食管鳞癌组织β-catenin表达与淋巴管生成的关系

李秀娟 李明霞 刘军超 金春亭 范 婕 李玉珍

(河北北方学院病理教研室，河北 张家口 075000)

食管癌是死亡率较高的消化系统恶性肿瘤，淋巴道转移是食管癌患者预后不良和死亡率较高的重要原因。研究表明肿瘤淋巴管生成对肿瘤的淋巴道转移起至关重要的作用〔1～4〕，而且已有研究证实食管癌组织中存在着丰富的新生淋巴管〔5〕。β-catenin(β-连环蛋白)是Wnt信号通路的关键成员，它在肿瘤细胞质(核)的异位表达在肿瘤浸润、转移过程中发挥着重要作用，但其与淋巴管生成是否有关尚不清楚。Podoplanin即肾小球上皮细胞整合膜蛋白，是特异性淋巴管内皮标志物，鼠抗人D2-40单克隆抗体能够识别淋巴管内皮上的Podoplanin。本实验通过检测β-catenin和Podoplanin在食管鳞癌组织的表达，分析β-catenin和Podoplanin与食管癌淋巴管生成和淋巴结转移的关系，探讨寻找新型靶向治疗肿瘤的方法。

1 材料与方法

1.1标本来源 收集河北北方学院第一附属医院病理科2010年6月至2012年6月切除的食管癌存档标本蜡块68例。全部病例术前未经任何治疗，经手术后病理切片证实均为食管鳞状细胞癌。其中男45例，女23例，年龄37～82〔平均(60.25±7.32)〕岁，中位年龄56岁。高分化鳞癌11例，中分化鳞癌16例，低分化鳞癌41例；有淋巴结转移43例，无淋巴结转移25例；外膜浸润39例，无外膜浸润29例。并从中选取20例距肿瘤边缘>5 cm的正常食管组织作为对照。

1.2试剂 鼠抗人β-catenin单克隆抗体、鼠抗人D2-40单克隆抗体，免疫组化试剂盒和DAB显色系统均为福州迈新生物制品有限公司产品。

1.3方法 免疫组化SP二步法进行染色，石蜡包埋标本2 μm厚连续切片，常规脱蜡至水，经3%过氧化氢37℃ 5 min，β-catenin于柠檬酸缓冲液，Podoplanin于EDTA缓冲液加热抗原修复15 min，滴加一抗，37℃60 min，清洗后滴加二抗，37℃30 min，DAB显色，中性树胶封片。染色过程严格按试剂盒规定程序进行。同时用PBS代替一抗作染色的阴性对照，已知β-catenin、Podoplanin染色阳性的胃癌组织片做二者的阳性对照。β-catenin以细胞膜、胞质、胞核出现棕黄色为阳性信号，阳性信号集中在细胞膜的细胞>50%为膜表达；阳性信号集中在细胞质的细胞>50%为浆表达；阳性信号集中在细胞核的细胞>0为核定位。Podoplanin表达于毛细淋巴管内皮细胞胞质，毛细淋巴管管壁较薄且不规则，单层内皮细胞核大且向腔内突出，腔内无红细胞。Podoplanin表达阳性者淋巴管内皮细胞胞浆呈棕黄色，用淋巴管密度(LVD)表示。先在低倍(10×)视野下选取肿瘤或正常组织中淋巴管最丰富的区域，再在高倍(40×)视野下计数Podoplanin染色阳性的淋巴管数，每例读数3个视野，并求其平均值作为LVD。

1.4统计学处理 应用SPSS13.0软件进行χ2检验和t检验。

2 结 果

2.1食管鳞癌及正常食管组织中β-catenin的表达 在20例正常食管组织中β-catenin均表达于细胞膜。食管鳞癌组织中β-catenin表达于胞质，并可见部分细胞中的核定位，细胞膜上的表达量相应减少，和正常食管组织的表达相比，癌组织中β-catenin出现了细胞质和细胞核的异位表达(56/68，82.4%)。

2.2食管鳞癌及正常食管组织中Podoplanin的表达 68例食管癌组织中LVD为(5.71±2.00)，20例正常食管组织的LVD为(4.30±1.32)，食管鳞癌组织中的LVD明显高于正常组织(P=0.002，t=2.946)。

2.3食管鳞癌β-catenin的异位表达和LVD与临床病理指标的关系 细胞质和细胞核β-catenin的异位表达在淋巴结转移组(40/43，93.0%)明显高于无淋巴结转移组(16/25，64.0%)，差异有统计学意义(χ2=7.275，P=0.007)；在外膜浸润组(36/39，92.3%)明显高于无外膜浸润组(20/29，69.0%)(χ2=6.236，P=0.013)，而与年龄、性别、分化程度无关。LVD在淋巴结转移组和无淋巴结转移组分别为(6.74±1.75)和(3.93±0.83)，淋巴结转移组明显高于无淋巴结转移组(t=7.521，P=0.001)，而与年龄、性别、分化程度及外膜浸润无关。

2.4食管鳞癌β-catenin的异位表达与LVD的相关性 β-catenin异位表达的56例食管癌组织中LVD为(6.02±2.01)，β-catenin仅表达于细胞膜的12例食管癌组织中LVD为(4.25±1.19)，二者比较差异显著(t=2.926，P=0.008)。

3 讨 论

β-catenin是一种重要的细胞黏附分子和细胞骨架成分，其在维持正常上皮的极性和完整性中发挥重要作用。正常细胞中β-catenin主要表达于细胞膜，细胞质中少见表达。而在多种肿瘤组织中〔6～10〕，β-catenin出现了异位表达，即细胞质/细胞核的累积和细胞膜表达的减少。造成这种改变的原因主要是β-catenin基因突变，降解障碍，在细胞质内异常积聚后与Tcf-4(T细胞因子-4)结合，然后穿梭入细胞核内，激活下游靶基因，从而引起肿瘤细胞的增殖。新近研究发现β-catenin信号通路还可通过调控VEGF发挥对血管生成的作用〔11〕，但其与淋巴管生成的关系国内外罕见报道。

Podoplanin是一种新的淋巴管内皮标记物，主要表达于淋巴管内皮细胞，而不表达于血管内皮。用鼠抗人D2-40单克隆抗体特异性识别Podoplanin，对肿瘤组织中淋巴管计数即LVD，有利于研究肿瘤淋巴管生成的分子机制。肿瘤组织中Podoplanin高表达提示淋巴结转移和预后不良〔12〕。

本研究证实了食管鳞癌组织中存在β-catenin蛋白的异位表达，β-catenin可能参与了食管癌的淋巴管生成，促进了食管癌的淋巴道转移。这一结果为进一步解释肿瘤淋巴管生成机制和寻找新型抗肿瘤淋巴管生成治疗的方法提供了重要的理论依据。

4 参考文献

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