薄荷药材的提取与含量测定
2014-09-12胡春兰耿榕徽杨冬
胡春兰++++++耿榕徽++++++杨冬丽+++++王春民++++++张东阁++++++张欢++++裴有志
[摘要] 目的 探讨建立薄荷药材的提取和含量测定方法。 方法 以薄荷脑为指标成分，采用DM-FFAP弹性石英毛细管柱，初始柱温为120℃，以2℃/min升温至140℃，然后以15℃/min升温至220℃，保持5 min。比较索氏提取、加热回流、超声提取法的差异，并优选最佳提取方法。 结果 最佳提取工艺：加10倍量无水乙醇溶液85℃回流提取1 h。薄荷脑在34.034~343.04 μg/ml浓度范围内线性关系良好，平均回收率为99.00%，RSD=1.87%（n=6）。 结论 本文所建立的提取和含量测定方法快速简便、结果可靠，可为薄荷药材质量控制提供科学依据。
[关键词] 提取；含量测定；薄荷脑；薄荷
[中图分类号] R284.1[文献标识码] A[文章编号] 1674-4721（2014）06（b）-0008-04
The extraction and content determination on Mentha hsplocalyx Briq
HU Chun-lan1,2 GENG Rong-hui1,2 YANG Dong-li2,3 WANG Chun-min2,3▲ ZHANG Dong-ge2 ZHANG Huan2PEI You-zhi2
1.Institute of Traditional Chinese Medicine,Chengde Medical University,Chengde 067000,China;2Jingfukang Pharmaceutical Group,Chengde City in Hebei Province,Chengde 067000,China;3.The New Excipients of Traditional Chinese Medicine Engineering Research Center of Hebei Province,Chengde 067000,China
[Abstract] Objective To explore the methods for extraction and content determination on Mentha haplocalyx Briq. Methods Menthol was as the index components.DM-FFAP chromatographic column was applied,with initial temperature set at 120℃,then heated up to 140℃ at the speed of 2℃/min,then heated up to 220℃ at the speed of 15℃/min,then maintained the temperature at 220℃ for 5 minutes.The optimal extraction method was selected based on comparison of Soxhlet extraction,heat reflux extraction and ultrasonic extraction. Results The study identified the optimal extraction process: adding 10 times amount of anhydrous ethanol solution then heat reflux extraction under 85℃ water bath for 1 hour.Menthol had good linear relation at the concentration of 34.034-343.04 μg/ml,with average recovery rate of99.00%，RSD=1.87% (n=6). Conclusion The extraction and content determination methods developed in the study are quick,simply,conveninent and reliable,providing scientific basis for quality control of Mentha haplocalyx Briq.
[Key words] Extraction;Content determination;Menthol;Mentha haplocalyx Briq
