Caveolin-1促进糖尿病大鼠缺血下肢血管形成的作用及机制Caveolin-1促进糖尿病大鼠缺血下肢血管形成的作用及机制

熊国祚+++++刘辉++++李天平+++++颜亚平+++++申昕++++戴先鹏+++++邓礼明++++毕国善++++++胡兵兵

[摘要] 目的 探讨Caveolin-1对下肢缺血糖尿病大鼠缺血部位血管形成的作用及与AKT信号通路的关系。 方法 健康、雄性SD大鼠，在腹腔注射链脲菌素构建的1型糖尿病大鼠模型上离断左侧股动脉及其分支，建立急性下肢缺血动物模型，14 d后用Western blot检测Caveolin-1、AKT的表达水平；28 d后进行CD34免疫组织化学染色和HE染色，评价血管密度。 结果 缺血组和糖尿病组与假手术组相比，Caveolin-1蛋白的表达水平明显增加（P<0.05）；且缺血组Caveolin-1蛋白含量显著高于糖尿病组（P<0.05）。缺血组、缺血转染组、缺血空转染组的Caveolin-1蛋白、AKT水平均明显高于假手术组（P<0.05）；缺血转染组与缺血组相比，Caveolin-1蛋白、AKT的表达水平明显增多（P<0.05）。与假手术组相比，缺血组、缺血转染组和缺血空转染组的微血管均有一定程度增加，其中缺血转染组的微血管密度增加尤为显著（P<0.05）。 结论 Caveolin-1过表达后对糖尿病大鼠下肢缺血部位的血管形成有明显的促进作用，可能与激活AKT有关。

[关键词] Caveolin-1；糖尿病；下肢缺血

[中图分类号] R587.1[文献标识码] A[文章编号] 1674-4721（2014）06（c）-0004-05

The effects and mechanism of Caveolin-1 on limb ischemia region of diabetic rat

XIONG Guo-zuo1 LIU Hui2 LI Tian-ping3 YAN Ya-ping1 SHEN Xin1 DAI Xian-peng1 DENG Li-ming1 BI Guo-shan1 HU Bing-bing1

1.Department of Vascular Surgery,the Second Affiliated Hospital.University of South China,Hengyang 421001,China;2.Central Hospital of Yiyang City in Hunan Province,Yiyang 413000,China;3.The Institute ofPharmacy & Pharmacology,University of South China,Hengyang 421001,China

[Abstract] Objective To investigate the function of Caveolin-1 on angiogenesis in lower limb ischemia region of diabetic rat and the relationship with AKT signal pathway. Methods Intraperitoneal injection of healthy,male,SD rats with streptozocin to construct type 1 diabetic rat model,then broken the left femoral artery to set up the acute lower limb ischemia animal model.After 14 days with Western blot detection Caveolin-1 and AKT expression.CD34 immunohistochemical staining and HE staining was applied to detect the vascular density in 28 days. Results The level of Caveolin-1 in diabetes group and ischemia group was obviously higher than that in sham group respectively,the level of Caveolin-1 in ischemia group was higher than that in diabetes group,with statistical difference(P<0.05).The level of Caveolin-1 and AKT in ischemia group,ischemic transfection group,ischemic idling transfected group was obviously higher than that in sham group respectively,the level of Caveolin-1 and AKT in ischemic transfection group was obviously higher than that in ischemia group respectively,with statistical difference(P<0.05).Compared with the sham operation group,microvascular had a certain degree increased in ischemia group,ischemia transfection group and ischemic idling transfected group,the microvessel density in the ischemic transfection group increased significantly(P<0.05). Conclusion The higher expression of Caveolin-1 in diabetic lower limb ischemia in rats has obvious promoting effect to its angiogenesis,this effect may be related to activation of AKT.

