联合检测母血 MMP－9、IL－6预测胎膜早破、亚临床绒毛膜羊膜炎的临床意义

程秋蓉，向 敏，陈民敬，毛 英，张钰华 (.吉首大学第一附属医院妇产科，湖南 吉首 6000;.吉首大学第一附属医院检验科，湖南 吉首 6000;.吉首大学第一附属医院病理科，湖南 吉首 6000;.吉首大学医学院，湖南 吉首6000)

胎膜早破(PROM)为产科常见并发症，其发生的主要原因与炎性反应因素有关，如细菌、真菌、支原体、衣原体等，破膜后，增加上行感染机会，导致绒毛膜羊膜炎、早产、胎儿宫内感染、肺炎、胎儿窘迫、窒息、败血症等。感染与胎膜早破的发生发展互为因果，伴发亚临床绒毛膜羊膜炎时大多数无临床症状，在亚临床感染期间不易被发现，难以在早期诊断，既往利用羊水细菌培养及产后胎盘胎膜病理检查诊断宫内感染，无法在早期诊断，对于指导临床处理意义不大。因此，临床需要寻找用于识别胎膜早破孕妇亚临床感染的检测指标。笔者通过检测胎膜早破孕妇母血、胎膜组织中MMP－9、IL－6的表达水平，探讨其与胎膜早破、亚临床绒毛膜羊膜炎的相关性，探索预测和诊断亚临床绒毛膜羊膜炎的可行性的生物学指标，以选择适宜时机终止妊娠，对于改善母儿预后具有重要意义。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料：选择2010年6月～2012年12月就诊于我科的胎膜早破孕妇42例为试验组，其中早产胎膜早破27例，足月胎膜早破15例，年龄20～41岁，距分娩时间4 h～33 d，孕周26周～40+5周，除有高血压、心脏病、糖尿病、肾炎、肝炎、肿瘤等病史及因双胎、头盆不称、胎位异常、机械性损伤等原因引起的胎膜早破，所有试验组产后胎膜组织均送病理检测，分为绒毛膜羊膜炎组和非绒毛膜羊膜炎组。随机选取同期住院，正常妊娠无胎膜早破的未临产且行剖宫产分娩的妇女30例为对照组，平均妊娠时间(38.5±1.2)孕周，平均年龄(25.8±3.2)岁，胎膜病理检查排除绒毛膜羊膜炎。所有病例取血前均未应用抗生素及保胎药物，均无感染征象。

1.2 研究方法：所选病例入院后取肘静脉血5 ml，室温静置1 h后离心取血清，－20℃冰箱保存待测。采用双抗体夹心ABC－酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测血清MMP－9、IL－6。产后取胎膜破口边缘处胎膜2 cm×2 cm，10%甲醛固定，石蜡包埋切片厚4 μm，HE染色后光镜检查。采用免疫组化法(SP法)检测胎膜组织MMP－9、IL－6的表达，试剂盒均为武汉博士德生物工程有限公司产品。检测时均严格按试剂盒说明操作。

1.3 统计学处理：所有研究数据采用SPSS 13.0统计软件分析，采用t检验，方差分析及多元逐步回归分析。

2 结果

2．1 胎膜早破孕妇血清IL－6、MMP－9水平变化结果表明，胎膜早破孕妇血清IL－6、MMP－9水平明显高于对照组，差异有统计学意义(P＜0.005)，见表1。同时，经多元逐步回归分析，母血中IL－6、MMP－9是反映绒毛膜羊膜炎的主要相关因素。胎膜早破孕妇中绒毛膜羊膜炎组的血清IL－6、MMP－9水平明显高于非绒毛膜羊膜炎组，差异有统计学意义(P＜0.005)，见表 2。

表1 胎膜早破孕妇(试验组)与对照组母血IL－6、MMP－9水平变化(x ± s，pg/ml)

表2 母血IL－6、MMP－9水平变化与绒毛膜羊膜炎的关系(x ± s，pg/ml)

2.2 根据ROC曲线分析，母体血清MMP－9浓度为82.97 pg/ml时，预测绒毛膜羊膜炎的敏感性81%。特异性50%，IL－6浓度为46.38 pg/ml时，预测绒毛膜羊膜炎的敏感性85%，特异性为73%。

2.3 所有研究对象均取胎膜破口边缘处胎膜检测MMP－9、IL－6的表达，MMP－9、IL－6均阳性着色于羊膜上皮细胞的胞浆内(见图1和图2)，试验组MMP－9、IL－6的阳性表达率均明显高于对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)，见表3。胎膜早破组42例胎膜病检，发现组织学绒毛膜羊膜炎26例，镜下见胎膜均有不同程度的水肿、变性，有数量不等的中性粒细胞浸润，个别出现坏死。绒毛膜羊膜炎组MMP－9、IL－6阳性率明显高于非绒毛膜羊膜炎组，有显著差异(P＜0.005)，见表4。