薄荷为唇形科植物薄荷（Mentha haplocalyx Briq）的干燥地上部分[1]，其药用历史悠久，广泛应用于食品、香料、化妆品、烟草工业等。研究报道，薄荷中含有薄荷脑、薄荷酮、柠檬烯等挥发性成分，还有黄酮类、有机酸、氨基酸等其他成分[2-6]。薄荷脑应用于皮肤或黏膜表面时主要有清凉作用，促渗透作用，抗刺激作用，止痒作用；薄荷醇可作用于口腔和鼻腔黏膜、呼吸系统、胃肠道、膀胱或中枢神经系统[7-8]。《中国药典》2005年版一部中，仅收载了以挥发油总量为指标对其含量进行控制，缺乏代表性成分薄荷脑的含量测定项。很多文献通过提取薄荷药材中挥发油，再检测挥发油中的薄荷脑[9-15]，本研究采用加热回流法直接提取薄荷药材中的薄荷脑，并采用气相色谱法对薄荷脑的含量进行测定，以期为薄荷药材的进一步开发提供科学依据。
1 仪器与材料
Agilent7890A气相色谱仪。薄荷脑对照品（批号：110728-200506，供含量测定用，中国生物制品检定所），薄荷药材由颈复康药业集团有限公司提供（批号：Y444-110901-1），其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：DM-FFAP弹性石英毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；FID检测器；载气：N2；流速：1 ml/min；进样口和检测器温度：250℃；柱温：初始温度120℃，然后以2℃/min持续升温至140℃，再以15℃/min持续升温至220℃，保持5 min；进样量：1 μl；分流比：10∶1。
2.2 对照品溶液的制备
取薄荷脑对照品约35 mg，精密称定，加无水乙醇定容至10 ml，摇匀，制成浓度为3.371 mg/ml的对照品溶液，备用。
2.3 提取条件的建立
2.3.1 提取方法的考察
2.3.1.1 索式提取法取薄荷药材粉末（过二号筛）8 g，精密称定，置于索氏提取器中，于圆底烧瓶中精密加入100 ml正己烷，称重，85℃回流提取2 h，冷却，称重，补足减失重量，微孔滤膜过滤，取续滤液进样。
2.3.1.2 加热回流提取法取薄荷药材粉末（过二号筛）4 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50 ml正己烷，85℃回流提取2 h，冷却，称重，补足减失重量，微孔滤膜过滤，取续滤液进样。
2.3.1.3 超声提取法取薄荷药材粉末（过二号筛）4 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入正己烷50 ml，称重，冰水浴超声（280 kW，50 kHz），提取30 min，冷却，称重，补足减失的重量，微孔滤膜过滤，取续滤液进样。
3种方法比较，结果见表1，表明加热回流提取效率最高。
表 1 不同提取方法薄荷脑的含量（n=3）
2.3.2 提取溶剂的考察
取薄荷药材粉末（过二号筛）4 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入三氯甲烷、正己烷、无水乙醇50 ml，称重，85℃回流2 h，冷却，称重，补足减失重量，微孔滤膜过滤，取续滤液进样。结果见表2，表明无水乙醇提取效率最高。
表 2 不同提取溶剂薄荷脑的含量（n=3）
2.3.3 提取时间的考察
取薄荷药材粉末（过二号筛）4 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，共3份，分别精密加入无水乙醇50 ml，称重，于85℃水浴锅中，提取时间分别为1、2、3 h，冷却，称重，补足减失重量，微孔滤膜过滤，取续滤液进样。结果见表3，表明1 h已基本提取完全。
表 3 不同提取时间薄荷脑的含量（n=3）
2.3.4 提取温度的考察
取薄荷药材粉末（过二号筛）4 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入无水乙醇50 ml，共3份，称重，分别于85、90、95℃水浴锅中，回流提取1 h，冷却，称重，补足减失重量，微孔滤膜过滤，取续滤液进样。结果见表4，表明85℃的水浴温度足以提取充分。
表 4 不同提取温度薄荷脑的含量（n=3）
2.3.5 提取溶剂用量的考察
取薄荷药材粉末（过二号筛）4 g，精密称定，共3份，分别精密加入40、50、60 ml的无水乙醇，称重，回流提取1 h，冷却，称重，补足减失重量，微孔滤膜过滤，取续滤液进样。结果见表5，表明不同提取剂量对薄荷药材中薄荷脑的提取效率影响不大。
表5 不同提取溶剂用量薄荷脑的含量（n=3）
综上所述，通过单因素循环法对提取方法、提取溶剂、提取时间、提取温度及提取溶剂用量的考察，确定最佳提取工艺为加10倍的无水乙醇溶液85℃加热回流提取1 h。
2.4 含量测定方法的建立
2.4.1 供试品溶液的制备
取薄荷药材粉末（过二号筛）4 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入40 ml无水乙醇溶剂，称重，85℃加热回流提取1 h，冷却，称重，补足减失重量，微孔滤膜过滤，取续滤液进样。
2.4.2 线性范围
