慢性阻塞性肺病继发骨质疏松患者血栓前状态

廖 军 周瑜博 刘振峰

(新疆维吾尔自治区中医医院，新疆 乌鲁木齐 830000)

慢性阻塞性肺疾病(COPD)以及在此基础上继发的骨质疏松(OP)的发病过程因其涉及复杂的内外因素，阶段呈多态性，加之环境和遗传因素相互交叉作用，需从不同的角度揭示其发病机制〔1～4〕。本研究旨在探讨COPD患者与COPD继发OP的患者与血栓前状态分子标志物的表达是否存在异常。

1 资料与方法

1.1临床资料 选择就诊于新疆医科大学附属中医医院呼吸科门诊及病房就诊的60例男性患者，其中单纯COPD组30例，COPD继发OP组30例。年龄50～80岁，病程5～20年。

1.2诊断标准

1.2.1COPD 西医诊断、分期及分级标准参照COPD诊治指南制定的诊断及分级标准。稳定期：指患者咳嗽、咳痰、气短等症状稳定或症状轻微〔5〕。

1.2.2OP 参照《中国人骨质疏松建议诊断标准》，以DXA测量L2～L4椎体侧位骨密度(BMD)，BMD>M-1SD定义为正常；BMD在M-1SD～M-2SD定义为骨量减少；BMDM-12%为正常；M-13%～24%为骨量减少；

1.3纳入与排除标准

1.3.1纳入标准 ①符合COPD诊断，通过BMD检查，符合OP诊断标准；②50～80岁的男性患者，病史≥5年；③在新疆本地长期居住；④均无应用维生素 D、钙剂用药史；⑤签署知情同意书。

1.3.2排除标准 ①不符合COPD和 OP 的诊断标准；②其他相关可致继发性OP，如类风湿关节炎患者；患骨肿瘤或 Paget病(畸形性骨炎)；③有精神类疾病的患者；④未签订知情同意书的患者。

1.4主要设备和试剂 Epics-XL型流式细胞仪；GC-2016γ放射免疫计数器；Sunrise Remote酶标仪。免疫荧光单克隆抗体 CD41-PE、CD62P-异硫氰酸荧光素(FITC)；兔抗-ET 抗血清(蓝色)、125I-ET(红色)；乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝剂，驴抗兔免疫分离剂；ET 标准品(S1-S5)、ET 缓冲液。

1.5血栓前状态相关分子标志测定 ①血小板膜糖蛋白(CD41、CD62P)的检测：本次检测采用流式细胞术，空腹状态下采取全血5 μl，加入EDTA抗凝试管中，然后加70 μl稀释液，加入5 μl剂量的CD41-PE和8 μl剂量的CD62P-FITC荧光染料染色，将其混匀后置于无光条件下孵育半小时，然后用磷酸盐缓冲液(PBS)调整血小板浓度，使其浓度至1×106/ml为准。选择氩离子激光进行激发，以前向角散射对侧向散射设门，将血小板群圈出，获得20 000个血小板黄光信号后，用PMT2、PMT3收集，然后将其转化成直方图，用软件处理，计算阳性血小板百分比。②组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)和组织型纤溶酶原激活剂抑制剂(PAI-1)的检测：采取2 ml静脉血置于试管中，放于离心机中4℃ 3 000 r/min将血样离心10 min，将上清液取出待测。将待测血浆加入包被抗人tPA和PAI抗体的反应条内，37℃条件下孵育150 min，洗涤后，每孔加100 μl OPD底物稀释液，37℃条件下孵育使其显色，然后加50 μl终止液终止反应，在酶标仪492 nm处测定OPD值。③内皮素(ET)检测方法：各管血样2 ml，置于抗凝试管中，放于离心机中4℃ 3 000 r/min将血样离心10 min，将上清液取出，保存待测。将100 μl 125I-ET(红色)和100 μl兔抗-ET抗血清(蓝色)加入待测血浆中，4℃～8℃温育24 h。然后加入500 μl驴抗兔免疫分离剂，混匀，室温条件下放置15 min。再者将其4℃ 3 500 r/min离心15 min，吸弃上清液。上机检测，应用处理软件得出各沉淀管的放射性计数。④凝血指标的检测：包括凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原(Fib)。采取静脉血置于抗凝试管中，3 000 r/min离心15 min，应用AMAX-200型全自动血凝分析仪检测，采用CLAUSS比浊法。使用仪器将血浆作1∶10稀释，并取200 μl稀释血浆，37℃预温30 min，最后加入100 μl凝血酶溶液，对各项凝血指标进行检测。

