进行毒力测定。结果表明，绿僵菌Ma1较其它菌株校正累积死亡率最高，致死速度最快，平均累计校正死亡率达62.50%，LT50为10.31d，在花生蛴螬的防治上具有较大的应用价值。

关键词：绿僵菌；蛴螬；防治；毒力测定

中图分类号S476.1文献标识码A文章编号1007-7731（2014）13-29-02

蛴螬（Anmala cuprea）是鞘翅目金龟甲幼虫的总称，是我国地下害虫分布最广、为害最重的一类害虫，主要为害花生、大豆、麦类、高粱、玉米、甘蔗、棉花等多种大田作物，以及一些中药材等，其中以为害花生较为严重，严重时造成作物颗粒无收［1］。长期以来，主要依赖化学农药防治该害虫，易使其产生抗性，并且造成土壤中农药残留，导致作物产品农药含量超标，使花生有异味，影响到出口创汇及人体健康。为此，笔者选用几种真菌的不同菌株及其混合物，分别对蛴螬进行毒力测定，以期筛选出对蛴螬具有高毒力的菌株。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 供试虫源 蛴螬幼虫是5月上旬从安徽省庐江县采集的越冬幼虫，室内饲养数天，挑选大小均匀且健康的个体备用。

1.1.2 供试菌种 菌种为安徽农业大学植保学院生防研究室储存菌种，编号分别为Ma1、Bbr84、Ma2、Ma3、Ma4。

1.2 试验方法

1.2.1 菌剂的制备 培养采用萨氏葡萄糖酵母浸膏培养基（SDAY）、蛋白胨马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PPDA）和察氏琼脂培养基培养（Czapek），置于光照培养箱内26℃下恒温培养15d后，放入冰箱低温（4℃）保存备用。用无菌的塑料药匙将真菌的分生孢子粉刮到一个干净的盛有10mL0.05%Tween-80润湿剂的三角瓶中，在涡旋振荡器上充分振荡（10min左右），然后按比例稀释，经血球计数板测定每mL孢子数，通过计算把各菌的孢子悬浮液浓度配成基本一致，即1.0×108孢子/mL，以测定致死中时（LT50），比较各菌种间的毒力［2］。

1.2.2 测定方法 用毛笔将蛴螬3龄幼虫挑起，在盛有孢子悬浮液的培养皿中浸蘸一下（约3～5s），而后迅速取出，置于洁净滤纸上，任其爬行，片刻后，移入洁净的小指型管（1cm×8cm）中单头饲养。为了避免相互残杀，每管放一小块人工饲料。养虫器皿事先在1%甲醛液中浸泡片刻，取出后凉干备用。不同处理用不同毛笔，避免不同菌株之间相互干扰，影响试验结果。以0.05%吐温水为对照，共设7个处理，重复3次，每处理试虫数30头。试验每天定时观察一次直至化蛹，每次记下死虫数，并及时将虫尸移出。虫尸在26℃保湿培养（相对湿度大于90%）观察是否有僵虫出现，统计僵虫率。

1.2.3 数据处理 计算公式如下：每mL孢子总量=平均每小格孢子数×4×106×稀释倍数；累积死亡率（%）=（处理的总死虫数×100）/处理的总虫数；累积校正死亡率（%）=（处理组累积死亡率-对照组累积死亡率）/（1-对照组累积死亡率）；僵虫率（%）=僵虫数×100/总死亡虫数。

以LT50、校正死亡率及僵虫率作为分析毒力的指标，将观察时间分为间隔相等的时间区段，分别统计整理每个时间区段内的累积死亡率，并校正，以时间（d）的对数值为X，死亡率的机率值为Y，采用机率值分析法（Doberski，J.W.1981）算出毒力回归方程和致死中时（LT50）。

2 结果与分析

2.1 不同真菌菌株对蛴螬的致病效果 由表1可知，几种真菌的不同菌株及其混合物对蛴螬均有不同程度的致病性，但致死率表现出明显差异。Ma1、Bbr84、Bb84r+Ma4、Ma3、Ma2及Bbr84+Ma3校正累积死亡率分别为62.50%、50.00%、43.75%、43.75%、37.50%和24.98%，致死中时LT50分别为10.31d、15.06d、15.30d、15.65d、15.40d和27.56d。其中绿僵菌Ma1校正累积死亡率最高，达到了62.50%，而其它处理都≤50.00%，差异极显著；同时绿僵菌Ma1致死中时LT50最小，为10.31d，而其它处理都＞15d，由此可见绿僵菌Ma1的致病力最强。 表1 不同真菌对蛴螬3龄幼虫的致病效果及僵虫率

