关节腔内注射三氧化二砷对胶原诱导性关节炎大鼠体重及X线评分的影响

2014-09-12李鸿江董玉意李拾林吕国荣蔡思清颜建湘

中国老年学杂志 2014年3期

李鸿江董玉意李拾林吕国荣蔡思清刘红颜建湘

(福建医科大学第二临床学院影像科,福建泉州 362000)

类风湿关节炎(RA)是一种慢性、炎性、系统性的自身免疫性疾病，以损害滑膜、软骨和骨为特征。目前RA的治疗方式主要是关节腔注射治疗，药物包括非甾体类抗炎药(NSAIDs)、慢性抗风湿药(DMARDs)、抗代谢药物、糖皮质激素类药物及新型生物制剂〔1～3〕，但疗效不显著，且常伴有胃肠道及血液系统等副作用。三氧化二砷(ATO)俗称砒霜，能够使畸形蛋白质产生自我消灭的能力〔4，5〕，目前将其应用于RA的报道较少。本研究选择大鼠胶原诱导性关节炎(CIA)模型，对其关节腔内注射ATO，记录其对CIA大鼠体质量及X线评分的影响。

1 材料与方法

1.1研究对象 Wistar大鼠，清洁级，雌雄均有，6～8周龄，体质量(200±20)g，由本院动物实验中心提供，动物使用许可证号:SCXK(闽)2011-012。

1.2主要试剂 Ⅱ型胶原(Sigma公司)、弗氏不完全佐剂(IFA)(Sigma公司);ATO(北京双鹭药业股份有限公司，10 mg，国药准字H20080665);磷酸盐缓冲液(PBS，北京生物制品研究所，1 ml，国药准字S10850002)。

1.3主要仪器彩超仪(美国GE公司，VOLUSON730型);Digital Diagnose X线摄片机(美国BENNETT公司，MF-150G型); 动物体重计(日本新光電子株式会社，ASN-DH-R12KU型)。

1.4分组选择体质量无差异的动物，将其随机分为正常对照组(n=9)、对照组(n=12)和治疗组(n=15)。正常对照组常规饲养，对照组和治疗组制备CIA大鼠模型。

1.5制备模型 Ⅱ型胶原10 mg (2 mg/ml) 溶解于0.05 mol/L 冰醋酸中， 4℃保存24 h后与等量IFA混合，冰浴(-4℃)下充分乳化得乳化液(1 mg/ml)。初次免疫：每只动物尾根、背部皮下多点注射配制的乳化液0.3 ml(含胶原0.3 mg)，15 d后给予免疫加强，采用腹腔注射的方法给予配制的乳化液0.2 ml(含胶原0.2 mg )，建立CIA大鼠模型。3 w后以大鼠陆续出现踝关节红肿为模型成功。

1.6方法正常对照组给予踝关节腔内注射10% ATO溶液0.1 ml，对照组给予踝关节腔内注射PBS溶液0.1 ml，治疗组给予踝关节腔内注射10% ATO溶液0.1 ml，每3天 1次，共4次，末次注射3 d后取材。

1.7观察指标记录造模前、注射药物前后大鼠体质量的变化情况；注射药物后的关节X线表现及治疗前后关节评分(SharpRA评分标准)：(1)侵蚀:无骨侵蚀计0分;广泛骨侵蚀和丢失计5分;介于两者之间计2～4分。(2)关节腔变窄:无狭窄计0分;局部狭窄计1分；弥漫狭窄但面积<50%计2分；弥漫狭窄、面积>50%计3分；强直计4分。X线评分为两项之和。

2 结果

2.1各组治疗前后动物造模情况及体质量变化对照组、治疗组大鼠初次免疫3 d时，注射部位有小溃疡，20 d足部及踝关节肿胀，足垫增厚，表皮充血，皮肤变薄，部分呈急性炎症，活动有障碍，摄食、饮水有减少趋势，提示造模成功。组间比较，造模前三组体质量差异无统计学意义(P>0.05)；治疗前对照组、治疗组相对于造模前体质量升高(P<0.05)，对照组、治疗组之间体质量差异无统计学意义(P>0.05)；治疗前后比较，正常对照组、对照组体质量差异无统计学意义(P>0.05)，治疗组体质量降低(P<0.05)；治疗后，三组之间体质量差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 动物体质量的变化情况

2.2各组注射药物后动物关节X线表现正常对照组大鼠X线片无异常。对照组大鼠踝关节发现明显的软组织肿胀影及膨胀性破坏，部分关节间隙变窄、变小、模糊、不易分辨。治疗组软组织肿胀较对照组大鼠程度轻，关节间隙虽然存在模糊，但并不明显。见图1。

图1 各组动物注射药物后关节X线表现

2.3各组治疗前后关节X线评分治疗前，与正常对照组比较，对照组、治疗组X线评分更高(P<0.05)，对照组、治疗组之间X线评分差异无统计学意义(P>0.05)；组内治疗前后比较，正常对照组、对照组X线评分差异无统计学意义(P>0.05)，治疗组X线评分降低(P<0.05)；治疗后，三组之间X线评分差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。