分别精密量取上述薄荷脑对照品溶液0.1、0.15、0.2、0.5、0.75、1 ml，于5 ml容量瓶中，无水乙醇定容，配置成6个不同浓度的对照品溶液，按本文色谱条件测定。以浓度（mg/ml）为横坐标，对照品峰面积为纵坐标，绘制标准曲线得到回归方程：Y=1.0393X+0.0082，r=0.9999（n=6）。
2.4.3 精密度试验
取同一对照品溶液，连续进样6次，记录薄荷脑的峰面积，RSD为0.97%。
2.4.4 稳定性试验
取供试品溶液，分别于0、2、4、6、24 h测定，记录薄荷脑的峰面积，RSD=0.77%，结果表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。
2.4.5 回收率试验
采用加样回收法。取薄荷药材粉末（过二号筛）2 g，精密称定，分别精密加入对照品溶液2.6 ml，共6份。精密加入无水乙醇40 ml，称重85℃加热回流提取1 h，冷却，称重，补足减失重量，微孔滤膜过滤，取续滤液进样。按上述色谱条件测定，平均回收率为99.00%，RSD=1.83%，结果见表6。
表6 薄荷脑含量测定的回收率结果（n=6）
2.4.6 药材的测定
取承德市不同药房的薄荷药材粉末（过二号筛）4 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入40 ml无水乙醇溶液，称重，85℃加热回流提取1 h，冷却，称重，补足减失重量，微孔滤膜过滤，取续滤液进样。结果见表7、图1。
表7 不同药房药材中薄荷脑的含量（n=6）
2.4.7 提取方法的比较
用上述最佳提取方法和水蒸气蒸馏法（2010年版《中国药典》一部）提取挥发油，比较两者中薄荷脑含量大小。结果见表8，表明加热回流法能提取出比传统方法更多的薄荷脑。
表8 不同提取方法薄荷脑的含量（n=2）
3 讨论
本试验用三氯甲烷、正己烷、无水乙醇溶剂提取，无水乙醇提取效率最高，而且无水乙醇价格便宜，无毒，三氯甲烷、正己烷有一定毒性，但是无水乙醇提取出大量的叶绿素，可能会污染柱子，叶绿素的去除方法有待研究。
通过对承德市6个不同药房的薄荷药材中薄荷脑含量测定，结果表明，不同药材中薄荷脑的含量差别很大，其中三家药房的药材中没有薄荷脑，可能药材质量不同，也可能是药材存放不当导致含量损失。《中国药典》2010版一部中只对薄荷中挥发油含量进行了限定，所以建立薄荷药材中薄荷脑的含量测定方法对评价药材质量以及药材的使用有重大意义。
经典的水蒸气蒸馏法往往由于高温可能造成部分成分损失，或改变其组分，使薄荷脑的提取率相对降低。本文采用加热回流法直接从薄荷药材中提取薄荷脑，使用溶剂量和药材量减少，温度低，损失量少，提取率相对提高。
本试验提取方法不能全部提取薄荷药材的薄荷脑，提取出的薄荷脑也不一定全是薄荷药材中原有的，可能是提取过程中转化来的，薄荷脑也有可能在提取过程中转化成了其他成分，具体情况有待研究。
[参考文献]
[1]国家药典委员会.中国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010.
[2]梁呈元，李维林，张涵庆，等.薄荷化学成分及其药理作用研究进展[J].中国野生植物资源，2003，22（3）：9-10.
[3]刘玉萍，苏旭.青藏高原野薄荷挥发油成分的气相色谱-质谱分析[J].江苏农业科学，2012，40（1）：256-258.
[4]祝祎玮，怀悦，何翠翠.吴药薄荷挥发油成分的GC-MS分析与薄荷醇含量测定[J].南京中医药大学学报，2011， 27（1）：73-76.
[5]徐玉婷.湖北栽培薄荷挥发油化学成分气相色谱-质谱分析[J].湖北中医药大学学报，2011，13（1）：26-29.
[6]陈在敏.薄荷素油特征图谱的研究及多组分含量测定[J].药物分析杂志，2011，31（10）：1957-1960.
[7]程阔菊，王晖，陈垦.薄荷醇的安全性研究进展[J].辽宁中医杂志，2010，37（2）：377-380.
[8]王二豪，赵怡，郭延垒，等.气相色谱法快速测定含薄荷产品中薄荷脑的含量[J].食品科技，2013，38（1）：318-321.
[9]王成港，王春龙，刘衡，等.气相色谱法测定薄荷油中薄荷脑的含量[J].中草药，2004，35（11）：1252-1253.
[10]江周虹，高向波，王玉梅.GC-MS法测定薄荷油中薄荷脑、L-薄荷酮和胡薄荷酮的含量[J].中药材，2009，32（6）：906-908.
[11]苏越，王呈仲，郭寅龙.基于准确质量测定和保留指数的GC-MS分析薄荷挥发性成分[J].化学学报，2009，67（6）：546-554.
[12]刘东辉，黄月纯，张子龙，等.薄荷饮片挥发油气相色谱指纹图谱研究[J].中国药业，2011，20（4）：28-30.
[13]谢治森.薄荷饮片挥发油气相色谱-质谱联用分析[J].海峡药学，2010，22（12）：82-83.
[14]魏兴国，董岩，崔庆新，等.野生薄荷挥发油化学成分的GC-MS分析[J].烟台师范学院学报（自然科学版），2003， 19（2）：116-118.
[15]颜永刚，郭晓恒，邓翀.云南产野生和栽培薄荷中挥发油的GC-MS比较分析[J].中草药，2011，42（6）：1090-1092.