[处理&累积死亡率（%）&校正累计

死亡率（%）&差异显著性&回归方程&相关系数

r& 致死中时

LT50（d）&僵虫率

（%）&0.05&0.01&Ma1&66.67&62.50&a&A&Y=7.912 35-2.874 40x&0.993 81&10.31&66.64&Bbr84&55.56&50.00&b&B&Y=8.167 74-2.689 32x&0.985 38&15.06&56.23&Bbr84+Ma4&50.00&43.75&c&BC&Y=8.078 05-2.591 80x&0.967 44&15.30&58.78&Ma3&50.00&43.75&c&BC&Y=7.737 21-2.291 35x&0.988 16&15.65&46.64&Ma2&44.44&37.50&d&C&Y=8.323 49-2.798 60x&0.927 23&15.40&52.12&Bbr84+Ma3&33.33&24.98&e&D&Y=7.538 93-1.762 76x&0.984 51&27.56&49.87&ck&11.11&&&&&&&&]

2.2 不同真菌的僵虫率 在浓度为1.0×108孢子/mL时，各处理死亡幼虫24h后均出现僵虫，Ma1、Bbr84、Bb84r+Ma4、Ma3、Ma2及Bbr84+Ma3僵虫率分别为66.64%、56.23%、58.78%、46.64%、52.12%和49.87%，其中Ma1僵虫率最高，达到66.64%，而其它处理的僵虫率均在60%以下（表1）。说明各供试真菌菌株都能侵染致死蛴螬3龄幼虫，而Ma1表现出对蛴螬明显的高毒力。

3 小结与讨论

化学农药的长期施用造成大面积土壤和农作物污染，并对人畜产生危害，而生物防治以其独特的优越性，在世界范围得以迅速应用［3-4］。为了探索蛴螬的无公害防治措施，开发利用昆虫病原真菌资源，本文选用几种真菌的不同菌株及其混合物对蛴螬进行毒力测定，筛选出对蛴螬高毒力绿僵菌Ma1菌株，其致死率和致死速度均明显高于其它处理，在花生蛴螬的防治上具有较大的应用价值。

本次筛选的菌株及其混合物的数量较少，建议扩大菌株筛选范围。同时毒力测定是在室内人为控制的条件下进行的，而田间防效则受到温湿度等各种环境因子的影响，因此要运用于实际生产中，仍需要进一步研究。

参考文献

［1］魏鸿钧，张子良.中国地下害虫［M］.上海：上海科技出版社，1989.

［2］浦蛰龙，李增智.昆虫真菌学［M］.合肥：安徽科技出版社，1996.

［3］张克勤.我国杀虫真菌的研究现状与展望［J］.植物保护，1996，22（1）：43-46.

［4］谢明杰，宋玉媛，曹文伟，等.微生物杀虫剂应用的研究进展［J］.辽宁师范大学学报，1998，21（4）：226-229.（责编：张宏民）

endprint

摘要：选择几种真菌的不同菌株及其混合物对蛴螬进行毒力测定。结果表明，绿僵菌Ma1较其它菌株校正累积死亡率最高，致死速度最快，平均累计校正死亡率达62.50%，LT50为10.31d，在花生蛴螬的防治上具有较大的应用价值。

关键词：绿僵菌；蛴螬；防治；毒力测定

中图分类号S476.1文献标识码A文章编号1007-7731（2014）13-29-02

蛴螬（Anmala cuprea）是鞘翅目金龟甲幼虫的总称，是我国地下害虫分布最广、为害最重的一类害虫，主要为害花生、大豆、麦类、高粱、玉米、甘蔗、棉花等多种大田作物，以及一些中药材等，其中以为害花生较为严重，严重时造成作物颗粒无收［1］。长期以来，主要依赖化学农药防治该害虫，易使其产生抗性，并且造成土壤中农药残留，导致作物产品农药含量超标，使花生有异味，影响到出口创汇及人体健康。为此，笔者选用几种真菌的不同菌株及其混合物，分别对蛴螬进行毒力测定，以期筛选出对蛴螬具有高毒力的菌株。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 供试虫源 蛴螬幼虫是5月上旬从安徽省庐江县采集的越冬幼虫，室内饲养数天，挑选大小均匀且健康的个体备用。

