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HPLC法同时测定偏瘫口服液中阿魏酸与丹酚酸B的含量

2014-09-08

中国民族民间医药 2014年1期
关键词:酚酸口服液波长

广西壮族自治区柳州食品药品检验所,广西 柳州 545006

HPLC法同时测定偏瘫口服液中阿魏酸与丹酚酸B的含量

蒋秋香吴柳春韦永朴

广西壮族自治区柳州食品药品检验所,广西 柳州 545006

目的利用双波长高效液相色谱法,建立偏瘫口服液中阿魏酸、丹酚酸B的含量测定方法。方法采用双波长HPLC法,Waters SunFire C18(4.6mm(250mm,5μm)色谱柱,柱温35℃;甲醇-0.1%磷酸溶液为流动相,以1.0mL·min-1流速梯度洗脱;阿魏酸检测波长为318nm、丹酚酸B检测波长为286nm。结果:根据回归方程,阿魏酸和丹酚酸B的线性范围分别为6.152~76.9μg(r=0.9998)、294.8~3685.0μg(r=1.0000);加样回收率分别为99.7%(n=6)、 98.2%(n=6)。结论:本方法操作简单,结果准确,重复性好,可有效地提高该制剂的内在质量,也为该药品标准进一步研究,提供一个准确的参考方法。

HPLC;梯度洗脱法;偏瘫口服液;阿魏酸;丹酚酸B

偏瘫口服液由地龙、丹参、红花、川芎、王不留行和甘草六味中药组成,具有活血、驱风通络的作用,是广西柳州市中医院用于治疗偏瘫的常用院内制剂。现行质量标准比较简单,仅检查药品性状、鉴别、相对密度及pH值等,无含量测定项目。方中丹参和川芎属活血化瘀药,丹参具有活血祛瘀,养血安神,凉血消肿的功效[1],现代药理研究其具有抗血栓、改善微循环、促进组织的修复与再生等作用[2];川芎具有活血行气、祛风止痛的功效[1],现代药理研究其具有扩张血管、抗血栓、改善微循环等作用[3]。为此,以方中丹参有效成分丹酚酸B、川芎有效成分阿魏酸为指标成分,针对其不同的化学结构,首次采用多波长高效液相色谱法,同时检测阿魏酸、丹酚酸B的含量。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Waters 2695型高效液相色谱仪,2487型紫外检测器,Empower Pro工作站(Waters公司);UV-2450紫外分光光度计(日本岛津公司);METTLER XS205电子分析天平(瑞士梅特勒公司)。

1.2 试药 对照品阿魏酸(批号:110773-200611)、丹酚酸B(批号:110861-200808)购自中国药品生物制品检定所。甲醇为色谱纯,水为超纯水,其他试剂均为分析纯。偏瘫口服液样品3批(规格为10ml/瓶,批号20101129;20101223;20110228),由广西柳州市中医院制剂室提供,阴性样品按偏瘫口服液处方比例自配。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:Waters SunFire C18(4.6 mm(250 mm,5 μm),柱温35℃;以甲醇(A)和0.1%磷酸溶液(B)为流动相,梯度洗脱。0~22min甲醇的比例为30%;22~25min甲醇的比例为30%~40%;25~53min甲醇的比例为40%。流速1.0ml·min-1;阿魏酸检、丹酚酸B检测波长为分别318nm(0~30min)、286nm(30~53min);进样量为10μl。按上述实验条件进行测定,结果理论板数以2种指标成分(阿魏酸、丹酚酸B)计均不低于5000,且2种成分都能达到基线分离,分离度大于1.5。

2.2 溶液的制备

2.2.1 混合对照品溶液制备 分别取对照品阿魏酸、丹酚酸B适量,精密称定,加甲醇制成含阿魏酸0.003mg·ml-1、丹酚酸B 0.15mg·ml-1的混合溶液,即得。

2.2.2 供试品溶液 取偏瘫口服液样品过0.45μm微孔滤膜,取续滤液,即得。

2.2.3 阴性供试品溶液 取缺川芎的阴性样品和缺丹参的阴性样品,分别过0.45μm微孔滤膜,取续滤液,即得。

2.3 专属性试验 分别取混合对照品溶液、供试品溶液及阴性供试品溶液各10μl,按上述色谱条件进样,液相色谱图见图1。阴性样品在阿魏酸、丹酚酸B的色谱峰位置上无吸收,表明该方法的专属性良好。

2.4 线性关系考察 分别精密吸取“2.2.1”项下混合对照品溶液2、5、10、15、20、25μL进样分析,记录峰面积。以峰面积Y对进样量X(μg)进行线性回归,求得阿魏酸和丹酚酸B标准曲线的回归方程、相关系数,结果见表1。