[Key words] Caveolin-1;Diabetes;Lower limb ischemia

糖尿病已成为严重危害人类健康的慢性疾病，发病率继肿瘤、心脑血管病之后居第三位。下肢血管病变是糖尿病的主要并发症之一，如何重建动脉血流、恢复缺血区域血液供应是治疗糖尿病下肢血管病变的重点，也是临床医生关注的焦点[1]。作为小凹蛋白家族中最重要的成员，Caveolin-1是一种半跨膜的信号转导蛋白，其很可能在糖尿病下肢缺血性疾病中起重要作用[2-3]。Caveolin-1可以通过激活蛋白激酶信号通路来促进血管新生，改善局部缺血情况[4-5]。本研究主要探讨Caveolin-1对糖尿病下肢血管病变大鼠的缺血恢复情况的影响。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物70只SD雄性大鼠，鼠龄10～12周，体重（300±20） g，由本校动物实验部提供。

1.1.2 实验仪器Bio-Rad的蛋白电泳仪及转膜仪（PowerPacTMBasic，美国）；Eppendorf的高速离心机（5804型、5804R型，德国）；天能的全自动化学发光成像系统（Tanon-6200，上海）；Olympus的显微镜与型显微摄像系统（BX51，日本）；Sartorius的电子天平（BSA223S，美国）；海门其林贝尔的脱色摇床（ZD-9550，中国）；Sanyo的-80℃冰箱（日本）。

1.1.3 实验试剂pCDNA3.1（+）Caveolin-1（南华大学药物药理研究所赠）；Mouse anti-β-actin （BM0627，武汉博士得，中国）；Rabbit polyclonal to Caveolin-1（081030，华安，中国）；Goat Anti Rabbit IgG（H+L）（sc-2004，Santa Cruz，美国）；兔抗大鼠CD34单克隆抗体（C2386-12A，USBIO，美国）；兔抗大鼠多克隆抗体AKT（9271L，CST，美国）；DAB显色试剂盒（长沙艾杰，中国）；枸橼酸（天津大茂，中国）；SP-9000 HistonstainTM-Plus Kits免疫组化试剂盒（北京中杉金桥，中国）；青霉素（山东鲁抗，中国）；枸橼酸三钠（天津大茂，中国）；链脲菌素（STZ，Sigma，美国）。

1.2 实验方法

1.2.1 1型糖尿病大鼠模型的建立按照文献[6]准备枸橼酸缓冲液，然后取健康雄性SD大鼠，禁食12 h后，以50 mg/kg STZ的剂量，腹腔注射（STZ用0.1 mol/L新鲜配制枸橼酸缓冲液稀释配置）。3 d后检测所有大鼠的空腹血糖，采用鼠尾采血的方法，连续14 d空腹血糖浓度>16.8 mmol/L，作为1型糖尿病大鼠模型。

1.2.2 急性下肢缺血动物模型的建立实验分为两部分：①正常大鼠随机分为假手术组、缺血组、糖尿病组；②将1型糖尿病大鼠（前面实验所建立）随机分为假手术组、缺血组、缺血Caveolin-1转染组（简称缺血转染组）、缺血空转染组，每组10只，术前均禁食12 h，用10%水合氯醛（3 ml/kg）进行麻醉，然后在大鼠的左侧腹股沟韧带致膝关节间作一纵行切口，分离股动脉，各组均于近心端结扎股动脉（假手术除外），并离断下端及其分支，腹腔注射青霉素[200 000 U/（d·kg）]，持续3 d（图1）。

图1 股动脉离断并结扎手术

A.切开皮肤与皮下组织；B.暴露股动脉；C.离断股动脉分支并结扎；D.离断股动脉并结扎

1.2.3 Caveolin-1质粒转染方法及鉴定取两份相同体积无血清培养基，将提取好的质粒和lipofectamineTM2000（Invitrogen，美国）分别稀释于其中（质量比为1∶3），在室温中静置4 min后将两者混合均匀，并静置20 min。当转染组血糖稳定14 d后，通过尾静脉注入配好的转染试剂；空转染组注射同等剂量不含Caveolin-1质粒的脂质体溶液。14 d后处死一半大鼠并收集腓肠肌肉组织用于Western blot检测各组Caveolin-1的表达，观察其转染情况。

1.2.4 Western blot检测腓肠肌肉组织中Caveolin-1和AKT的表达取-80℃冻存的腓肠肌肌肉组织，提取组织总蛋白，并用BCA法测蛋白浓度；然后将总蛋白样品40 μg与10 μl上样缓冲液混匀后，于100℃沸水中煮10 min使蛋白变性，于-20℃保存备用。电泳分离：用10%聚丙烯凝胶分离蛋白，浓缩电压为70 V，时间约为30 min，分离电压为120 V，时间约为60 min；转膜：350 mA，3 h；5%的脱脂奶粉中37℃封闭1 h；TBST液冲洗15 min×3次后；加入1∶500比例稀释的一抗，4℃孵育过夜；TBST液冲洗15 min×3次后；加入1∶1000比例稀释的二抗，37℃恒温孵育45 min，再用TBST洗膜15 min×4次；显影。

