自体骨髓间充质干细胞移植治疗帕金森病的疗效

王 旭 张志彬 贾芙蓉 王 平

(解放军第二零八医院神经介入科，吉林 长春 130062)

传统的帕金森病(PD)药物治疗应用左旋多巴(L-dopa)效果明显，但长期应用会出现神经系统及精神行为等方面难以控制的副作用，从而限制此药应用。丘脑腹后苍白球消融术可有效改善PD 运动症状，但有一定创伤，且有适应证的限制。利用干细胞移植替代凋亡的多巴胺神经元，恢复多巴胺的神经环路，成为治疗该病的理想治疗方法〔1〕。本研究应用自体骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植进行治疗PD的临床效果进行分析评价。

1 资料与方法

1.1研究对象 解放军二零八医院2008年6月至2010年12月收治的26例PD患者，男15例，女11例；年龄45～73〔平均(62.5±2.8)〕岁。病程3～10〔平均(6.2±3.6)〕年；Hoehn-Yahr分级：Ⅰ级7例，Ⅱ级8例，Ⅲ级期7例，Ⅳ级4例。均接受复方多巴制剂。统一PD评分量表(UPDRS)评分均接受抗PD药物治疗，符合2006年中华医学会神经病学分会运动障碍及PD制定的诊断标准〔2〕:(1)运动减少。(2)至少符合以下1项：①肌肉僵直,②静止性震颤,③逐渐进展,④发病后多为持续性不对称性受累。(3)Hoehn-Yahr Ⅰ～Ⅳ级。(4)既往无肝肾功能异常。排除标准：①各种继发性PD综合征及PD叠加综合征；②有癫痫病史及肿瘤病史；③有其他系统严重病症者，不能耐受干细胞移植者；④期望值过高或不切实际要求者。

1.2方法

1.2.1细胞分离器械 骨髓穿刺针、高速低温离心机、超净工作台、细胞分离液。宁夏中联达生物有限公司的骨髓、脐带血处理试剂盒。

1.2.2术前准备 术前常规查血常规，肝肾功能，腹彩，胸片，肿瘤标志物检查。术前3 d给予粒细胞集落刺激因子进行动员，剂量为150 μg，1次/d皮下注射，同时口服拜阿司匹林，当白细胞升至20×109～30×109/L时开始采集骨髓。

1.2.3骨髓血采集与细胞分离 在无菌局麻下通过髂后骨穿多点抽取自体骨髓血200 ml(枸橼酸钠抗凝)，然后在实验室将骨髓血经过去除红细胞、离心、提取、清洗、过滤等步骤，获得干细胞悬液，采用流式细胞仪检测法，进行记数，一般悬液中干细胞数可达到1×108/L～9×108/L。

1.2.4介入移植 在数字减影血管照影(DSA)下采用Seldinger穿刺技术行右侧股动脉穿刺插管，将导管超选入小脑上动脉及大脑后动脉，造影，观察血管情况，将干细胞悬液10 ml于0.5 h内缓慢注入小脑上动脉及大脑后动脉，肝素生理盐水冲管，拔管，股动脉无菌加压包扎后回病房，右下肢制动6 h。

1.3疗效评定 分别在移植前、移植后1、3个月对患者UPDRS Ⅱ与Ⅲ评分，移植前、移植后1个月分别查肝肾功能。同时观察移植前后有无发热、不适等不良反应发生。进行临床评价。

2 结 果

2.1不良事件和副反应 细胞移植26例患者中，于自体BMSCs移植后所有患者无发热，3例有轻度胃肠道症状，均自行缓解。1个月复查肝功肾功无异常。

2.2移植前后治疗效果的比较 与移植前比较，移植后1、3个月UPDRSⅡ评分及UPDRSⅢ评分均有显著性下降(P<0.05),尤以治疗后3个月为明显。见表1。

表1 PD患者移植前后治疗效果分)

3 讨 论

本研究证实BMSCs治疗PD是安全有效的方案。自体BMSCs移植治疗PD的机制可能如下：(1)细胞替代作用,胚胎间充质干细胞在体外可被诱导分化为nestin 阳性的神经干细胞，移植入PD大鼠模型纹状体可分化表达TH+神经元，并能够存活、向病灶侧迁移，从而改善PD症状〔3～5〕。(2)神经营养和保护作用，间充质干细胞可分泌多种活性物质，如脑源性神经营养因子、碱性成纤维因子可通过不同机制减少神经细胞凋亡，同时为神经修复和功能重建提供微环境〔6,7〕。

目前，可选择的BMSCs移植途径有许多种，主要有静脉、动脉、脑实质、鞘内等，静脉移植方便，对患者无明显损伤，但易出现静脉栓塞可能。脑实质内移植一般通过立体定向方法，在头CT下定位后，头皮下钻孔将干细胞送至脑组织局部，病灶区干细胞浓度高，易收到好的疗效，但操作为侵入性，不易被接受。鞘内移植，通过腰穿将干细胞移植到脑脊液内，也较安全便捷。动脉移植或介入移植，是在股动脉穿刺，动脉导管在DSA下将导管超选入病灶局部，将干细胞送至病灶局部。此方法对病人几乎无损伤，干细胞不通过静脉途径，直接在病灶周围发挥作用，能使有限的干细胞发挥最大的疗效，且几乎无栓塞的危险，疗效肯定。自体BMSCs移植取自自体骨髓，无免疫反应及伦理道德等问题，只要在骨髓穿刺及干细胞提取时注意无菌操作，可将感染降到最低，本组患者无一例感染。自体BMSCs治疗PD安全可靠，但移植途径及移植数量如何选择，目前尚无定论，远期疗效如何仍需继续观察。

4 参考文献

1Kim JH,Auerbach JM,Rodriguez-Gonez JA,etal.Dopamine neurons derived from embryonic stem cells function in an unimd model of Parkinson’s disease〔J〕.Nature,2002;418(6893):50-6.

2中华医学会神经病学分会运动障碍及帕金森病学组.帕金森病的诊断〔J〕.中华神经科杂志，2006;39(6)：408-9.

3Axeil MZ,Zlateva S,Curtis M.A method for rapid derivation and propagation of neural progenitors from human embryonic stem cells〔J〕.J Neurosci Methods,2009;184(2):275-84.

4Jin GZ,Cho SJ,Choi EG,etal.Rat mesenchymal stem cells increase tyrosine hydroxylase expression and dopamine content in wentral mesencephalic cells in vitro〔J〕.Cell Biol Int,2008;32(11)：1433-8.

5Li Y,Chen J,Wang L,etal.Intracerebral transpla ntation of bone marrow stromal cells in a 1-methyl-4-pheny-1,2,3,6-tetrahydropyrdine mouse model of Parkinson's disease〔J〕.Neurosci Lett,2001;316(2):67-70.

6Donaldson AE,Cai J,Yang M,etal. Human amniotic fluid stem cells do not differentiate into dopamine neurons in vitro or after transplantation in viov〔J〕.Stem Cells Dev,2009;18(7):1003-12.

7Mc Coy MK,Martinez TN,Ruhn KA,etal.Autologous transplants of adipose-derived adult stromal(ADAS) cells afford dopaminergic neuroprotection in a model of Parkinson's disease〔J〕.Exp Neurol,2008;210(1):14-29.