（收稿日期：2014-03-26本文编辑：郭静娟）
3种方法比较，结果见表1，表明加热回流提取效率最高。
表 1 不同提取方法薄荷脑的含量（n=3）
2.3.2 提取溶剂的考察
取薄荷药材粉末（过二号筛）4 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入三氯甲烷、正己烷、无水乙醇50 ml，称重，85℃回流2 h，冷却，称重，补足减失重量，微孔滤膜过滤，取续滤液进样。结果见表2，表明无水乙醇提取效率最高。
表 2 不同提取溶剂薄荷脑的含量（n=3）
2.3.3 提取时间的考察
取薄荷药材粉末（过二号筛）4 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，共3份，分别精密加入无水乙醇50 ml，称重，于85℃水浴锅中，提取时间分别为1、2、3 h，冷却，称重，补足减失重量，微孔滤膜过滤，取续滤液进样。结果见表3，表明1 h已基本提取完全。
表 3 不同提取时间薄荷脑的含量（n=3）
2.3.4 提取温度的考察
取薄荷药材粉末（过二号筛）4 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入无水乙醇50 ml，共3份，称重，分别于85、90、95℃水浴锅中，回流提取1 h，冷却，称重，补足减失重量，微孔滤膜过滤，取续滤液进样。结果见表4，表明85℃的水浴温度足以提取充分。
表 4 不同提取温度薄荷脑的含量（n=3）
2.3.5 提取溶剂用量的考察
取薄荷药材粉末（过二号筛）4 g，精密称定，共3份，分别精密加入40、50、60 ml的无水乙醇，称重，回流提取1 h，冷却，称重，补足减失重量，微孔滤膜过滤，取续滤液进样。结果见表5，表明不同提取剂量对薄荷药材中薄荷脑的提取效率影响不大。
表5 不同提取溶剂用量薄荷脑的含量（n=3）
综上所述，通过单因素循环法对提取方法、提取溶剂、提取时间、提取温度及提取溶剂用量的考察，确定最佳提取工艺为加10倍的无水乙醇溶液85℃加热回流提取1 h。
2.4 含量测定方法的建立
2.4.1 供试品溶液的制备
取薄荷药材粉末（过二号筛）4 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入40 ml无水乙醇溶剂，称重，85℃加热回流提取1 h，冷却，称重，补足减失重量，微孔滤膜过滤，取续滤液进样。
2.4.2 线性范围
分别精密量取上述薄荷脑对照品溶液0.1、0.15、0.2、0.5、0.75、1 ml，于5 ml容量瓶中，无水乙醇定容，配置成6个不同浓度的对照品溶液，按本文色谱条件测定。以浓度（mg/ml）为横坐标，对照品峰面积为纵坐标，绘制标准曲线得到回归方程：Y=1.0393X+0.0082，r=0.9999（n=6）。
2.4.3 精密度试验
取同一对照品溶液，连续进样6次，记录薄荷脑的峰面积，RSD为0.97%。
2.4.4 稳定性试验
取供试品溶液，分别于0、2、4、6、24 h测定，记录薄荷脑的峰面积，RSD=0.77%，结果表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。
2.4.5 回收率试验
采用加样回收法。取薄荷药材粉末（过二号筛）2 g，精密称定，分别精密加入对照品溶液2.6 ml，共6份。精密加入无水乙醇40 ml，称重85℃加热回流提取1 h，冷却，称重，补足减失重量，微孔滤膜过滤，取续滤液进样。按上述色谱条件测定，平均回收率为99.00%，RSD=1.83%，结果见表6。
表6 薄荷脑含量测定的回收率结果（n=6）
2.4.6 药材的测定
取承德市不同药房的薄荷药材粉末（过二号筛）4 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入40 ml无水乙醇溶液，称重，85℃加热回流提取1 h，冷却，称重，补足减失重量，微孔滤膜过滤，取续滤液进样。结果见表7、图1。
表7 不同药房药材中薄荷脑的含量（n=6）
2.4.7 提取方法的比较
用上述最佳提取方法和水蒸气蒸馏法（2010年版《中国药典》一部）提取挥发油，比较两者中薄荷脑含量大小。结果见表8，表明加热回流法能提取出比传统方法更多的薄荷脑。
表8 不同提取方法薄荷脑的含量（n=2）
3 讨论
本试验用三氯甲烷、正己烷、无水乙醇溶剂提取，无水乙醇提取效率最高，而且无水乙醇价格便宜，无毒，三氯甲烷、正己烷有一定毒性，但是无水乙醇提取出大量的叶绿素，可能会污染柱子，叶绿素的去除方法有待研究。
通过对承德市6个不同药房的薄荷药材中薄荷脑含量测定，结果表明，不同药材中薄荷脑的含量差别很大，其中三家药房的药材中没有薄荷脑，可能药材质量不同，也可能是药材存放不当导致含量损失。《中国药典》2010版一部中只对薄荷中挥发油含量进行了限定，所以建立薄荷药材中薄荷脑的含量测定方法对评价药材质量以及药材的使用有重大意义。
经典的水蒸气蒸馏法往往由于高温可能造成部分成分损失，或改变其组分，使薄荷脑的提取率相对降低。本文采用加热回流法直接从薄荷药材中提取薄荷脑，使用溶剂量和药材量减少，温度低，损失量少，提取率相对提高。
本试验提取方法不能全部提取薄荷药材的薄荷脑，提取出的薄荷脑也不一定全是薄荷药材中原有的，可能是提取过程中转化来的，薄荷脑也有可能在提取过程中转化成了其他成分，具体情况有待研究。
[参考文献]
[1]国家药典委员会.中国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010.
