塞来昔布胶囊溶出度测定方法的研究

滕 奇，陈文静 ，王崇益

(江苏正大清江制药有限公司，江苏 淮安 223001)

0 引言

炎症刺激可诱导环氧化酶- 2(COX- 2)生成，因而导致炎性前列腺素类物质的合成和聚积[1]，尤其是前列腺素E2，可引起炎症、水肿和疼痛[2]。塞来昔布是具有独特作用机制的新一代化合物，即特异性抑制环氧化酶- 2，可通过抑制环氧化酶- 2阻止炎性前列腺素类物质的产生，达到抗炎、镇痛及退热作用[3]。塞来昔布由G.D. SEARLE(美国辉瑞Pfizer旗下)研发，于1998年12月获得FDA批准，商品名为Celebrex，国外许多临床试验证明对关节炎有良好的治疗作用, 并可显著减少胃肠道不良反应[4]，无论是对于急性创伤外伤导致的急性疼痛, 还是外科手术后的止痛, 都是理想的镇痛药物[5],也可治疗原发性痛经(PD)。其制剂批准的规格有四种：50mg、100mg、200mg和400mg。2000年8月，国家食品药品监督管理局批准G.D.SEARLE(辉瑞旗下)的塞来昔布胶囊进口，2011年，进口的塞来昔布胶囊年销售额达人民币5亿元。

本品在甲醇、乙醇、丙酮和二甲亚砜中易溶，在水中几乎不溶。目前关于塞来昔布的报道多见于临床研究，也有少部分关于塞来昔布杂质含量检测方面的报道发表[6-7]，然而对塞来昔布胶囊溶出度的研究目前国内尚未见报道。本文通过对塞来昔布胶囊溶出度测定方法的研究，建立一种准确可靠、操作简便的溶出度测定方法，以便更好的控制产品质量。

1 仪器与试药

1.1 仪器

溶出度仪：天大天发806型 液相色谱仪；Perkin Elmer；检测器：Flexar UV/Vis可调波长检测器；溶液输送泵；Flexar四元泵

色谱工作站：TotalChrom；色谱柱；Hedera C-8(5 μm, 4.6×250 mm)

流动相：乙腈-0.5 %三乙胺溶液(用磷酸调节pH 7.0±0.1)(55:45)作为流动相； 柱温：30℃

检测波长：256 nm；进样量；20 μL

1.2 药品与试剂

塞来昔布胶囊(批号120829、120830、120831，江苏正大制药有限公司提供 )；塞来昔布对照品(U.S.Pharmacopeia The Stand of Quality)；水为自制,乙腈为色谱纯(美国天地公司)；三乙胺(广东光华化学厂有限公司)；磷酸为分析纯(美国天地公司)；十二烷基硫酸钠(南京化学试剂有限公司)

2 方法学考察

2.1 系统适用性实验

理论板数以塞来昔布峰计不低于2000，塞来昔布与相邻色谱峰的分离度大于1.5。

2.2 检测波长的选择

本品的水溶液(含0.5%十二烷基硫酸钠)按HPLC法在256 nm的波长处有强紫外吸收。故选择256nm为溶出度的检测波长。

2.3 线性范围

取塞来昔布对照品适量，精密称定，26.23mg置于25mL量瓶中,加流动相溶解并定溶至刻度,分别吸取0.6mL、0.8mL、1.0mL、1.2mL、1.5mL和2.0mL置10mL量瓶中加流动相至刻度。取各浓度的溶液，照HPLC法，分别在256nm波长处测定峰面积，求出回归方程：

Y= 57637371.26X-4487.66 r= 1.0000

线性关系数据见表1，塞来昔布峰面积对浓度线性图如图1所示。

表1 线性关系数据表

图1 塞来昔布线性

实验结果表明,在0.0624mg/mL～0.208mg/mL的质量浓度范围内,峰面积对浓度线性关系良好。

2.4 回收率试验

精密称取处方中主药量的80%、100%、120%和处方中的各辅料适量制成模拟胶囊剂，取模拟胶囊剂细粉适量(约相相当于含塞来昔布160mg、200mg和240mg各3份)，精密称定，分别置1000mL溶出杯中,以溶出介质溶解,过滤，吸取续滤液5mL至10mL量瓶中用流动稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液，另取塞来昔布对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1mL含0.1mg的溶液作为对照品溶液，精密量取20ul注入液相色谱仪，并记录色谱图，计算回收率，结果见表2。

