慢性阻塞性肺疾病病人外周血T淋巴细胞的检测及意义

钱文君 王佩芳 徐 慧 顾宗江

(苏州市立医院北区急诊科，江苏 苏州 215008)

慢性阻塞性肺疾病(COPD)与肺部对香烟烟雾等有害气体或有害颗粒的异常炎症反应有关。COPD患者戒烟后肺内炎症持续存在，可能是包括炎症在内的复合因素最终决定了疾病进展。COPD的炎症过程中有中性粒细胞、巨噬细胞、T淋巴细胞及多种细胞因子、炎症介质参与，有学者提出COPD是自身免疫性疾病的假设〔1〕。本文探讨细胞免疫在COPD发病中的作用。

1 资料与方法

1.1病例选择 2009年4月至2010年6月在苏州市立医院(北区)经临床诊断的入院治疗的COPD病人13例。临床诊断包括体征、X线和实验室有关项目检测，诊断符合2007年中华医学会呼吸病分会制定的COPD诊治规范(草案)中的诊断标准〔2〕。正常对照组12例，均为苏州市立医院(北区)体检中心60岁以上正常人群。

1.2试剂 PE标记的抗人CD3+、CD4+、CD8+和CD28+抗体，FITC标记的抗人CD4+、CD8+、CD25+、CD45+RA和CD45RO+抗体，PE和FITC标记的小鼠Ig对照抗体以及红细胞溶解液均购自Immunotech公司。

1.3方法 抽取COPD患者和正常体检老人的静脉抗凝血3 ml，吸出300 μl，分配至10个流式检测管中，每管30 ul，其余静脉血经4 000 r/min速度离心10 min后，吸取血浆置于EP管，-20℃冰箱内保存，用于细胞因子检测。根据检测要求，在每管中加入抗体微量全血法，对的T淋巴细胞检测进行PE和FITC的双标记，室温孵育15 min后，加入红细胞溶解液120 μl，37℃水浴20 min，加入磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤液3 ml，离心洗涤后，上Beckman-Coulter公司的流式细胞仪检测并分析(参考值：CD3+：60%～85%、CD4+：28%～58%、CD8+：19%～48%、CD4+/CD8+：1.33～1.99)〔3〕。

1.4统计学方法 采用SPSS10.0软件包进行t检验。

2 结 果

2.1外周血总T细胞、CD4+和CD8+亚群的检测 与参考值相比较，健康对照组的CD3+、CD4+均值和CD4+/CD8+的比值均有所下降，急性期COPD组的CD3+和CD4+均值也有下降，而CD8+均值有所上升，导致CD4+/CD8+的比值下降并倒置，但组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 两组研究对象总T细胞、CD4+和CD8+亚群±s，%)

2.2CD4+CD45RA+、CD4+CD45RO+、CD8+CD45RA+和CD8+CD45RO+亚群的检测 急性期COPD组的CD4+CD45RA+均值和CD4+CD45RA+/CD4+CD45RO+比值与健康对照组相应的组别比较有所下降，而CD4+CD45RO+均值有所上升，组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。急性期COPD组的CD8+CD45RA+均值、CD8+CD45RO+均值和CD8+CD45RA+/CD8+CD45RO+比值与健康对照组相应的组别比较有所上升，差异均未达到统计学的意义(P>0.05)。见表2,表3。

表2 两组研究对象CD4+CD45RA+和CD4+CD45RO+亚群检测结果±s，%)

表3 两组的CD8+CD45RA+和CD8+CD45RO+亚群检测结果±s)

2.3CD4+CD28+亚群的检测 急性期COPD组的CD4+CD28+均值与健康对照组的组别比较有所下降〔(19.25±5.70%)%vs(25.83±6.35)%，P<0.05〕。

