冠心病猝死患者心肌组织纤维连接蛋白及内皮素的表达

邓建平 刘海燕 杨 刚 周振宇 赵景宏

(川北医学院第二临床医学院 南充市中心医院心内科，四川 南充 637000)

当冠脉血流供应不能满足心肌的需求即可导致心肌缺血缺氧，心肌缺血可由冠脉血流量的减少和心肌对氧的需求增加而引起〔1〕。冠心病属于动脉硬化性疾病，严重者可以引起心肌梗死、心律失常及心力衰竭等，危及生命。冠状动脉造影已经成为临床冠心病诊断的金标准，但是因其属于有创检查，而且价格昂贵。关于纤维连接蛋白(FN)、内皮素(ET)与冠心病的相关性研究报道较少。本研究探讨冠心病猝死患者心肌组织中FN、ET表达情况。

1 材料与方法

1.1对象 选择2008年1月至2012年1月我院150份冠状动脉组织切片标本，将冠状动脉分为正常血管组、稳定斑块组和不稳定斑块组。其中，稳定斑块组50例，男34例，女16例，年龄(61.7±10.9)岁；不稳定斑块组50例，男30例，女20例，年龄(59.7±8.8)岁；正常血管组50例，男32例，女18例，年龄(60.5±9.7)岁；3组研究对象一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2检测方法

1.2.1标本采集 3组患者心脏标本均沿血流方向剖开，分别于室间隔、左心前壁、右心前壁、心尖取一块心肌组织，10%甲醛溶液固定，常规脱水，石蜡包埋、切片(厚4～5 μm)，为防止组织脱片，采用防脱片胶将组织切片贴附载玻片上，60℃烘片30 min固定。分别进行HE染色和免疫组化染色。

1.2.2免疫组织检测法〔2〕采用MaxVision免疫组化方法对比检测FN、ET，即用型快捷MaxVisionTM 广谱试剂盒、ET 兔抗人多克隆抗体、FN 兔抗人多克隆抗体、液体DAB 显色试剂盒均购自福建迈新公司。具体步骤参照迈新公司试剂盒说明书进行严格操作。采用试剂公司提供的阳性对照片进行对照，均以PBS液代替一抗作为阴性对照。

1.2.3阳性表达图像分析〔3〕对各组切片免疫组织化学的染色情况先在Olympus BX41 显微镜下观察，采用Olympus图像分析软件(日本Olympus有限公司)对所有切片进行图像分析，对FN、ET免疫组织化学染色阳性反应产物进行定位半定量检测。每个部位的阳性反应区域随机选取5个视野，测量阳性反应物区域、平均吸光度、累积吸光度，然后取其平均值。

2 结 果

正常心肌组FN、ET均呈阴性表达；稳定斑块组FN呈散在、单个细胞性胞质棕褐色着色，ET呈局灶性心肌细胞胞浆阳性表达；不稳定斑块组Fn呈大片状心肌细胞胞质棕褐色着色，ET呈血管平滑肌、血管内皮及心肌细胞胞浆呈棕色阳性着色。3组患者心肌中ET、FN阳性反应物累积吸光度值比较差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 3组心肌组织ET、FN染色图像结果比较

3 讨 论

缺血性心肌病是在严重多支冠状动脉病变基础上发生多发或复发性心肌梗死；或在慢性心肌缺血、营养障碍的情况下，心肌虽仍能维持组织生存，但左心室功能却持续地处于低下状态之中，冠状动脉供血恢复后左心室功能却可部分或全部恢复，临床称之为心肌冬眠；而冠状动脉血流已恢复但心肌功能失常仍暂时存在，需要一段时间方能恢复，则称之为心肌顿抑〔4〕。缺血性心肌病可导致散在或弥漫性心肌纤维化及心肌间质胶原沉积增加等。心肌缺血早期心肌细胞及其组织结构在形态学上无明显改变,常规方法检查不到,冠状动脉造影又属于有创检查，而且价格昂贵。

ET具有强烈地收缩冠状动脉、肾小动脉;刺激心钠素的释放，提高全身血压;抑制肾素释放等作用〔5〕。研究证明ET是机体产生的一种内源性致损伤因子，其合成或释放增加可致冠状动脉痉挛，加重心肌缺血坏死。当较大的冠状动脉发生粥样硬化导致管腔堵塞时，使得局部血流阻力明显增加，阻塞处远端的小动脉血管床调节达到最大限度的扩张，以减少血流阻力保证有足够的血流量，如该处冠状动脉血管扩张储备已近极限，当心肌耗氧量增加时，通过冠状动脉的扩张增加血流量的能力非常有限，经上述多种机制反复调控均不能满足心脏血氧供应以致产生心肌缺血〔6，7〕。冠状动脉痉挛常发生于有粥样硬化病变狭窄基础上，少数可发生于形态正常的冠状动脉〔8〕。内皮细胞功能障碍可早于临床出现冠心病症状或明显冠状动脉狭窄病变之前数年即存在。内皮细胞功能完整的冠状动脉，血小板激活后释放产物，如FN、ET等以及运动、乙酰胆碱(Ach)等可使血管产生内皮依赖性舒张；而内皮细胞功能发生障碍时，上述内皮依赖舒张作用减弱，甚至转变为血管收缩效应〔9〕。病理条件下内皮细胞激活后，内皮素-1、ATⅡ等缩血管物质生成增加，上述因素可能均参与了冠状动脉痉挛的发生〔10〕。另外，由血管内皮释放的内皮源性舒张因子(EDRF)及ET在心血管系统中具有强烈生物活性，内皮源性舒张因子扩张血管，而ET是最强的血管收缩物质，这两种物质的消长，也明显影响冠状动脉的张力。进一步使血管腔狭窄程度增加，严重者促发斑块破裂，甚至导致冠状动脉急性闭塞而诱发急性心肌梗死。

FN为一族高分子糖蛋白，广泛分布于人体细胞表面和血浆中，有促进巨噬细胞的吞噬功能，促进细胞与纤维基质间连接的生理作用。纤连蛋白与机体创伤修复、组织炎症、纤维化及硬化过程等有密切关系〔11〕。实验证明FN参与了动脉粥样硬化这一过程。随着血管硬化程度的增加FN含量呈下降趋势。血浆FN缺乏会引起微血管完整性的破坏和通透性升高，导致血浆大量外渗，可促进血小板迅速黏附、聚集，形成血小板聚集体，并释放血小板颗粒成分，形成微血栓。血小板激活后其表面膜糖蛋白Ia，和Ib激活，对血小板的始动接触起重要作用；血小板膜GPⅡb/Ⅲb受体激活、暴露后，成为纤维蛋白和von Willebrand因子等的结合部位，导致血小板间的连接并形成血小板聚集体〔12〕。存在粥样硬化斑块病变的冠状动脉，特别是斑块破裂时，其内膜无血栓形成的特性已减弱或丧失血小板激活后释放的产物TXA2、5-HT以及血小板源性生长因子(PDGF)等除可进一步促进血小板聚集外，尚可引起冠状动脉痉挛，从而导致血栓不断进展。

本文结果证实FN和ET的阳性表达是心肌缺血和损伤的灵敏指标，对推断冠心病猝死具有一定的实际应用价值。

4 参考文献

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9胡志希，胡思远，李 琳，等.血管紧张素转换酶基因多态性对早发冠心病血瘀证的影响〔J〕.中西医结合心脑血管病杂志，2013；11(5)：515-8.

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