miR-340在三阴性乳腺癌的表达和意义

傅少梅，殷初阳，宋晖

（复旦大学 附属妇产科医院 乳腺科，上海 200011）

miR-340在三阴性乳腺癌的表达和意义

傅少梅，殷初阳，宋晖△

（复旦大学 附属妇产科医院 乳腺科，上海 200011）

目的观察miR-340蛋白的表达在三阴乳腺癌（triple-negative breast cancer,TNBC）的发生，发展和转移中的作用。方法选择2006年1月～2012年12月在我院行乳腺癌根治的患者60例，根据免疫组织化学的雌激素受体（estrogen receptor, ER），孕激素受体（progesterone receptor, PR）和人表皮生长因子的受体（human epidermal growth factor receptor,HER-2）表达，分为三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)33例和非TNBC 27例，同时选择同期乳腺癌癌旁组织15例，运用免疫组化检测miR-340蛋白的表达。结果癌旁组织的miR-340阳性表达率为73.33%，TNBC为51.52%，而非TNBC为29.63%，三组表达差异有统计学意义（χ2=7.671，P＜0.05）。miR-340蛋白的表达在TNBC和非TNBC患者中与年龄，月经状态和肿瘤直径差异无统计学意义;而miR-340蛋白的表达与TNBC的临床分期和淋巴结是否转移具有明显的相关性(P＜0.05)。结论miR-340参与了TNBC的发生发展，可能成为TNBC治疗的目的基因之一。

乳腺癌;免疫组化;微小RNA

三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer，TNBC)是指雌激素受体（ER），孕激素受体（PR）和人表皮生长因子的受体（HER-2）均为阴性的乳腺癌，具有发病年龄早，恶性程度高，已发生复发和转移[1-2]。在治疗策略中并不能从乳腺癌内分泌和靶向治疗获益。微小RNA（miRNA）参与了肿瘤的发生发展，有研究表明miR-340参与了乳腺癌的发生发展[3]，本研究通过miR-340与TNBC的关系，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2006年1月～2012年12月在我院行乳腺癌根治的患者 60例，全部均为女性，平均年龄53.22±9.21（23～80）岁。术前均未行放疗或者化疗。所有病理标本进行了免疫组织化学检测，其中三阴乳腺癌33例和非三阴乳腺癌27例。其中三阴乳腺癌的年龄45.73±8.83（23～62）岁，肿瘤直径5.32±1.32（1.0～14.0）cm；月经情况：绝经前10例，绝经后23例；临床分期：Ⅰ期9例、Ⅱ期13例和Ⅲ期11例；伴随淋巴结转移10例，不伴淋巴结转移23例。非三阴乳腺癌的年龄62.37±9.21（37～80）岁，肿瘤直径5.37±2.13（1.0～13.0）cm；月经情况：绝经前7例，绝经后20例；临床分期：Ⅰ期6例、Ⅱ期12例和Ⅲ期9例；伴随淋巴结转移23例，不伴淋巴结转移4例。

1.2 方法

1.2.1 免疫组织化学检测 2组手术切除癌症标本60例和癌旁组织15例经4%的中性甲醛固定，性石蜡包埋，连续切片，其厚度约4µm。免疫组化按照试剂盒的说明进行操作，主要包括组织切片进行脱蜡，水花，加热抗原进行修复，消除内源性过氧化氢，用山羊血清封闭抗原，依次滴入miR-340抗体（工作浓度1∶100），生物素化二抗及ABC复合物，DBA显色，苏木素复染后封片，用PBS代替一抗为阴性对照，用已知的阳性标本作为阳性对照。

1.2.2 阳性结果的判断 乳腺癌组织或者乳腺组织胞浆中出现明显的黄色或者棕黄色为阳性，其中阳性细胞数小于10%为阴性表达（-），大于等于10%为阳性表达（+）。分别有两位病理师进行独立镜检和评判。

1.3 统计学方法 采用SPSS 15.0软件。正态计量资料以“x±s”表示，独立2组变量的比较采用t检验，同组治疗其前后的比较采用配对t检验，检验水准α=0.05。计数资料用率表示，2组间率比较采用χ2检验。

2 结果

2.1 miR-340在乳腺癌组织中的表达特点 从表1可知，癌旁组织的阳性表达率为73.33%，三阴性乳腺癌为51.52%，而非三阴性乳腺癌为29.63%，3组表达差异有统计学意义（χ2=7.671，P＜0.05）。

