20(s)-原人参二醇、人参皂苷Rh2及人参皂苷Rg3抗肿瘤作用的对比

张 虹 付雯雯 徐华丽 于晓风 曲绍春 睢大筼

(吉林大学药学院药理教研室，吉林 长春 130021)

恶性肿瘤是一种严重危害人类健康甚至生命的疾病。研究发现人参皂苷Rg3能抑制肿瘤细胞的转移，诱导癌细胞凋亡，增强抗癌药物的药效，亦对免疫功能有调节作用，已开发成国家一类抗癌新药“参一胶囊”〔1～5〕。本文将Rg33位上的末端葡萄糖水解得到Rh2，再把Rh23位上的最后一个葡萄糖水解得到Ppd〔6〕，Ppd作为人参二醇组皂苷化学水解及人肠道菌代谢的终产物，可能比Rg3和Rh2具有更强的抗癌活性。本实验室发现，Rh2的体外抑瘤作用明显优于Rg3，由于Rg3口服在体内表现出良好的抗癌活性〔7〕，提示其可能通过体内代谢为Rh2发挥抗癌作用。因此，Rh2进一步转化成Ppd后抗癌活性是否会明显增强成为研究重点。本文通过三种小鼠体内移植性肿瘤模型，对Ppd、Rh2及Rg3的抗肿瘤作用进行对比研究。

1 材料和方法

1.1动物 昆明种小鼠，5～6周龄，体重18～22 g，雌雄各半(由长春高新医学实验动中心提供，合格证号：10-5113)；C57BL/6纯系小鼠，5～6周龄，体重18～22 g，雌雄各半(中国医学科学院实验动物繁育场提供，合格证号：SCXK11-00-0006)。

1.2实验药品和试剂 20(s)-原人参二醇Ppd及人参皂苷Rh2原料粉，(海南亚洲制药有限公司提供，批号 20120906)；参一胶囊(人参皂苷Rg3)吉林亚泰制药有限公司生产，批号 20120228；羧甲基纤维素钠，上海化学试剂公司提供，批号 20120606；注射用环磷酰胺(CTX，规格：200 mg/支) 上海华联制药有限公司提供，批号20120205。将Ppd、Rh2及Rg3在研钵内以1%羧甲基纤维素钠配成0.5%的母液，然后倍比稀释成不同浓度的混悬液。CTX以无菌生理盐水稀释，配成0.1%溶液，现用现配。小鼠肝癌H22、小鼠Lewis肺癌及小鼠黑色素瘤B16均由吉林省肿瘤研究所提供，经本实验室传代保存。

1.3荷瘤动物模型的建立〔8〕取腹腔内传代7 d的肝癌H22小鼠，脱臼处死，在无菌条件下抽取腹腔内瘤细胞，以生理盐水洗涤3次，1000 r/min离心5 min，弃上清液，用无菌生理盐水调整瘤细胞浓度为1×107/ml，接种于昆明种小鼠左侧腹股沟皮下，每只鼠接种0.2 ml；取传代Lewis肺癌和黑色素瘤B16肿瘤生长良好的小鼠，在无菌条件下剥离瘤组织块，在玻璃研磨器内研磨成肿瘤匀浆，按瘤重(g)：生理盐水(ml)=1∶2的比例制备瘤液，接种于C57BL/6小鼠左腹股沟皮下，每只小鼠接种0.2 ml。

1.4体内抑瘤试验 接种24 h后将小鼠随机分成11组，对照组给予0.5%羧甲基纤维素钠；阳性药组给予 CTX 30 mg/kg；治疗组分别给予Ppd、Rh2及Rg3(均为25、50、100 mg/kg)。阳性药组隔日腹腔注射给药，其余各组均每日灌胃给药1次，给药容积为20 ml/kg，连续10 d，每天记录体重，于停药后24 h颈椎脱臼处死荷瘤小鼠，剥离肿瘤组织，称重，按公式计算肿瘤抑制率(IR)：IR (%)=(1-实验组平均瘤重/对照平均瘤组)×100%。

2 结 果

2.1对小鼠肝癌H22的生长抑制作用 各药物组小鼠药后体重均明显增加，而阳性药CTX组小鼠体重稍有降低，且小鼠死亡率高。Ppd、Rh2、Rg3、CTX对肝癌H22的抑瘤率。见表1。

