人参与北五味子配伍前后的抗氧化及促智作用

孙靖辉 李 贺 贾 皓 孙红霞 张成义 陈建光 王春梅

(北华大学药学院，吉林 吉林 132013)

人参是五加科植物人参的根茎，是我国传统的中药材，有“百草之王”的美誉，具有广泛的药理学作用，主要活性成分是人参皂苷〔1〕。北五味子系木兰科植物五味子的成熟果实，其活性成分主要包括挥发油、多糖和木脂素等〔2〕。现代药理学研究表明人参和北五味子均具有提高免疫力、抗氧化、抗衰老等作用〔3～5〕，且二者为常用的传统中药配伍〔6〕。本实验通过观察人参水提液、北五味子水提液和北五味子人参共煎剂对D-半乳糖衰老模型小鼠脑内超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和胆碱酯酶(AchE)的影响及Morris水迷宫和避暗实验中行为学的作用，探讨并比较了北五味子和人参配伍前后的抗氧化与促智作用。

1 材料与器材

1.1动物 昆明小鼠，体重(20±2)g，雌雄各半，长春高新医学动物实验研究中心提供，合格证：SCXK(吉)2012-2013。

1.2药物与试剂 人参(4年参)购自吉林抚松；北五味子购自吉林长春； D-半乳糖由北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司提供；SOD、MDA和AchE试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。

1.3实验仪器 Morris水迷宫(MT-200)、小鼠避暗仪(BA-200)由成都泰盟科技有限公司制造；酶标仪(Multiskan FC)由赛默飞世尔公司制造。

1.4方法

1.4.1药物的制备 人参水提液的制备：人参粉碎后过六号筛，水浸泡0.5 h，100℃水煎2 h，4 000 r/min离心取上清液，再次加水100℃水煎2 h，离心取上清液，合并两次上清液，定容为30 mg生药/ml的人参水溶液。

北五味子水提液的制备：北五味子粉碎后过五号筛，水浸泡0.5 h，提取方法同上。

人参与北五味子共煎剂的制备：人参粉碎后过六号筛，北五味子粉碎后过五号筛，二者干粉1∶1合并后水浸泡0.5 h，提取方法同上。

1.4.2Morris水迷宫试验 昆明种小鼠经水迷宫检测去掉先天愚型和超聪明型等不符合条件的小鼠，将筛选出的符合实验要求的60 只小鼠进行称重排序，采用随机数字表法将其平均分为5组，即空白组、模型组、人参组、北五味子组和人参+北五味子(G+S)组，自由饮食饮水。

模型制造：将D-半乳糖用生理盐水配制成15 mg/ml的注射液，给予模型组、人参组、北五味子组和G+S组颈背部皮下注射，1次/d，给药剂量为1.5 mg/10 g；空白组同法给予等剂量生理盐水。以上给药周期均为6 w。

从第7周开始，进行口服灌胃给药，人参组给予人参水提液，北五味子组给予北五味子水提液，G+S组给予人参北五味子共煎剂，灌胃剂量为7 mg/10 g，1次/d；空白组和模型组均给予同等剂量的蒸馏水灌胃，连续给药15 d。给药结束后，进行时间为90 s的定位航行试验和空间探索试验。试验结束后，小鼠断头处死，取脑后冰浴匀浆、离心，取上清液进行MDA含量、SOD和AchE活性测定。

1.4.3避暗试验 昆明种小鼠经避暗检测去掉先天愚型和超聪明型等不符合条件的小鼠，将筛选出的符合实验要求的60 只小鼠进行称重排序，分组、造模和给药方法同上。末次给药后进行避暗测试，记录小鼠学习阶段的错误次数，第2天进行记忆能力试验，测试记忆阶段的避暗潜伏期和错误次数。

2 结 果

2.1Morris 水迷宫 与模型组相比较，人参组、北五味子组和G+S组均能够明显缩短D-半乳糖衰老模型小鼠在Morris水迷宫定位航行试验中的潜伏期和搜索路程；空间探索试验结果也表明人参组、北五味子组和G+S组的穿越平台次数和跨越目标象限时间占总游泳时间百分比较模型组有显著的提升。在人参组、北五味子组和G+S组的三者组间比较结果来看，G+S组在定位航行试验中的潜伏期和搜索路程要明显的优于人参组和北五味子组，而空间探索实验则三组间无明显差别。见表1。

2.2避暗试验 人参组、北五味子组和G+S组在学习阶段的错误次数要明显少于模型组，而且记忆测试阶段的潜伏期和错误次数也要明显的优于模型组。人参组、北五味子组和G+S组的三组组间比较结果显示，G+S组在学习阶段的成绩明显优于人参组和北五味子组，而记忆测试阶段的成绩三组间的比较结果并无统计学意义。见表2。