2.2 miR-340在非三阴性乳腺癌和三阴性乳腺癌组织表达 miR-340蛋白的表达在非三阴性乳腺癌患者中与年龄，月经状态，肿瘤直径，临床分期和淋巴结状态差异无统计学意义；而miR-340蛋白的表达与三阴性乳腺癌的临床分期和淋巴结是否转移具有明显的相关性(P＜0.05)，与年龄，月经状态和肿瘤直径无明显相关性（见表2）。

表1 miR-340在乳腺癌组织中的表达Tab. 1 Expression of miR-340 in breast cancer

表2 miR-340在非三阴性乳腺癌和三阴性乳腺癌组织表达Tab. 2 Expression of miR-340 in TNBC and non- TNBC

3 讨论

在全世界每年有30万人口被诊断出为乳腺癌，其治疗主要有手术治疗，化疗，放疗，靶向治疗和激素治疗等，由于乳腺癌的病理类型多种，导致治疗方法的多样性，因此到现在为主没有统一治疗乳腺癌的金标准[4-5]。现在乳腺癌的主要分为管型A型（ER阳性和（或）PR阳性，HER-2阴性），管型B/C型（与A型不同的是HER-2阳性）和TNBC型（ER、PR和HER-2均为阴性）[6-7]。由于TNBC型在乳腺癌中仅为10%～17%，但由于其预后较其他类型更差，而乳腺癌的特殊治疗策略如激素和靶向治疗并无明显疗效，因此寻找TNBC类型的基因表达谱十分有必要，对于改善其诊断，治疗和预后均具有重要意义。

现已知miRNAs不仅在肿瘤的发生发展中具有重要作用，而且在生理活动和生长发育中具有重要作用[8]。在乳腺癌中，miR-335能够抑制乳腺癌细胞的侵袭和转移，而且其表达量与患者的生存期存正相关，与抑癌基因具有类似的作用[9]。另一个基因miR-10 b在转移性乳腺癌中高表达，并且促进乳腺癌细胞的侵袭和转移，而起到癌基因的作用[10-11]。本组研究表明miR-340在乳腺癌旁组织的表达量明显高于乳腺癌组织，而三阴乳腺癌中的表达明显高于非三阴乳腺癌组织，说明miR-340参与了乳腺癌的发生发展的过程。miR-340蛋白的表达在非三阴性乳腺癌患者中与年龄，月经状态，肿瘤直径，临床分期和淋巴结状态无明显关系；而miR-340蛋白的表达与三阴性乳腺癌的临床分期和淋巴结是否转移具有明显的相关性，与年龄，月经状态和肿瘤直径无明显相关性。说明miR-340蛋白的表达与三阴乳腺癌的发生发展，恶性程度和转移具有明显的相关性。与Baffa等[12]运用miRNA芯片检测肿瘤和转移瘤的表达，发现乳腺转移瘤中的miR-340表达较原发肿瘤下降具有类似之处，但本研究进一步证实了miR-340与三阴乳腺癌的发生、发展和转移具有明显的相关性。

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Expression of miR-340 in triple negative breast cancer and their signi fi cance

FU Shao-mei, YIN Chu-yang, SONG Hui△
(Department of Breast Surgery, Obstetrics and Gynecology Hospital, Fudan University, Shanghai 200011, China)

ObjectiveTo investigate the relationship among the expression of miR-340 protein, occurrence, development and metastasis in triplenegative breast cancer (TNBC)。Method60 patients with breast cancer, from January 2006 to December 2012, according to the immunohistochemistry expression of estrogen receptor (ER), progesterone receptor (PR) and human epidermal growth factor receptor (HER-2), were divided into TNBC (33 patients) and non- TNBC (27 patients), and the breast cancer tissues (15 patients) were also selected at the same period, and the expression of miR-340 protein were detected by the immunohistochemistry。ResultsThe positive expression of miR-340 protein was 73.33% in adjacent tissues of breast cancer, 51.52% in TNBC, 29.63% non-TNBC, the expression differences of each group were statistically signi fi cant(χ2=7.671,P＜0.05). The expression of miR-340 protein in TNBC and non- TNBC patients were no signi fi cant difference in age, menopausal status and tumor size; while there were obvious correlation among clinical stage, lymph node metastasis and protein expression of miR-340 in TNBC(P＜0.05)。ConclusionThe gene of miR-340 involves in the occurrence, development and metastasis of TNBC, they would be one of the purposes gene therapy in TNBC.

breast cancer; immunohistochemistry; miRNA

R 737.9

A

1005-1678(2014)01-0072-02

傅少梅，女，硕士，主治医师，研究方向：乳腺肿瘤方向的研究；宋晖，通信作者，E-mail：vipsonghui@139.com。