3 讨 论

正常人外周血T细胞及亚群的参考值标准主要是针对成年人。老年人机体内各个生理系统的功能都有衰退，免疫系统也不例外，淋巴细胞的数量和功能都存在下降。COPD好发于老年人，而且呈现反复发作的特点，因此选取了60岁以上正常老人作为健康对照组， COPD患者的外周血T细胞及亚群可以与年龄相仿的老年人进行比较，使得结果更具可比性。由于CD4+和CD8+分子除主要在T细胞上表达外，也有部分表达于其他细胞。相对于各种文献在研究COPD疾病时采取的单标记方法检测患者和对照组人群外周血T细胞和CD4+、CD8+亚群，本研究中采取结合CD3分子，进行CD3+CD4+和CD3+CD8+分子的双标记检测，可以更准确地界定CD4+和CD8+T细胞亚群。检测的结果表明，说明老年人的T细胞免疫功能有所衰退。COPD患者体内免疫功能存在紊乱。CD8+T细胞在COPD患者的发病机制和疾病进程中起着重要的作用，体内的CD8+T细胞升高，CD4+T细胞降低，因为采用CD4+/CD8+的比值大部分都在1.5以上，导致CD4+/CD8+的比值严重倒置，有明显的统计学差异。本研究中，由于采取了不同的方法和标准，两组间CD4+/CD8+的比值并无统计学意义上的差异。

淋巴细胞上表达CD45RA主要和初始淋巴细胞有关，而表达CD 45RO主要和记忆淋巴细胞有关。由于T细胞在COPD疾病的发病过程中起着重要作用，而且COPD好发于老年人，呈现反复发作的特点，检测两个组别的CD4CD45RA和CD4CD45RO的表达，显示急性期COPD组的CD4CD45RA表达下降，而CD4CD45RO的表达升高，导致CD4+CD45RA+/CD4+CD45RO+的比例降低，提示反复发作的COPD可能导致患者体内记忆性的CD4+T细胞增加。检测两个组别的CD8CD45RA和CD8CD45RO的表达，没有显示出类似的特点，不仅健康对照组中的CD8CD45RA的表达高于CD8CD45RO的表达，而且在COPD的急性发作时，CD8CD45RA和CD8CD45RO的表达都有所增加，前者的增加多于后者。有学者发现COPD患者外周血中细胞毒T细胞(CD27-/CD45RA+)的活性增强〔4〕，由于细胞毒T细胞主要存在于CD8+T细胞，随着患者外周血中细胞毒T细胞(CD27-/CD45RA+)活性的增强，提示可伴随CD8+CD45RA+数量的增加。

COPD的病因较复杂，吸烟是COPD众多病因中最常见的重要因素，但近年来的研究发现部分患者在戒烟后，肺部的损害并未完全停止，仍有持续进展，因此，也有学者提出，COPD是自身免疫性疾病的假设〔5〕。在自身免疫性疾病中，CD4+CD28+T细胞是重要的亚群，这个亚群存在着下降。在正常成年人体内，CD4+CD28+T细胞约占CD4+T细胞 的90%。老年人体内，常有自身免疫现象，CD4+CD28+T细胞有所下降，本研究结果也证实了这一点。但在急性期COPD组，CD4+CD28+T细胞下降，对COPD是自身免疫性疾病的假设提供了一定的支持。

4 参考文献

1黄绍光.自身免疫在慢性阻塞性肺病的作用〔J〕.上海交通大学学报(医学版)，2008;28(9)：1062-4.

2中华医学会呼吸病学分会.慢性阻塞性肺疾病(COPD)诊治指南〔J〕.中华结核和呼吸杂志，2007；30(1)：8-17.

3许力军, 唐 颖, 吴英慧，等. 联合吸入治疗对AECOPD患者外周T淋巴细胞、IL-2、CRP表达的调节以及肺功能的影响〔J〕.中国现代医学杂志, 2009;19(7): 1035-8.

4万 鹏，钟小宁. 免疫反应与慢性阻塞性肺疾病〔J〕.中国实用内科杂志, 2009;29(4)：371-3.

5Stefanska AM，Walsh PT.Chronic obstructive pulmonary disease:evidence for an autoimmune component〔J〕.Cell Mol Immunol,2009;6(2): 81-6.