1.2.5 腓肠肌肌肉组织的病理检测术后第28天处死各组余下的大鼠，取左侧腓肠肌肌肉标本，并剥离周围的肌腱和脂肪组织，进行HE染色和CD34蛋白免疫组化[7]实验。所得切片用显微镜摄像，得到不同倍数的照片（40、100、200）。

1.3 统计学处理

采用SPSS 16.0软件对数据进行统计分析，计量资料以x±s表示，采用单因素方差分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3组Western blot检测Caveolin-1表达的比较

正常大鼠的缺血组和糖尿病组与假手术组相比，Caveolin-1蛋白的表达水平明显增加（P<0.05）；且缺血组Caveolin-1蛋白含量显著高于糖尿病组（P<0.05）（图2）。

图2 3组Western blot检测Caveolin-1表达的比较（n=3）

与假手术组比较，*P<0.05

2.2 4组Western blot检测Caveolin-1表达及AKT表达的比较

缺血组、缺血转染组、缺血空转染组的Caveolin-1蛋白水平均明显高于假手术组（P<0.05）；缺血转染组与缺血组相比，Caveolin-1蛋白的表达水平明显增多（P<0.05）（图3）。缺血组、缺血转染组、缺血空转染组的AKT表达水平均明显高于假手术组（P<0.05）；缺血转染组的AKT表达较缺血组明显增多（P<0.05）（图4）。

图3 4组Western blot检测Caveolin-1表达的比较（n=4）

与假手术组比较，*P<0.05、**P<0.05；与缺血组比较，**P<0.05

图4 4组Western blot检测AKT表达的比较（n=4）

与假手术组比较，*P<0.05、**P<0.05；与缺血组比较，**P<0.05

2.3 腓肠肌肌肉组织HE染色观察微血管/肌纤维束的比值（微血管数/肌纤维束数）

术后28 d取各组余下小鼠的左侧腓肠肌肌肉组织进行HE染色，观察肌肉组织中微血管/肌纤维束比值（微血管数/肌纤维束数），与假手术组相比，缺血组、缺血转染组和缺血空转染组腓肠肌肌肉组织中的微血管/肌纤维束比值明显增大（P<0.05）；缺血转染组的微血管/肌纤维束比值显著高于缺血组（P<0.05）；缺血组与缺血空转染组比较差异无统计学意义（P>0.05）（图5、图6）。

图5 各组腓肠肌肌肉组织HE染色（100×）

A.假手术组；B.缺血组；C.缺血转染组；D.缺血空转染组

图6 HE染色检测各组肌肉组织中微血管/肌纤维束比值（n=4）

与假手术组比较，*P<0.05、**P<0.05；与缺血组比较，**P<0.05

2.4 CD34免疫组化染色检测腓肠肌肌肉组织中微血管密度（MVD）

S-P染色法检测各组腓肠肌肌肉组织中CD34的表达情况，缺血组、缺血转染组和缺血空转染组棕褐色颗粒增加，CD34的表达增多，与假手术组相比，差异有统计学意义（P<0.05）；缺血转染组比缺血组增加明显（P<0.05）；缺血组与缺血空转染组比较，差异无统计学意义（P>0.05）（图7、图8）。

图7 CD34免疫组织化学染色观察腓肠肌肉组织内微血管情况（200×）

A.假手术组；B.缺血组；C.缺血转染组；D.缺血空转染组

3 讨论

目前世界各国糖尿病的患病率均呈急剧上升趋势，据报道，到2025年为止全世界糖尿病患者有望超过3亿[8]，由糖尿病周围血管病变引发的糖尿病足溃疡与坏疽，是糖尿病患者致死、致残的重要原因之一[9-10]，因此寻找新的治疗方法，提高患者生活质量和存活率已经迫在眉睫。Caveolin-1是形成小凹的主要蛋白成分，高表达于血管内皮细胞中，其在血管新生中的作用越来越受到人们的重视，但是Caveolin-1在血管形成中的具体功能仍存在较大争议，有文献报道，高糖引起糖尿病血管病变可能与其诱导血管内皮细胞上Caveolin-1的表达有关，在没有合并糖尿病的缺血组织中Caveolin-1具有明显的促血管生成作用[11-13]，可见Caveolin-1在糖尿病患者血管病变过程中的具体作用存在很大争议，还有待进一步考究，推测在高血糖状况下只有Caveolin-1的表达水平达到一定程度才能促进缺血组织中的血管形成。