1.1.2 供试菌种 菌种为安徽农业大学植保学院生防研究室储存菌种，编号分别为Ma1、Bbr84、Ma2、Ma3、Ma4。

1.2 试验方法

1.2.1 菌剂的制备 培养采用萨氏葡萄糖酵母浸膏培养基（SDAY）、蛋白胨马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PPDA）和察氏琼脂培养基培养（Czapek），置于光照培养箱内26℃下恒温培养15d后，放入冰箱低温（4℃）保存备用。用无菌的塑料药匙将真菌的分生孢子粉刮到一个干净的盛有10mL0.05%Tween-80润湿剂的三角瓶中，在涡旋振荡器上充分振荡（10min左右），然后按比例稀释，经血球计数板测定每mL孢子数，通过计算把各菌的孢子悬浮液浓度配成基本一致，即1.0×108孢子/mL，以测定致死中时（LT50），比较各菌种间的毒力［2］。

1.2.2 测定方法 用毛笔将蛴螬3龄幼虫挑起，在盛有孢子悬浮液的培养皿中浸蘸一下（约3～5s），而后迅速取出，置于洁净滤纸上，任其爬行，片刻后，移入洁净的小指型管（1cm×8cm）中单头饲养。为了避免相互残杀，每管放一小块人工饲料。养虫器皿事先在1%甲醛液中浸泡片刻，取出后凉干备用。不同处理用不同毛笔，避免不同菌株之间相互干扰，影响试验结果。以0.05%吐温水为对照，共设7个处理，重复3次，每处理试虫数30头。试验每天定时观察一次直至化蛹，每次记下死虫数，并及时将虫尸移出。虫尸在26℃保湿培养（相对湿度大于90%）观察是否有僵虫出现，统计僵虫率。

1.2.3 数据处理 计算公式如下：每mL孢子总量=平均每小格孢子数×4×106×稀释倍数；累积死亡率（%）=（处理的总死虫数×100）/处理的总虫数；累积校正死亡率（%）=（处理组累积死亡率-对照组累积死亡率）/（1-对照组累积死亡率）；僵虫率（%）=僵虫数×100/总死亡虫数。

以LT50、校正死亡率及僵虫率作为分析毒力的指标，将观察时间分为间隔相等的时间区段，分别统计整理每个时间区段内的累积死亡率，并校正，以时间（d）的对数值为X，死亡率的机率值为Y，采用机率值分析法（Doberski，J.W.1981）算出毒力回归方程和致死中时（LT50）。

2 结果与分析

2.1 不同真菌菌株对蛴螬的致病效果 由表1可知，几种真菌的不同菌株及其混合物对蛴螬均有不同程度的致病性，但致死率表现出明显差异。Ma1、Bbr84、Bb84r+Ma4、Ma3、Ma2及Bbr84+Ma3校正累积死亡率分别为62.50%、50.00%、43.75%、43.75%、37.50%和24.98%，致死中时LT50分别为10.31d、15.06d、15.30d、15.65d、15.40d和27.56d。其中绿僵菌Ma1校正累积死亡率最高，达到了62.50%，而其它处理都≤50.00%，差异极显著；同时绿僵菌Ma1致死中时LT50最小，为10.31d，而其它处理都＞15d，由此可见绿僵菌Ma1的致病力最强。 表1 不同真菌对蛴螬3龄幼虫的致病效果及僵虫率

[处理&累积死亡率（%）&校正累计

死亡率（%）&差异显著性&回归方程&相关系数

r& 致死中时

LT50（d）&僵虫率

（%）&0.05&0.01&Ma1&66.67&62.50&a&A&Y=7.912 35-2.874 40x&0.993 81&10.31&66.64&Bbr84&55.56&50.00&b&B&Y=8.167 74-2.689 32x&0.985 38&15.06&56.23&Bbr84+Ma4&50.00&43.75&c&BC&Y=8.078 05-2.591 80x&0.967 44&15.30&58.78&Ma3&50.00&43.75&c&BC&Y=7.737 21-2.291 35x&0.988 16&15.65&46.64&Ma2&44.44&37.50&d&C&Y=8.323 49-2.798 60x&0.927 23&15.40&52.12&Bbr84+Ma3&33.33&24.98&e&D&Y=7.538 93-1.762 76x&0.984 51&27.56&49.87&ck&11.11&&&&&&&&]

2.2 不同真菌的僵虫率 在浓度为1.0×108孢子/mL时，各处理死亡幼虫24h后均出现僵虫，Ma1、Bbr84、Bb84r+Ma4、Ma3、Ma2及Bbr84+Ma3僵虫率分别为66.64%、56.23%、58.78%、46.64%、52.12%和49.87%，其中Ma1僵虫率最高，达到66.64%，而其它处理的僵虫率均在60%以下（表1）。说明各供试真菌菌株都能侵染致死蛴螬3龄幼虫，而Ma1表现出对蛴螬明显的高毒力。