2.3脑内MDA含量、SOD和AchE活性 人参组、北五味子组和G+S组动物脑内SOD活性均明显高于模型组，而MDA含量与AchE活性明显低于模型组。人参组、北五味子组和G+S组的三组组间比较结果显示，G+S组动物脑内SOD活性要高于人参组和北五味子组，而MDA含量要低于人参组和北五味子组，三组间AchE活性并无明显差异，但G+S组较人参组和北五味子组有明显的降低趋势。见表3。

表1 各组对衰老模型小鼠Morris水迷宫中的实验结果±s,n=12)

表2 各组对衰老模型小鼠避暗实验学习和记忆能力的影响±s,n=12)

表3 各组对衰老模型小鼠脑内MDA含量、SOD和AchE活性的影响±s,n=12)

3 讨 论

在中药复方的研究中，人参与北五味子是常见的传统配伍。有研究表明，当北五味子与人参配伍水煎后，北五味子中的酸性成分会使溶液的pH值下降而导致人参皂苷的糖链断裂和转化，人参皂苷可由分子量较大的皂苷转化为分子量较小的次级皂苷或生物活性更强的稀有皂苷〔6〕。而根据人参皂苷的“前药”理论和相关报道，这种次生皂苷无论是在体内的吸收还是药理活性的表现均要优于其皂苷前体〔7〕。在黄鑫等〔8〕的研究中，将北五味子与人参按不同比例进行配伍水煎，发现与单煎剂相比，北五味子中的主要有效成分五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素含量均有不同程度的增加。

D-半乳糖致衰老方法是目前最为常用的亚急性衰老动物模型，注射后所导致的糖代谢紊乱可引起全身各组织器官的功能衰退，其中学习记忆能力下降、SOD活性降低和MDA含量升高等与衰老动物的表现相一致〔9～11〕。本实验的研究结果表明，与人参、北五味子的单煎水提液相比，人参北五味子共煎剂具有更加明显的提高衰老模型动物抗脂质过氧化和清除氧自由基的作用，同时AchE的活性测定结果显示出人参北五味子共煎剂能显著抑制脑内AchE的活性，提高乙酰胆碱的作用，而增加老年动物的学习记忆能力，Morris水迷宫和避暗实验也分别从不同角度证实了这一作用，值得注意的是，从行为学的实验结果来看，人参北五味子共煎剂所产生出的促智作用主要体现在短期学习能力的提高，而对记忆能力的改善作用与人参和北五味子的单煎剂无明显差别，这一现象也需要进一步的实验进行探讨。

4 参考文献

1Attele AS, Wu JA, Yuan CS.Ginseng pharmacology: multiple constituents and multiple actions 〔J〕.Biochem Pharmacol, 1999;58(11):1685-93.

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3肖 飞,罗焕敏,李晓光,等.五味子乙素对M146L细胞分泌β淀粉样蛋白的影响〔J〕.中国新药杂志, 2005;14(3):290-2.

4姚丽华,李楚华,古兴仰,等.五味子对去卵巢小鼠的记忆保持和海马NOS神经元表达的影响〔J〕.中国新药杂志，2007;16(11):853-6.

5Xue JF, Liu ZJ, Hu JF,etal.Ginsenoside Rb1 promotes neurotransmitter release by modulating phosphorylation of synapsins through a cAMP-dependent protein kinase pathway〔J〕.Brain Res,2006;1106(1): 91-8.

6张宪臣,张 旭,陈 光,等.高效液相色谱-电喷雾质谱联用分析红参与五味子配伍机制〔J〕.中草药, 2007;38(1): 41-3.

7Paek IB, Moon Y, Kim J,etal.Pharmacokinetics of a ginseng saponin metabolite compound Kin ras〔J〕.Biopharm Drug Dispos, 2006;27(1):39-45.

8黄 鑫.五味子、黄芪化学成分及抗氧化活性的质谱研究〔D〕.长春：中国科学院长春应用化学研究所博士论文,2009.

9Cui X, Zuo P, Zhang Q,etal.Chronic systemic D-galactose exposure induces memory loss, neurodegeneration, and oxidative damage in mice: Protective effects of R-α-lipoic acid 〔J〕.J Neurosci Res, 2006; 83(8): 1584-90.

10Zhang D, Liu G, Shi J,etal.Coeloglossum viride var.bracteatum extract attenuates D-galactose and NaNO2induced memory impairment in mice 〔J〕.J Ethnopharmacol，2006;104(1):250-6.

11Wei H, Li L, Song Q,etal.Behavioural study of the D-galactose induced aging model in C57BL/6J mice 〔J〕.Behav Brain Res,2005;157(2): 245-51.