本实验通过建立糖尿病大鼠下肢急性缺血大鼠模型，在术后用Western blot检测各组腓肠肌肌肉组织中Caveolin-1的表达情况，结果显示，与假手术组相比，缺血组和糖尿病组Caveolin-1蛋白的表达水平显著增加，但糖尿病组Caveolin-1蛋白的表达水平升高没有缺血组明显，提示正常大鼠下肢缺血时腓肠肌肌肉组织能够通过上调Caveolin-1蛋白的表达水平来缓解缺血，但是糖尿病大鼠一旦出现同样的症状，其通过上调Caveolin-1来自我恢复的能力则明显下降，具体分子机制有待进一步讨论。本研究还通过在正常大鼠尾静脉注射转染Caveolin-1来观察其缺血部位的血管形成，HE染色和CD34免疫组织化学染色结果证实，高表达的Caveolin-1可促进缺血部位的血管形成。

AKT又称蛋白激酶B，是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族成员，也是磷脂酰肌醇激酶（PI3K）的下游靶蛋白之一，可参与调节多种生命活动，与其直接磷酸化多种细胞因子密切相关[13]。众多研究证实，通过上调PI3K/AKT通路可使多种重要生长因子发挥促血管生成的生物学功能[6，14-18]。有文献报道，在表皮成纤维细胞中Caveolin-1能增强转录生长因子β诱导的PI3K-AKT信号通路，转染Caveolin-1腺病毒可以促进AKT磷酸化[4]。AKT活化后又可以激活下游的一氧化氮合酶（eNOS）等[19]。Matthews等[20]发现在IGF-1的诱导下，来源于Caveolin-1缺陷小鼠的胚胎成纤维细胞内AKT的磷酸化水平明显低于未缺陷小鼠，因此Caveolin-1可以通过调节AKT/NO的生成而介导血管形成，改善缺血部位的血液供应，那么高浓度的Caveolin-1在糖尿病下肢缺血肌肉组织的促血管生成作用是否也与激活AKT信号通路有关？本研究图3、图4所示，AKT的表达水平与Caveolin-1蛋白水平呈正比，可见Caveolin-1在糖尿病下肢缺血动物模型中对血管生成的促进作用可能与其激活AKT信号通路有关。

综上所述，Caveolin-1在糖尿病大鼠下肢缺血部位过表达时具有促进血管生成的作用，其机制可能与上调AKT蛋白表达有关，这为研究和治疗糖尿病下肢血管病变提供了新的思路和方法。

[参考文献]

[1]Marston WA，Davies SW，Armstrong B，et al.Natural history of limbs with arterial insufficiency and chronic ulceration treated without revascularization[J].J Vasc Surg，2006， 44（1）：108-114.

[2]Catalán V，Gómez-Ambrosi J，Rodríguez A，et al.Expression of caveolin-1 in human adipose tissue is upregulated in obesity and obesity-associated type 2 diabetes mellitus and related to inflammation[J].Clin Endocrinol（Oxf），2008， 68（2）：213-219.

[3]Sonveaux P，Martinive P，DeWever J，et al.Caveolin-1 expression is critical for vascular endothelial growth factor-induced ischemic hindlimb collateralization and nitric oxide-mediated angiogenesis[J].Circ Res，2004，95（2）：154-161.

[4]Kim S，Lee Y，Seo JE，et al.Caveolin-1 increases basal and TGF-beta1-induced expression of type Ⅰ procollagen through PI-3 kinase/Akt/mTOR pathway in human dermal fibroblasts[J].Cell Signal，2008，20（7）：1313-1319.

[5]Distler JH，Hirth A，Kurowska-Stolarsk M，et al.Angiogenie and angiostatic faetors in the molecular control of angiogenesis[J].Q J Nucl Med，2003，47（3）：149-161.

[6]Tuo QH，Zeng H，Stinnett A，et al.Critical role of angiopoietins/Tie-2 in hyperglycemic exacerbation of myocardial infarction and impaired angiogenesis[J].Am J Physiol Heart Circ Physiol，2008，294（6）：H2547-H2557.

