凋亡相关蛋白死亡受体5、细胞内Fas相关死亡域样白介素1-β转换酶抑制蛋白在胃组织中的表达及临床意义

朱亚平 周 雨 刘 静 王 乐 凌 晖

(邵阳医学高等专科学校，湖南 邵阳 422001)

胃癌是世界上居第二位致死性的恶性肿瘤〔1〕，其发生、发展与多种致癌基因、细胞凋亡基因密切相关,其中细胞凋亡的失衡起着重要的作用。凋亡主要通过内在和外在的凋亡通路进行诱导。内在的通路是激活线粒体相关信号,而外在的通路以死亡受体活化为特点〔2〕，外在凋亡通路的死亡受体属于肿瘤坏死因子(TNF)受体超家族,包括Fas、TNF受体1(TNFR1)、凋亡相关蛋白死亡受体3(DR3)、DR4、DR5、DR6〔3〕。本文主要检测不同胃组织中DR5与白介素1β转换酶抑制蛋白(c-FLIP)的表达情况，了解在疾病中的作用。

1 资料与方法

1.1一般资料 组织制备选用胃腺癌组织60例,32例癌旁正常胃黏膜和26 例慢性胃炎标本。其中男37例,女23 例,年龄61～77〔平均(68.25±4.72)〕岁，其中高分化腺癌 20 例、中分化腺癌 21 例和低分化腺癌19 例。所有患者术前均未接受化、放疗。

1.2切片制作及免疫组化染色〔4,5〕将样本切片放入温箱烘片后,经二甲苯脱蜡和梯度酒精逐级水化,蒸馏水冲洗3 min,磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗5 min×3次。把切片浸入拘椽酸盐抗原修复液中,修复20 min,然后置于新鲜配制的3%H2O2中浸泡30 min,先滴加一抗(DR5 1∶1 000,c-FLIP 1∶200)于切片上 ,4℃冰箱过夜后滴加二抗工作液,孵育25 min。滴加辣根过氧化物酶标记链霉素卵白素工作液,37℃湿盒内孵育20 min。各步间PBS水洗,二氨基联苯胺(DAB)显色,苏木素复染。使用梯度酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封片,在显微镜下进行观察。

1.3观察指标 观察不同性别、年龄及胃组织中DR5及c-FLIP的表达，不同分化程度的胃腺癌中DR5及c-FLIP的表达，以及DR5及c-FLIP的关系。

1.4统计学方法 应用SPSS13.0软件，计数资料比较采用χ2检验，相关性检验用 Spearman分析。

2 结 果

2.1DR5及c-FLIP在不同性别、年龄及胃组织中的表达 DR5与c-FLIP蛋白表达与年龄、性别无明显相关性，各组DR5在胃癌组织中阳性表达率比较差异有显著性意义(P<0.05)。各组c-FLIP在胃癌组织中阳性表达率比较差异有显著性意义(P<0.05)。见表1。

表1 DR5及c-FLIP在不同性别、年龄及胃组织中的表达情况〔n(%)〕

2.2不同分化程度的胃腺癌中DR5及c-FLIP的表达 DR5蛋白在高、中、低分化腺癌中的表达率比较差异有显著性意义(P<0.05)。c-FLIP在高、中、低分化腺癌中的表达率比较差异有显著性意义(P<0.05)。即分化程度越低,DR5与c-FLIP 蛋白表达越高。见表2。

表2 不同分化程度的胃腺癌中DR5及c-FLIP的表达〔n(%)〕

2.3DR5及c-FLIP的关系 51例 c-FLIP 蛋白阳性表达的胃癌标本中有35例DR5呈阳性表达，DR5 与 c-FLIP 蛋白之间的关系表现为正相关性(r=0.93)。

3 结 论

胃癌是我国最常见的消化道恶性肿瘤，其中癌基因、抑癌基因、凋亡制基因之间的失调在疾病的发生、发展过程中起着重要的作用。死亡受体是外源性凋亡通路的重要调节器,激活某些死亡受体如DR5，通过诱导凋亡选择性杀死癌细胞,TNF相关凋亡诱导配体(TRAIL)死亡受体已经逐渐成为一种重要的癌症治疗靶点,DR5高表达于多种肿瘤组织中〔6～8〕。 研究表明，在非小细胞肺癌中,DR5表达与死亡风险相关〔9〕。乳腺癌中DR5表达与淋巴结转移显著相关，与预后相关〔10〕。c-Flip蛋白是细胞凋亡调节因子与增殖诱导剂。c-Flip常通过阻止半脱氨酸蛋白酶(caspase-8)活化抑制凋亡，能够抑制fas、TNFR-1、DR3、TRAILR介导的凋亡〔11～13〕。