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[4]祝祎玮，怀悦，何翠翠.吴药薄荷挥发油成分的GC-MS分析与薄荷醇含量测定[J].南京中医药大学学报，2011， 27（1）：73-76.
[5]徐玉婷.湖北栽培薄荷挥发油化学成分气相色谱-质谱分析[J].湖北中医药大学学报，2011，13（1）：26-29.
[6]陈在敏.薄荷素油特征图谱的研究及多组分含量测定[J].药物分析杂志，2011，31（10）：1957-1960.
[7]程阔菊，王晖，陈垦.薄荷醇的安全性研究进展[J].辽宁中医杂志，2010，37（2）：377-380.
[8]王二豪，赵怡，郭延垒，等.气相色谱法快速测定含薄荷产品中薄荷脑的含量[J].食品科技，2013，38（1）：318-321.
[9]王成港，王春龙，刘衡，等.气相色谱法测定薄荷油中薄荷脑的含量[J].中草药，2004，35（11）：1252-1253.
[10]江周虹，高向波，王玉梅.GC-MS法测定薄荷油中薄荷脑、L-薄荷酮和胡薄荷酮的含量[J].中药材，2009，32（6）：906-908.
[11]苏越，王呈仲，郭寅龙.基于准确质量测定和保留指数的GC-MS分析薄荷挥发性成分[J].化学学报，2009，67（6）：546-554.
[12]刘东辉，黄月纯，张子龙，等.薄荷饮片挥发油气相色谱指纹图谱研究[J].中国药业，2011，20（4）：28-30.
[13]谢治森.薄荷饮片挥发油气相色谱-质谱联用分析[J].海峡药学，2010，22（12）：82-83.
[14]魏兴国，董岩，崔庆新，等.野生薄荷挥发油化学成分的GC-MS分析[J].烟台师范学院学报（自然科学版），2003， 19（2）：116-118.
[15]颜永刚，郭晓恒，邓翀.云南产野生和栽培薄荷中挥发油的GC-MS比较分析[J].中草药，2011，42（6）：1090-1092.