表1 阿魏酸和丹酚酸B的回归方程、相关系数和线性范围

2.5 精密度试验 精密吸取混合对照品溶液,连续进样6次,每次10μl,以阿魏酸、丹酚酸B峰面积计,RSD分别为0.9%,1.5%。表明该方法精密度良好。

2.6 稳定性试验 取同一供试品溶液,室温下分别于0、2、8、12、20、24h进样测定,考察阿魏酸、丹酚酸B在室温下的溶液稳定性,记录色谱图,以峰面积进行计算,结果RSD分别为1.0%、2.2%。表明供试品溶液室温放置24h内保持稳定。

2.7 重复性试验 取同一样品各6份,分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,进样10μl,测定。结果样品中阿魏酸和丹酚酸B平均含量(n=6)分别为2.635μg·ml-1,128.8μg·ml-1;RSD分别为1.2%,1.5%。表明该方法重复性良好。

2.8 回收率试验 精密吸取“2.7”项下已知阿魏酸、丹酚酸B含量的样品5ml共6份,分别精密加入“2.2.1项下的对照品混合溶液(阿魏酸3.076μg·ml-1、丹酚酸B147.4μg·ml-1)5ml,按“2.2.2”项下方法操作,制备供试溶液,测定,计算回收率。结果阿魏酸和丹酚酸B的平均回收率(n=6)分别为99.7%(RSD=1.6%),98.2%(RSD=0.9%)。

2.9 样品含量测定 分别取3个批号的偏瘫口服液样品,按“2.2.2”项下制备供试品溶液。精密吸取供试品溶液及混合对照品溶液各10μl,注入液相色谱仪,进行测定,按外标法计算含量,结果见表2。

表2 偏瘫口服液中阿魏酸和丹酚酸B的含量(μg·ml-1)

4 讨论

4.1 检测波长的选择 经紫外分光光度计扫描波长,阿魏酸、丹酚酸B分别在318nm、286nm处有最大吸收,与2010年版中国药典一部川芎(阿魏酸)、丹参(丹酚酸B)的含量测定检测波长分别为321nm、286nm相符合。在试验中选择同时兼顾到2个被测成分在某单一波长下检测,结果大大降低了被测成分的检测灵敏度,甚至造成被测成分未检出的后果。故本文采用多波长测定法,分别在各被测成分紫外最大吸收波长处同时进行含量检测。这样既提高了检测灵敏度,又为测定结果准确可靠提供保障。

4.2 流动相的选择 参考中国药典及文献资料[4-5],综合几种流动相方法分析,得出本实验流动相条件。结果表明采用本实验所采用的梯度洗脱方法,能较好的分离有效成分,且分离时间短,峰形好。

4.3 供试品溶液的制备 样品无需任何前处理,直接过滤膜即可进样分析。既操作简便,利于生产厂家半成品及成品快速检测,又消除了分析环节的一大误差因素。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M]:2010年版一部.北京:中国医药科技出版社,2010.

[2] 罗彩莲.丹参的药理作用与临床应用[J].中国当代医药,2012,19(12):11-12.

[3] 裴艳霞.川芎的药理作用及临床应用[J].中国医药指南,2011,9(34):197-198.

[4] 刘建明,郭咏梅,周娟丽.HPLC法测定新生化颗粒中阿魏酸的含量[J].宜春学院学报,2012,3(4):111-112.

[5] 于晶晶,徐飞鹤.RP-HPLC同时测定香丹注射液中丹参素钠、原儿茶醛和丹酚酸B的含量[J].海峡药学,2012,2(2):45-47.

HPLCwithdual-wavelengthsimultaneousdeterminationoftwoeffectiveingredientsinPiantanoralliquidbygradientelution

JIANG Qiu-xiang WU Liu-chun Wei Yong-pu

Guangxi Liuzhou Institate for Food and Drug Control,Liuzhou 545006,China

To establish an HPLC with dual-wavelength detection method for simultaneous determination of Ferulic acid and Salvianolic acid B in Piantan oral liquid.MethodsThe quantitative analysis was carried out on a column of Waters SunFire C18(4.6 mm×250 mm,5 μm) by HPLC with dual-wavelength , by a gradient elution using methanol(A) and water(B) as mobile phase at a flow rate of 1.0 mL·min-1at 35 ℃;The eluate was detected by multiple wavelength: 318 nm for Ferulic acid (0~30min),286 nm for Salvianolic acid B (30~50 min).ResultsThe linear ranges of Ferulic acid and Salvianolic acid B fell within the ranges of 6.152~76.9μg(r=0.9998) and 294.8~3685.0μg(r=1.0000); The average recoveries were 99.7%(n=6) for Ferulic acid and 98.2%( n=6) for Salvianolic acid B.ConclusionThis method is simple, accurate, reliable and can be use to improve inner quality,also provides a reference standard for the quality control of Piantan oral liquid.

Piantan oral liquid; Ferulic acid; Salvianolic acid B

蒋秋香(1983-) 女,汉族,广西全州人 ,主管中药师,主要从事药品、食品、化妆品、保健食品的检验和标准研究。E-mail:67370082@QQ.com

R284.1

A

1007-8517(2014)01-0007-03

2013.11.15)

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