DR5在胃癌组织中大部分为阳性表达，可利用其作为TRAIL的受体,研发胃癌的治疗药物〔14〕。c-FLIP 在胃癌组织高表达,且显著高于正常胃黏膜,c-FLIP 表达可能与胃癌细胞增殖相关〔15〕。DR5 与 c-FLIP 蛋白之间的关系表现为正相关性。一方面可以作为胃癌早期诊断的检测指标;另一方面可以根据其表达判断胃癌组织分化程度，两者起到协同作用。

4 参考文献

1Ravindran J,Prasad S,Aggarwal BB.Curcumin and cancer cells:how many ways can curry kill tumor cells selectively〔J〕. AAPS J,2009；11(3):495-510.

2Hussain AR,Ahmed M,Al-Jomah NA,etal.Curcumin suppresses constitutive activation of nuclear factor-kappa B and requires functional Bax to induce apoptosis in Burkitt's lymphoma cell lines〔J〕.Mol Cancer Ther,2008；7(10):3318-29.

3Elrod HA,Sun SY.Modulation of death receptors by cancer therapeutic agents〔J〕. Cancer Biol Ther,2008;7(2):163-73.

4朱亚平.凋亡相关蛋白DR5、c-FLIP在胃组织中的表达及意义〔D〕.南华大学硕士论文,2011.

5高艳红,赵治国.采用组织芯片技术研究c-FLIP在胃癌中的表达及其意义〔J〕.临床消化病杂志,2008;20(2):108-9,12.

6牛 辉,夏凤国,王广义.抗人DR5单克隆抗体诱导肝癌细胞株SMMC-7721凋亡实验研究〔J〕.中国老年学杂志,2007;27(4):318-20.

7Ozoren N,El-Deiry WS.Cell surface death receptor signaling in normal and cancer cells〔J〕.Semin Cancer Biol,2003;13(2):135-47.

8Liu LG,Tanaka H,Ito K,etal.Absence of gene mutation in TRAIL receptor 1 (TRAIL-R1) and TRAIL receptor 2 (TRAIL-R2) in chronic myelogenous leukemia and myelodysplastic syndrome,and analysis of mRNA Expressions of TRAIL and TRAIL-related genes in chronic myelogenous leukemia〔J〕.Acta Haematol,2005;113(2):113-23.

9徐 玲,刘 静,刘云鹏,等.奥沙利铂通过上调死亡受体表达增强TRAIL诱导的胃癌细胞凋亡的实验研究〔J〕.现代肿瘤医学,2010;18(11):2085-8.

10Cheong HJ,Lee KS,Woo IS,etal.Up-regulation of the DR5 expression by proteasome inhibitor MG132 augments tRAIL-induced apoptosis in soft tissue sarcoma cell lines〔J〕.Cancer Res Treat,2011;43(2):124-30.

11冷 雪.c-FLIP(L)在乳腺癌细胞系中的表达及对TRAIL诱导凋亡敏感性的影响〔D〕.天津医科大学硕士论文,2012.

12刘晓庆,涂亚庭.c-FLIP在人非黑素细胞性皮肤肿瘤组织中的表达及其临床意义〔J〕.中国癌症杂志,2011;21(3):167-70.

13臧凤琳,魏熙胤,孙蕾娜,等.c-FLIP(L)在乳腺癌中表达的意义及对凋亡的调节〔J〕.中国肿瘤临床,2010;37(15):841-5.

14Yoshida T,Horinaka M,Sakai T.Combination-oriented molecular-targeting prevention of cancer:a model involving the combination of TRAIL and a DR5 inducer〔J〕.Environ Health Prev Med,2010;15(4):203-10.

15Sakai T."Molecular-targeting prevention" of cancer〔J〕.Nihon Eiseigaku Zasshi,2011;66(1):3-12.