3 小结与讨论

化学农药的长期施用造成大面积土壤和农作物污染，并对人畜产生危害，而生物防治以其独特的优越性，在世界范围得以迅速应用［3-4］。为了探索蛴螬的无公害防治措施，开发利用昆虫病原真菌资源，本文选用几种真菌的不同菌株及其混合物对蛴螬进行毒力测定，筛选出对蛴螬高毒力绿僵菌Ma1菌株，其致死率和致死速度均明显高于其它处理，在花生蛴螬的防治上具有较大的应用价值。

本次筛选的菌株及其混合物的数量较少，建议扩大菌株筛选范围。同时毒力测定是在室内人为控制的条件下进行的，而田间防效则受到温湿度等各种环境因子的影响，因此要运用于实际生产中，仍需要进一步研究。

参考文献

［1］魏鸿钧，张子良.中国地下害虫［M］.上海：上海科技出版社，1989.

［2］浦蛰龙，李增智.昆虫真菌学［M］.合肥：安徽科技出版社，1996.

［3］张克勤.我国杀虫真菌的研究现状与展望［J］.植物保护，1996，22（1）：43-46.

［4］谢明杰，宋玉媛，曹文伟，等.微生物杀虫剂应用的研究进展［J］.辽宁师范大学学报，1998，21（4）：226-229.（责编：张宏民）

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摘要：选择几种真菌的不同菌株及其混合物对蛴螬进行毒力测定。结果表明，绿僵菌Ma1较其它菌株校正累积死亡率最高，致死速度最快，平均累计校正死亡率达62.50%，LT50为10.31d，在花生蛴螬的防治上具有较大的应用价值。

关键词：绿僵菌；蛴螬；防治；毒力测定

中图分类号S476.1文献标识码A文章编号1007-7731（2014）13-29-02

蛴螬（Anmala cuprea）是鞘翅目金龟甲幼虫的总称，是我国地下害虫分布最广、为害最重的一类害虫，主要为害花生、大豆、麦类、高粱、玉米、甘蔗、棉花等多种大田作物，以及一些中药材等，其中以为害花生较为严重，严重时造成作物颗粒无收［1］。长期以来，主要依赖化学农药防治该害虫，易使其产生抗性，并且造成土壤中农药残留，导致作物产品农药含量超标，使花生有异味，影响到出口创汇及人体健康。为此，笔者选用几种真菌的不同菌株及其混合物，分别对蛴螬进行毒力测定，以期筛选出对蛴螬具有高毒力的菌株。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 供试虫源 蛴螬幼虫是5月上旬从安徽省庐江县采集的越冬幼虫，室内饲养数天，挑选大小均匀且健康的个体备用。

1.1.2 供试菌种 菌种为安徽农业大学植保学院生防研究室储存菌种，编号分别为Ma1、Bbr84、Ma2、Ma3、Ma4。

1.2 试验方法

1.2.1 菌剂的制备 培养采用萨氏葡萄糖酵母浸膏培养基（SDAY）、蛋白胨马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PPDA）和察氏琼脂培养基培养（Czapek），置于光照培养箱内26℃下恒温培养15d后，放入冰箱低温（4℃）保存备用。用无菌的塑料药匙将真菌的分生孢子粉刮到一个干净的盛有10mL0.05%Tween-80润湿剂的三角瓶中，在涡旋振荡器上充分振荡（10min左右），然后按比例稀释，经血球计数板测定每mL孢子数，通过计算把各菌的孢子悬浮液浓度配成基本一致，即1.0×108孢子/mL，以测定致死中时（LT50），比较各菌种间的毒力［2］。

1.2.2 测定方法 用毛笔将蛴螬3龄幼虫挑起，在盛有孢子悬浮液的培养皿中浸蘸一下（约3～5s），而后迅速取出，置于洁净滤纸上，任其爬行，片刻后，移入洁净的小指型管（1cm×8cm）中单头饲养。为了避免相互残杀，每管放一小块人工饲料。养虫器皿事先在1%甲醛液中浸泡片刻，取出后凉干备用。不同处理用不同毛笔，避免不同菌株之间相互干扰，影响试验结果。以0.05%吐温水为对照，共设7个处理，重复3次，每处理试虫数30头。试验每天定时观察一次直至化蛹，每次记下死虫数，并及时将虫尸移出。虫尸在26℃保湿培养（相对湿度大于90%）观察是否有僵虫出现，统计僵虫率。