2.2对小鼠Lewis肺癌的生长抑制作用 各药物组小鼠药后体重均增加，而阳性药CTX组小鼠体重明显降低，且小鼠死亡率较高。Ppd、Rh2、Rg3、CTX对Lewis肺癌的抑瘤率。见表2。

2.3对小鼠黑色素瘤B16的生长抑制作用 各药物组小鼠药后体重均增加，而阳性药CTX组小鼠体重略有降低，且小鼠死亡率较高。Ppd、Rh2、Rg3、CTX对Lewis肺癌的抑瘤率。见表3。

表1 Ppd、Rh2及Rg3对H22肝癌荷瘤小鼠的肿瘤抑制作用±s，n=10)

表2 Ppd、Rh2及Rg3对Lewis肺癌荷瘤小鼠的肿瘤抑制作用±s，n=10)

表3 Ppd、Rh2及Rg3对黑色素瘤B16荷瘤小鼠的肿瘤抑制作用±s，n=10)

3 讨 论

从人参中提取分离出来的多个单体均具有抗肿瘤活性，针对抗肿瘤作用研究最多的为二醇组人参皂苷20(s)-人参皂苷Rg3和Rh2。以往研究表明，Rg3和Rh2对体内外肝癌、肺癌、黑色素瘤均有生长抑制作用〔9～11〕，且存在一定的量效关系，而Ppd是否具有比其代谢前体Rg3和Rh2更强的抗肿瘤活性成为我们研究的重点。本研究结果表明，Ppd、Rh2及Rg3在25、50、100 mg/kg剂量下，对肝癌H22、Lewis肺癌及黑色素瘤B16均有一定的抑瘤作用，以Ppd在50或100 mg/kg剂量下的抑瘤作用效果最明显，Rh2与Rg3的抑瘤作用不如Ppd。比较给药前后各组小鼠体重，阳性药环磷酰胺组可使小鼠药后体重明显降低，而Ppd、Rh2及Rg3在25、50、100 mg/kg剂量下未使小鼠药后体重降低，说明三种单体对小鼠无明显的毒副作用。

综上所述，Ppd对肝癌H22、Lewis肺癌及黑色素瘤B16均有明显的抑制作用，其作用效果优于Rh2与Rg3，可进一步开发为抗肿瘤新药。

4 参考文献

1李绪文.人参皂苷降解及其产物化学成分的研究〔D〕.长春：吉林大学硕士学位论文，2006.

2Xu TM，Cui MH，Xin Y，etal.Inhibitory effect of ginsenoside Rg3on ovarian cancer metastasis〔J〕.Chin Med J (Engl)，2008；121(15)：1394-7.

3Park HM，Kim SJ，Kim JS，etal.Reactive oxygen species mediated ginsenoside Rg3- and Rh2- induced apoptosis in hepatoma cells through mitochondrial signaling pathways〔J〕.Food Chem Toxicol，2012；50(8)：2736-41.

4吴东东，刘 琪.人参皂苷Rg3对环磷酰胺的增效作用〔J〕.医药导报，2010；29(7)：850-3.

5Wei X，Chen J，Su F，etal.Stereospecificity of ginsenoside Rg3in promotion of the immune response to ovalbumin in mice〔J〕.Int Immunol，2012；24(7)：465-71.

6李绪文，金永日，桂明玉，等.碱催化降解法制备抗癌活性化合物20(s)-原人参二醇〔J〕.高等学校化学学报，2006；27(3)：478-81.

7Yang LQ，Wang B，Gan H，etal.Enhanced oral bioavailability and anti-tumour effect of paclitaxel by 20(s)-ginsenoside Rg3in vivo〔J〕.Biopharmaceucb Drug Disposmon,2012;33(8):425.

8韩 锐.抗癌药物研究与实验技术〔M〕.北京：北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1997:295.

9张晓平，马大龙，陈新梅.人参皂苷Rg3抗肿瘤及其作用机制研究进展〔J〕.中国执业药师，2012；9(11)：52-6.

10程 慧，宋新波，张丽娟.人参皂苷Rg3与Rh2的研究进展〔J〕.药物评价研究，2010；33(4):307-11.

11Zhang C，Liu L，Yu Y，etal.Antitumor effects of ginsenoside Rg3on human hepatocellular carcinoma cells〔J〕.Mol Med Rep，2012；5(5):1295-8.