图1 MMP－9的阳性表达

图2 IL－6的阳性表达

表3 胎膜早破孕妇(试验组)与对照组胎膜中IL－6、MMP－9表达结果比较(例)

表4 IL－6、MMP－9在绒毛膜羊膜炎胎膜中的表达水平(例)

3 讨论

3.1 IL－6与胎膜早破、绒毛膜羊膜炎：细胞因子是一组多肽蛋白，主要因感染或免疫反应而激活免疫细胞和间质细胞合成。羊膜腔感染时，细菌及其代谢产物刺激绒毛膜蜕膜细胞发生炎症反应，释放IL－6、IL－8及肿瘤坏死因子等多种细胞因子，可在局部和全身发挥抗感染作用。L－6为炎性细胞因子，对中性粒细胞和免疫细胞具有活化作用，可调节白细胞与内皮细胞的黏附过程，客观地反映宫内感染状况。当妊娠合并绒毛膜羊膜炎时，机体对细菌及其代谢产物产生应答，分泌IL－6直接释放入血、脐血、羊水中。羊水中的IL－6在宫内激活中性粒细胞和弹性蛋白酶，破坏绒毛膜－蜕膜细胞外基质接触面导致胎膜早破。Murtha等发现胎膜早破孕妇血清IL－6水平升高可预测无症状的宫内感染［1］，对于诊断胎膜早破合并宫内感染的敏感性为81%，特异性为99%，阳性预测值为96%，阴性预测值为95%。陆李霓等的研究显示母血IL－6检测早产亚临床感染具有优越性［2］。本研究中胎膜早破组42例，病检发现绒毛膜羊膜炎26例，发生率为61.9%(26/42)，表明宫内感染与胎膜早破密切相关。本研究发现胎膜早破孕妇血清IL－6水平及其在胎膜上的表达均明显高于对照组，差异有统计学意义(P＜0.005)。胎膜早破孕妇中绒毛膜羊膜炎组的血清IL－6水平明显高于非绒毛膜羊膜炎组，差异有统计学意义(P＜0.005)。胎膜早破孕妇母血IL－6预测绒毛膜羊膜炎的敏感度为85%，特异度为73%。

3.2 MMP－9与胎膜早破、绒毛膜羊膜炎：人的胎膜是由羊膜和绒毛膜组成的。胎膜的结构和胶原的含量决定胎膜的弹性和张力。胎膜的成分主要为Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型、Ⅴ型胶原及其他成分如氨基酸聚糖、纤维结合素、弹性蛋白等，而Ⅳ型胶原是羊膜基底膜的主要成分。大量研究显示基质金属蛋白酶(Matrix metallop roteinases，MMPs)是一族能降解细胞外基质(Extracellularmatrix，ECM)中所有蛋白成分的内源性酶，对细胞外基质中相应成分的降解，可调控细胞外基质含量和胎膜结构，引起胎膜组织结构的弱化，而导致胎膜早破的发生［3］。MMP－9是一种锌依赖的蛋白水解酶，以无活性的酶原形式分泌。可在人体蜕膜、绒毛膜和羊膜产生。MMP－9属于Ⅳ型胶原酶，主要降解Ⅳ型胶原、Ⅴ型胶原和弹性硬蛋白。胶原是细胞外基质的主要成分，其分解依赖于胶原酶的作用。MMP－9促进包括Ⅳ型胶原在内的胞外基质的快速崩解引起细胞发生形态学变化和引发凋亡［4］。因此，在PROM中MMP－9起着重要的作用。本研究发现胎膜早破孕妇血清MMP－9水平及其在胎膜上的表达均明显高于对照组，差异有统计学意义(P＜0.005)。胎膜早破孕妇中绒毛膜羊膜炎组的血清MMP－9水平其在胎膜上的表达明显高于非绒毛膜羊膜炎组，差异有统计学意义(P＜0.005)。胎膜早破孕妇母血MMP－9预测绒毛膜羊膜炎的敏感度为81%，特异度为50%。

3.3 IL－6、MMP－9联合检测更有利于早期诊断和预测胎膜早破、合并亚临床绒毛膜羊膜炎：MMP－9和IL－6在PROM的发病机制中起到相互关联作用。感染或炎性反应过程中产生的细胞因子如IL－1，IL－6，IL－8等都能诱导MMPs的合成和活化［5－6］，从而引发胎膜早破。IL－6的升高使得胎膜增厚、水肿，间接影响MMP－9的表达及活性;反之，MMP－9水平的显著升高，通过胎膜结构的变化，诱发IL－6直接进入胎盘。两者相辅相成，促使胎膜早破的发生。本研究发现联合检测母血IL－6、MMP－9预测绒毛膜羊膜炎的敏感度、特异度分别提高为93%，91%，更有利于临床早期诊断和预测胎膜早破、合并亚临床绒毛膜羊膜炎。

［1］ Murtha AP，Greig PC，J immerson CE，et al．Maternal serum inter Leukin－6 concentrations in patientswith prettier premature rupture of membranes and evidence of infection．Am J Obstet Gynecol，1996，175(4)：966．

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