[7]黄秀娟，张喜，邓昊，等.免疫组化PV二步法与SP三步法比较[J].数理医药学杂志，2009，22（1）：27-28.

[8]Zheng H，Fu G，Dai T，et al.Migration of endothelial progenitor cells mediated by stromal cell-derived factor-1 alpha/CXCR4 via PI3K/AKT/eNOS signal transduction pathway[J].J Cardiovasc Phamacol，2007，50（3）：274-280.

[9]Adeghate E，Schattner P，Dunn E.An update on the etiology and epidemiology of diabetes mellitus[J].Ann N Y Acad Sci，2006，1084：1-29.

[10]Pinzur MS，Slovenkai MP，Trepman E，et al.Guidelines for diabetic foot care:recommendations endorsed by the diabetes committee of the american orthopaedic foot and ankle society[J].Foot Ankle Int，2005，26（1）：113-119.

[11]桂新春，刘宗汉，刘江华，等.葡萄糖对血管内皮细胞小凹蛋白1和血管内皮生长因子表达的影响[J].中国动脉硬化杂志，2004，12（1）：38-42.

[12]Navarro A，Anand-Apte B，Parat MO.A role for caveolae in cell migration[J].FASEB J，2004，18（15）：1801-1811.

[13]Sheng S，Qiao M，Pardee AB.Metastasis and AKT activation[J].J Cell Physiol，2009，21，8（3）：451-454.

[14]Mehta VB，Besner GE.HB-EGF promotes angiogenesis in endothelial cells via PI3-kinase and MAPK signaling pathways[J].Growth Factors，2007，25（4）：253-263.

[15]Bagli E，Stefaniotou M，Morbidelli L，et al.Luteolin inhibits vascular endothelial growth factor-induced angiogenesis:inhibition of endothelial cell survival and proliferation by targeting phosphatidylinositol 3-kinase activity[J].Cancer Res，2004，64（21）：7936-7946.

[16]张珊珊，罗勇，武磊.PI3K/AKT通路在电针促进局灶脑缺血再灌注大鼠脑内血管再生中的作用[J].第三军医大学学报，2010，32（23）：2488-2491.

[17]Gadau S，Emanueli C，Van Linthout S，et al.Benfotiamine accelerates the healing of ischaemic diabetic limbs in mice through protein kinase B/Akt-mediated potentiation of angiogenesis and inhibition of apoptosis[J].Diabetologia，2006，49（2）：405-420.

[18]Papapetropoulos A，Gareia-Cardena G，Madri JA，et al.Nitric oxide produetion contributes to the angiogenic properties of vaseular endothelial growth feator in human endothelial cells[J].J Clin Invest，1997，100（12）：3131-3139.

[19]Egom EE，Mohamed TM，Mamas MA，et al.Activation of Pak1/Akt/eNOS signaling following sphingosine-1-phosphate release as part of a mechanism protecting cardiomyocytes against ischemic cell injury[J].Am J Physiol Heart Circ Physiol，2011，301（4）：1487-1495.

[20]Matthews LC，Taggart MJ，Westwood M.Modulation of caveolin-1 expression can affect signalling through the phosphatidylinositol 3-kinase/Akt pathway and cellular proliferation in response to insulin-like growth factor 1[J].Endocinology，2008，149（10）：5199-5208.

（收稿日期：2014-03-12本文编辑：李亚聪）

[10]Pinzur MS，Slovenkai MP，Trepman E，et al.Guidelines for diabetic foot care:recommendations endorsed by the diabetes committee of the american orthopaedic foot and ankle society[J].Foot Ankle Int，2005，26（1）：113-119.

[11]桂新春，刘宗汉，刘江华，等.葡萄糖对血管内皮细胞小凹蛋白1和血管内皮生长因子表达的影响[J].中国动脉硬化杂志，2004，12（1）：38-42.

[12]Navarro A，Anand-Apte B，Parat MO.A role for caveolae in cell migration[J].FASEB J，2004，18（15）：1801-1811.

[13]Sheng S，Qiao M，Pardee AB.Metastasis and AKT activation[J].J Cell Physiol，2009，21，8（3）：451-454.

[14]Mehta VB，Besner GE.HB-EGF promotes angiogenesis in endothelial cells via PI3-kinase and MAPK signaling pathways[J].Growth Factors，2007，25（4）：253-263.