2 结 果

2.1两组患者血小板功能指标的检测 COPD继发OP与单纯COPD患者CD41指标检测结果分别为(72.58±2.13)%和(75.24±2.07)%；CD62P检测结果分别为(3.39±2.17)%和(3.21±2.12)%，虽然二者之间均无统计学差异，但是其检测值均高于正常人群。t-PA〔(17.89±3.24),(17.58±3.72)μg/L〕和PAI-1〔(55.38±13.36),(52.24±12.59)μg/L〕的检测结果显示在两组患者中无差异。两组ET的检测结果分别为(123.76±41.22)ng/L和(104.68±41.94)ng/L，两组之间有统计学差异(P<0.05)。

2.2两组凝血四项指标的检测 两组患者之间无统计学差异。见表1。

表1 COPD继发OP与单纯COPD患者凝血四项指标的检测±s,n=30)

3 讨 论

有循证医学证据显示，多种疾病发生后，患者的血栓前状态各项指标出现异常，主要表现为血小板活性增强、聚集性增加、内皮细胞受损、凝血和纤溶系统失去平衡。国内外多项研究显示，血栓前状态可能是多种疾病发生、发展的共同病理机制之一。血栓前状态若不能及时纠正可能会促进血栓形成，该状态在临床疾病中普遍存在，并在病情进展过程中起到至关重要的作用〔7，8〕。

故在疾病治疗上除了给予必要的常规治疗外，还应该加强对修复与重建机体血栓有关系统的平衡态，包括凝血因子、纤溶功能、血小板、内皮细胞功能等标志物的检测，本研究结果显示两组ET水平有统计学差异，可能与单纯COPD患者外周血中降钙素含量高于COPD继发OP的患者，而降钙素含量的增高对ET发挥了一定的抑制作用，从而致使ET的含量在两组患者之间出现差异性。

笔者认为寒燥环境持续存在，并侵袭人体后容易引起免疫功能紊乱、下丘脑-垂体-肾上腺轴功能紊乱，导致淤血产生。淤血不能正常濡养骨骼，而且阻滞体内会影响气血的正常运行，以致新血化生缓慢，影响骨组织的正常功能活动。淤血长期存在容易影响骨组织细胞微环境，营养交换出现障碍，最终导致骨髓失养，临床上终致OP，全身或腰部酸痛是其主要临床表现〔4〕。因此，认为寒燥环境能增加COPD继发OP的风险。随着研究不断深入，现代医学认为COPD不仅仅是单纯意义上的气道阻塞性疾病，而且还是一种肺组织血管性疾病，若处理不当更有可能影响全身功能〔3〕。凝血功能平衡状态的打破可能是COPD全身性的病理改变之一，与继发性OP有密不可分的关系。

4 参考文献

1张文龙.慢性阻塞性肺病和骨质疏松相关性研究进展〔J〕.临床肺科杂志，2005；10(5)：638.

2Lehouck A，van Remoortel H，Troosters T，etal.COPD and bone metabolism：a clinical update〔J〕.Rev Mal Respir，2010；27(10)：1231-42.

3高 振，阿地力江，哈木拉提·吾甫尔.西北寒燥证证候模型免疫功能紊乱的研究〔J〕.中华中医药杂志，2010;25(8)：1225-8.

4刘振峰，艾力江·阿斯拉，高 振，等.新疆慢性阻塞性肺疾病继发骨质疏松症中医证候研究〔J〕.中国中医药信息杂志，2012；19(11)：13-5.

5中华医学会呼吸病学分会慢性阻塞性肺疾病学组.慢性阻塞性肺疾病诊治指南(2007年修订版)〔J〕.中华结核和呼吸杂志，2007；30(1)：8-17.

6中国老年学会骨质疏松委员会骨质疏松诊断标准学科组.中国人骨质疏松症建议诊断标准(第二稿)〔J〕.中国骨质疏松杂志，2000；6(1)：1-3.

7陈 芳，王 丽，朱中玉，等.内皮素1及其受体在心血管疾病中作用的研究进展〔J〕.中国全科医学，2013；16(26)：3149-51.

8姜 艳，沙吉达·阿不都热依木，热娜古丽·艾则孜，等.不同复杂性疾病的血栓前状态研究〔J〕.新疆医科大学学报，2013；36(6)：822-4.