1.2.3 数据处理 计算公式如下：每mL孢子总量=平均每小格孢子数×4×106×稀释倍数；累积死亡率（%）=（处理的总死虫数×100）/处理的总虫数；累积校正死亡率（%）=（处理组累积死亡率-对照组累积死亡率）/（1-对照组累积死亡率）；僵虫率（%）=僵虫数×100/总死亡虫数。

以LT50、校正死亡率及僵虫率作为分析毒力的指标，将观察时间分为间隔相等的时间区段，分别统计整理每个时间区段内的累积死亡率，并校正，以时间（d）的对数值为X，死亡率的机率值为Y，采用机率值分析法（Doberski，J.W.1981）算出毒力回归方程和致死中时（LT50）。

2 结果与分析

2.1 不同真菌菌株对蛴螬的致病效果 由表1可知，几种真菌的不同菌株及其混合物对蛴螬均有不同程度的致病性，但致死率表现出明显差异。Ma1、Bbr84、Bb84r+Ma4、Ma3、Ma2及Bbr84+Ma3校正累积死亡率分别为62.50%、50.00%、43.75%、43.75%、37.50%和24.98%，致死中时LT50分别为10.31d、15.06d、15.30d、15.65d、15.40d和27.56d。其中绿僵菌Ma1校正累积死亡率最高，达到了62.50%，而其它处理都≤50.00%，差异极显著；同时绿僵菌Ma1致死中时LT50最小，为10.31d，而其它处理都＞15d，由此可见绿僵菌Ma1的致病力最强。 表1 不同真菌对蛴螬3龄幼虫的致病效果及僵虫率

[处理&累积死亡率（%）&校正累计

死亡率（%）&差异显著性&回归方程&相关系数

r& 致死中时

LT50（d）&僵虫率

（%）&0.05&0.01&Ma1&66.67&62.50&a&A&Y=7.912 35-2.874 40x&0.993 81&10.31&66.64&Bbr84&55.56&50.00&b&B&Y=8.167 74-2.689 32x&0.985 38&15.06&56.23&Bbr84+Ma4&50.00&43.75&c&BC&Y=8.078 05-2.591 80x&0.967 44&15.30&58.78&Ma3&50.00&43.75&c&BC&Y=7.737 21-2.291 35x&0.988 16&15.65&46.64&Ma2&44.44&37.50&d&C&Y=8.323 49-2.798 60x&0.927 23&15.40&52.12&Bbr84+Ma3&33.33&24.98&e&D&Y=7.538 93-1.762 76x&0.984 51&27.56&49.87&ck&11.11&&&&&&&&]

2.2 不同真菌的僵虫率 在浓度为1.0×108孢子/mL时，各处理死亡幼虫24h后均出现僵虫，Ma1、Bbr84、Bb84r+Ma4、Ma3、Ma2及Bbr84+Ma3僵虫率分别为66.64%、56.23%、58.78%、46.64%、52.12%和49.87%，其中Ma1僵虫率最高，达到66.64%，而其它处理的僵虫率均在60%以下（表1）。说明各供试真菌菌株都能侵染致死蛴螬3龄幼虫，而Ma1表现出对蛴螬明显的高毒力。

3 小结与讨论

化学农药的长期施用造成大面积土壤和农作物污染，并对人畜产生危害，而生物防治以其独特的优越性，在世界范围得以迅速应用［3-4］。为了探索蛴螬的无公害防治措施，开发利用昆虫病原真菌资源，本文选用几种真菌的不同菌株及其混合物对蛴螬进行毒力测定，筛选出对蛴螬高毒力绿僵菌Ma1菌株，其致死率和致死速度均明显高于其它处理，在花生蛴螬的防治上具有较大的应用价值。

本次筛选的菌株及其混合物的数量较少，建议扩大菌株筛选范围。同时毒力测定是在室内人为控制的条件下进行的，而田间防效则受到温湿度等各种环境因子的影响，因此要运用于实际生产中，仍需要进一步研究。

参考文献

［1］魏鸿钧，张子良.中国地下害虫［M］.上海：上海科技出版社，1989.

［2］浦蛰龙，李增智.昆虫真菌学［M］.合肥：安徽科技出版社，1996.

［3］张克勤.我国杀虫真菌的研究现状与展望［J］.植物保护，1996，22（1）：43-46.

［4］谢明杰，宋玉媛，曹文伟，等.微生物杀虫剂应用的研究进展［J］.辽宁师范大学学报，1998，21（4）：226-229.（责编：张宏民）

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