[15]Bagli E，Stefaniotou M，Morbidelli L，et al.Luteolin inhibits vascular endothelial growth factor-induced angiogenesis:inhibition of endothelial cell survival and proliferation by targeting phosphatidylinositol 3-kinase activity[J].Cancer Res，2004，64（21）：7936-7946.

[16]张珊珊，罗勇，武磊.PI3K/AKT通路在电针促进局灶脑缺血再灌注大鼠脑内血管再生中的作用[J].第三军医大学学报，2010，32（23）：2488-2491.

[17]Gadau S，Emanueli C，Van Linthout S，et al.Benfotiamine accelerates the healing of ischaemic diabetic limbs in mice through protein kinase B/Akt-mediated potentiation of angiogenesis and inhibition of apoptosis[J].Diabetologia，2006，49（2）：405-420.

[18]Papapetropoulos A，Gareia-Cardena G，Madri JA，et al.Nitric oxide produetion contributes to the angiogenic properties of vaseular endothelial growth feator in human endothelial cells[J].J Clin Invest，1997，100（12）：3131-3139.

[19]Egom EE，Mohamed TM，Mamas MA，et al.Activation of Pak1/Akt/eNOS signaling following sphingosine-1-phosphate release as part of a mechanism protecting cardiomyocytes against ischemic cell injury[J].Am J Physiol Heart Circ Physiol，2011，301（4）：1487-1495.

[20]Matthews LC，Taggart MJ，Westwood M.Modulation of caveolin-1 expression can affect signalling through the phosphatidylinositol 3-kinase/Akt pathway and cellular proliferation in response to insulin-like growth factor 1[J].Endocinology，2008，149（10）：5199-5208.

（收稿日期：2014-03-12本文编辑：李亚聪）

[10]Pinzur MS，Slovenkai MP，Trepman E，et al.Guidelines for diabetic foot care:recommendations endorsed by the diabetes committee of the american orthopaedic foot and ankle society[J].Foot Ankle Int，2005，26（1）：113-119.

[11]桂新春，刘宗汉，刘江华，等.葡萄糖对血管内皮细胞小凹蛋白1和血管内皮生长因子表达的影响[J].中国动脉硬化杂志，2004，12（1）：38-42.

[12]Navarro A，Anand-Apte B，Parat MO.A role for caveolae in cell migration[J].FASEB J，2004，18（15）：1801-1811.

[13]Sheng S，Qiao M，Pardee AB.Metastasis and AKT activation[J].J Cell Physiol，2009，21，8（3）：451-454.

[14]Mehta VB，Besner GE.HB-EGF promotes angiogenesis in endothelial cells via PI3-kinase and MAPK signaling pathways[J].Growth Factors，2007，25（4）：253-263.

[15]Bagli E，Stefaniotou M，Morbidelli L，et al.Luteolin inhibits vascular endothelial growth factor-induced angiogenesis:inhibition of endothelial cell survival and proliferation by targeting phosphatidylinositol 3-kinase activity[J].Cancer Res，2004，64（21）：7936-7946.

[16]张珊珊，罗勇，武磊.PI3K/AKT通路在电针促进局灶脑缺血再灌注大鼠脑内血管再生中的作用[J].第三军医大学学报，2010，32（23）：2488-2491.

[17]Gadau S，Emanueli C，Van Linthout S，et al.Benfotiamine accelerates the healing of ischaemic diabetic limbs in mice through protein kinase B/Akt-mediated potentiation of angiogenesis and inhibition of apoptosis[J].Diabetologia，2006，49（2）：405-420.

[18]Papapetropoulos A，Gareia-Cardena G，Madri JA，et al.Nitric oxide produetion contributes to the angiogenic properties of vaseular endothelial growth feator in human endothelial cells[J].J Clin Invest，1997，100（12）：3131-3139.

[19]Egom EE，Mohamed TM，Mamas MA，et al.Activation of Pak1/Akt/eNOS signaling following sphingosine-1-phosphate release as part of a mechanism protecting cardiomyocytes against ischemic cell injury[J].Am J Physiol Heart Circ Physiol，2011，301（4）：1487-1495.

[20]Matthews LC，Taggart MJ，Westwood M.Modulation of caveolin-1 expression can affect signalling through the phosphatidylinositol 3-kinase/Akt pathway and cellular proliferation in response to insulin-like growth factor 1[J].Endocinology，2008，149（10）：5199-5208.

（收稿日期：2014-03-12本文编辑：李亚聪）