表2 回收率试验结果

由表2中的结果可见，平均回收率为99.5%，RSD为0.39%，表明回收率较好。

2.5 稳定性试验

取本品的溶液，置室温下放置，分别于0、2、4、8、12、24 h测定，峰面积基本不变，表明在24 h内溶液稳定。

3 溶出条件设计

3.1 溶出方法选择

中国药典中规定溶出度的检测方法有转篮法、桨法、小杯桨法，因本品规格为每粒200mg，而舍弃对小杯法的实验研究。对第一法篮法和第二法桨法进行研究和筛选，本品以水(含0.5%十二烷基硫酸钠)为溶出介质，转速50 r/min，照溶出度测定法第一法篮法、第二法桨法进行测定，由测定的结果可知第二法桨法溶出度为91.9%，比第一法篮法溶出量89.6%高，故选用第二法桨法作为本品的溶出方法。

3.2 溶剂的选择

分别以水、0.1mol/L的盐酸溶液、pH6.8的磷酸盐缓冲液中添加十二烷基硫酸钠(浓度分别为0.1% 0.5%、1.0%)HPLC法测定，不同溶剂在同一转速(50 r/min)下的溶出结果见表3。

实验结果表明，胶囊在0.5%十二烷基硫酸钠的稀盐酸溶液和0.5%十二烷基硫酸钠的pH6.8磷酸盐缓冲溶液溶液中溶出不完全，在0.5%、1%十二烷基硫酸钠的水溶液中溶出较完全，故可选用0.5%十二烷基硫酸钠的水溶液。

3.3 转速的选择

取本品以0.5%十二烷基硫酸钠的水溶液为溶剂，分别以50、100 r/min进行实验，结果表明，本品在转速50 r/min、100 r/min溶出相同。从节约能耗和仪器磨损角度出发，故采用转速50 r/min作为本品的溶出度测定转速。

3.4 溶出时间

取本品三批及原研样品，分别照溶出度测定法第二法，以含0.5%十二烷基硫酸钠的水溶液1000mL为溶出介质，转速为每分钟50转，依法操作，分别于5、15、30、45、60分钟时取溶液8mL(同时补充等量溶出介质)滤过，分别精密量取续滤液适量，用溶出介质稀释成每1mL中约含0.1mg的溶液，作为供试品溶液，HPLC法，在256nm波长处分别测定。另取塞来昔布对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1mL含0.1mg的溶液作为对照品溶液，同法测定，计算每粒在不同时间的溶出量，根据时间与溶出量绘制溶出曲线。由表3可见，当取样时间在45 分钟时本样品及原研样品的溶出量均在85%以上。根据原标准中取样时间的规定并考虑到大生产的条件，故本品的取样时间定为45分钟，本品的溶出量限度定为标示量的75%。

表3 溶出介质的筛选

3.5 空白辅料及胶囊壳的干扰性试验

按照处方配比称取除主药外的其他附加剂适量，以含0.5%十二烷基硫酸钠的水溶液1000mL为溶剂，照HPLC法，结果测得，附加剂在256nm处无吸收，表明附加剂对测定无干扰。

3.6 实验结论

取本品适量，照溶出度测定法第二法桨法，以含0.5%十二烷基硫酸钠的水溶液1000mL溶出介质，转速为每分钟50转，依法操作，经45分钟时，取样，滤过，分别精密量取续滤液适量，用流动相稀释成每1mL中约含0.1mg的溶液，作为供试品溶液，照HPLC法，在256nm波长处分别测定。另取塞来昔布对照品，精密称取适量用流动相溶解并稀释制成1mL约含0.1mg的溶液，作为对照品溶液，同法测定，计算每粒在不同时间的溶出量。使用上述方法，操作简便快速、精密度较高、测定结果准确、稳定性良好。

4 结论

在吸取溶出液时应用0.45 μm的滤膜进行过滤,可消除不溶辅料对测定结果的影响。

按照缓释、控释和迟释制剂指导原则规定，释放介质以脱气的新鲜纯化水为常用释放介质，或根据药物的溶解特性、处方特性、吸收部位，使用稀盐酸(0.001～0.1mol/L)或pH3～8的磷酸盐缓冲液，对难溶性药物不宜采用有机溶剂，可加入少量表面活性剂。因为本品在水中极微溶，所以加入适量助溶剂十二烷基硫酸钠溶液助溶。在实验过程中，通过对不同pH值的条件下，不同浓度十二烷基硫酸钠溶液，溶出介质的对比筛选，在发现0.5%十二烷基硫酸钠的稀盐酸溶液；0.5%十二烷基硫酸钠的pH6.8磷酸盐缓冲溶中，溶出不完全，而在0.5%、1%十二烷基硫酸钠的水溶液中溶出较完全，故选用0.5%十二烷基硫酸钠的水溶液作为塞来昔布的溶出介质。

参考文献：

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[4] 黄建林，吴玉琼，潘云峰.塞来昔布治疗类风湿关节炎和骨关节炎有效性和安全性的临床研究[J].中国药物与临床，2004,12(4):934-938.

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