四君子汤对自然衰老小鼠脑组织抗氧化能力的影响

1.河北大学基础医学院，河北 保定 071000；2.河北省保定市儿童医院，河北 保定 071000；3.河北省保定市第三中学，河北 保定 0710000

四君子汤对自然衰老小鼠脑组织抗氧化能力的影响

王怀颖1范林林2胡亚南2孟德光2聂雷2沈莉3王烁3

1.河北大学基础医学院，河北 保定 071000；2.河北省保定市儿童医院，河北 保定 071000；3.河北省保定市第三中学，河北 保定 0710000

目的研究四君子汤对自然衰老小鼠脑组织抗氧化能力的影响。方法雄性KM小鼠分为青龄对照组、老龄对照组和四君子汤组，分光光度法检测小鼠脑组织SOD活性、MDA水平的变化。结果与青龄对照组比较，老龄对照组小鼠脑组织SOD活性降低，MDA水平升高。与老龄对照组相比，四君子汤组小鼠脑组织SOD活性升高，MDA水平下降。结论四君子汤可通过增强衰老小鼠脑组织抗氧化能力，达到延缓衰老的作用。

四君子汤；衰老；脑组织；抗氧化能力

氧化应激、氧化损伤的积累和抗氧化能力下降导致衰老发生[1，2]，而四君子汤能拮抗自由基损伤，改善内分泌功能，调节能量代谢[3]。本试验以自然衰老小鼠为模型，观察四君子汤对脑组织抗氧化能力的影响，为其临床应用提供理论依据。

1 仪器与材料

1.1 实验动物：清洁级雄性KM小鼠，购自河北省实验动物中心(合格证号804064)。

1.2 试剂：SOD测定试剂盒、MDA测定试剂盒，购自南京建成生物工程公司。

1.3 仪器：电子天平SL20001N，上海民桥精密科学仪器有限公司；低温高速离心机X-22R，美国贝克曼；722 S 分光光度计，上海精密科学仪器有限公司；RF-5301PC荧光分光光度计，日本岛津。

2 方法

2.1 四君子汤制备 党参、白术(炒)、茯苓、炙甘草，按2∶2∶2∶1组成，剪碎、浸泡、水煎，收集滤液，滤渣再次加水煎煮，合并两次滤液，浓缩至2g/ml，4℃保存备用。

2.2 动物分组 KM小鼠分为青龄对照组(3月龄)、老龄对照组(12月龄)和四君子汤组(12月龄)。四君子汤组每日灌胃四君子汤12g·kg-1，其余两组灌胃等量蒸馏水，共8周。8周后，断头处死动物，冰台上剥离一侧脑组织-70℃冰箱保存，用于生化指标测定。

2.3 脑组织生化指标测定 取-70℃冰箱保存脑组织加入适量裂解液进行组织匀浆。4℃，12000rpm离心20min，取上清液测定脑组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)浓度。具体操作按试剂盒说明书进行。蛋白定量用考马斯亮蓝法。

3 结果

3.1 四君子汤对小鼠脑组织SOD活性的影响 与青龄对照组比较，老龄对照组小鼠脑组织SOD活性明显降低(P<0.01)。四君子汤组小鼠脑组织SOD活性升高，高于老龄对照组，有显著性差异(P<0.05)(表1)。

3.2 四君子汤对衰老小鼠脑组织MDA水平的影响 与青龄对照组比较，老龄对照组小鼠脑组织MDA水平增高，有显著性差异(P<0.01)。与老龄对照组相比，四君子汤组小鼠脑组织MDA水平下降，差异显著(P<0.05)(表1)。

表1 不同组别小鼠脑组织SOD活性、MDA水平的变化

注：与老龄对照组比较，△P<0.05；与青龄对照组比较，*P<0.01。

4 讨 论

衰老的确切机制目前还不明确，存在自由基、端粒、细胞凋亡等多种学说，其中自由基学说认为氧化损伤的积累和氧化防御机能的下降在衰老过程中起关键作用[4]。SOD是机体氧化防御机制的重要组成成分[5]，MDA则可客观反映机体组织细胞脂质过氧化程度和自由基产生情况。

四君子汤出自《太平惠民和剂局方》，是中医学健脾益气的代表方剂，该方可明显改善衰老模型小鼠学习记忆功能[6]，并且可增强衰老大鼠免疫功能[7]。小鼠增龄过程中氧化应激是脑老化的首要影响因素，氧化损伤的积累和抗氧化能力下降导致衰老发生[1,2]。而氧自由基损伤作用是神经细胞凋亡发生的重要机制之一[8]。老龄小鼠脑组织SOD活性下降，氧化产物MDA浓度增加，说明脑组织抗氧化能力下降。本试验证实四君子汤可提高衰老小鼠脑组织SOD活性，降低MDA水平，说明四君子汤可增强脑组织抗氧化能力。这提示我们，四君子汤可通过清除自由基延缓衰老。

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保定市科技攻关项目(06F04-3)，河北省中医药管理局科研计划项目(2007101)。

王怀颖(1973-)，女，硕士，副教授，主要从事脑衰老机制的研究。

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1007-8517(2014)20-0017-01

2014.09.11)