（收稿日期：2014-03-26本文编辑：郭静娟）
3种方法比较，结果见表1，表明加热回流提取效率最高。
表 1 不同提取方法薄荷脑的含量（n=3）
2.3.2 提取溶剂的考察
取薄荷药材粉末（过二号筛）4 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入三氯甲烷、正己烷、无水乙醇50 ml，称重，85℃回流2 h，冷却，称重，补足减失重量，微孔滤膜过滤，取续滤液进样。结果见表2，表明无水乙醇提取效率最高。
表 2 不同提取溶剂薄荷脑的含量（n=3）
2.3.3 提取时间的考察
取薄荷药材粉末（过二号筛）4 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，共3份，分别精密加入无水乙醇50 ml，称重，于85℃水浴锅中，提取时间分别为1、2、3 h，冷却，称重，补足减失重量，微孔滤膜过滤，取续滤液进样。结果见表3，表明1 h已基本提取完全。
表 3 不同提取时间薄荷脑的含量（n=3）
2.3.4 提取温度的考察
取薄荷药材粉末（过二号筛）4 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入无水乙醇50 ml，共3份，称重，分别于85、90、95℃水浴锅中，回流提取1 h，冷却，称重，补足减失重量，微孔滤膜过滤，取续滤液进样。结果见表4，表明85℃的水浴温度足以提取充分。
表 4 不同提取温度薄荷脑的含量（n=3）
2.3.5 提取溶剂用量的考察
取薄荷药材粉末（过二号筛）4 g，精密称定，共3份，分别精密加入40、50、60 ml的无水乙醇，称重，回流提取1 h，冷却，称重，补足减失重量，微孔滤膜过滤，取续滤液进样。结果见表5，表明不同提取剂量对薄荷药材中薄荷脑的提取效率影响不大。
表5 不同提取溶剂用量薄荷脑的含量（n=3）
综上所述，通过单因素循环法对提取方法、提取溶剂、提取时间、提取温度及提取溶剂用量的考察，确定最佳提取工艺为加10倍的无水乙醇溶液85℃加热回流提取1 h。
2.4 含量测定方法的建立
2.4.1 供试品溶液的制备
取薄荷药材粉末（过二号筛）4 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入40 ml无水乙醇溶剂，称重，85℃加热回流提取1 h，冷却，称重，补足减失重量，微孔滤膜过滤，取续滤液进样。
2.4.2 线性范围
分别精密量取上述薄荷脑对照品溶液0.1、0.15、0.2、0.5、0.75、1 ml，于5 ml容量瓶中，无水乙醇定容，配置成6个不同浓度的对照品溶液，按本文色谱条件测定。以浓度（mg/ml）为横坐标，对照品峰面积为纵坐标，绘制标准曲线得到回归方程：Y=1.0393X+0.0082，r=0.9999（n=6）。
2.4.3 精密度试验
取同一对照品溶液，连续进样6次，记录薄荷脑的峰面积，RSD为0.97%。
2.4.4 稳定性试验
取供试品溶液，分别于0、2、4、6、24 h测定，记录薄荷脑的峰面积，RSD=0.77%，结果表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。
2.4.5 回收率试验
采用加样回收法。取薄荷药材粉末（过二号筛）2 g，精密称定，分别精密加入对照品溶液2.6 ml，共6份。精密加入无水乙醇40 ml，称重85℃加热回流提取1 h，冷却，称重，补足减失重量，微孔滤膜过滤，取续滤液进样。按上述色谱条件测定，平均回收率为99.00%，RSD=1.83%，结果见表6。
表6 薄荷脑含量测定的回收率结果（n=6）
2.4.6 药材的测定
取承德市不同药房的薄荷药材粉末（过二号筛）4 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入40 ml无水乙醇溶液，称重，85℃加热回流提取1 h，冷却，称重，补足减失重量，微孔滤膜过滤，取续滤液进样。结果见表7、图1。
表7 不同药房药材中薄荷脑的含量（n=6）
2.4.7 提取方法的比较
用上述最佳提取方法和水蒸气蒸馏法（2010年版《中国药典》一部）提取挥发油，比较两者中薄荷脑含量大小。结果见表8，表明加热回流法能提取出比传统方法更多的薄荷脑。
表8 不同提取方法薄荷脑的含量（n=2）
3 讨论
本试验用三氯甲烷、正己烷、无水乙醇溶剂提取，无水乙醇提取效率最高，而且无水乙醇价格便宜，无毒，三氯甲烷、正己烷有一定毒性，但是无水乙醇提取出大量的叶绿素，可能会污染柱子，叶绿素的去除方法有待研究。
通过对承德市6个不同药房的薄荷药材中薄荷脑含量测定，结果表明，不同药材中薄荷脑的含量差别很大，其中三家药房的药材中没有薄荷脑，可能药材质量不同，也可能是药材存放不当导致含量损失。《中国药典》2010版一部中只对薄荷中挥发油含量进行了限定，所以建立薄荷药材中薄荷脑的含量测定方法对评价药材质量以及药材的使用有重大意义。
经典的水蒸气蒸馏法往往由于高温可能造成部分成分损失，或改变其组分，使薄荷脑的提取率相对降低。本文采用加热回流法直接从薄荷药材中提取薄荷脑，使用溶剂量和药材量减少，温度低，损失量少，提取率相对提高。
本试验提取方法不能全部提取薄荷药材的薄荷脑，提取出的薄荷脑也不一定全是薄荷药材中原有的，可能是提取过程中转化来的，薄荷脑也有可能在提取过程中转化成了其他成分，具体情况有待研究。
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（收稿日期：2014-03-26本文编辑：郭静娟）
