NEU-P11对脓毒症大鼠心肌损伤的保护作用研究

黄靓 Moshe Laudon

南华大学1. 心血管疾病研究所；2. 外科学总论教研室 湖南 衡阳，421001

3．Drug Discovery，Neurim Pharmaceuticals lad，Tel-Aviv，Israel

NEU-P11对脓毒症大鼠心肌损伤的保护作用研究

黄靓1,2杨璐2朱梦霞2王汉群2Moshe Laudon3尹卫东1

南华大学1. 心血管疾病研究所；2. 外科学总论教研室 湖南 衡阳，421001

3．Drug Discovery，Neurim Pharmaceuticals lad，Tel-Aviv，Israel

目的： 研究NEU-P11对脓毒症大鼠心肌的保护作用，并探讨其作用机制。方法30只SPF级雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组) 、脓毒症模型组(CLP组)和Neu-p11处理组，每组10只。采用盲肠结扎穿刺法制作脓毒症大鼠模型。术后6h收集血清，取心肌，检测血清中LDH、CK的活性，检测心肌组织中MDA、SOD的含量。结果NEU-P11处理可明显改善脓毒症大鼠的心肌损伤，减少血清中LDH、CK 的释放和心肌组织中MDA的产生，增加心肌组织中SOD的含量。结论NEU-P11对脓毒症大鼠心肌有显著的保护作用，可能与其能减少血清中LDH、CK 的释放和心肌组织中MDA的产生，增加心肌组织中SOD的含量有关。

NEU-P11；脓毒症；心肌损伤

脓毒症是指由感染引起的全身炎症反应，脓毒症、严重脓毒症、脓毒性休克、多脏器功能不全是本疾病发展的连续过程。心功能障碍是严重脓毒症的常见并发症。近10 年来统计数据显示，脓毒症患者中40%～50%可发生心肌抑制，7% 发生心力衰竭。NEU-P11是一种新型的非选择性的褪黑素受体MTI/MT2激动剂，它具有改善睡眠、调节糖脂代谢以及清除自由基等作用，本研究拟采用盲肠结扎穿刺法( cecal ligation puncture ,CLP) 制备大鼠脓毒症模型, 观察NEU-P11对脓毒症大鼠的心脏保护效应及探讨其作用机制。

1 材料与方法

1.1 动物模型制备及分组

体重250-300g的SPF级雄性SD大鼠30只，由南华大学实验动物学部提供，随机分为3组：假手术组(Sham组)、脓毒症组(CLP组)、NEU-P11组，每组15 只。采用盲肠结扎穿刺法制备脓毒症模型：大鼠在标准饲养条件下适应1周，腹腔注射20%的乌拉坦麻醉大鼠，消毒腹壁皮肤后，取腹壁正中切口2 cm。拉出盲肠，在盲肠血管弓内距盲肠盲端1～1. 5 cm 处结扎，避免损伤血管。用18号针头于盲肠盲端对合穿孔3次。轻轻挤压结扎的盲肠，挤出少量粪便内容物。观察肠段无活动性出血后将盲肠还纳入腹腔，逐层关闭腹腔，术后立即皮下注射生理盐水。Sham组除不行盲肠结扎穿刺外,其余操作同CLP 组。NEU-P11组则术前7天每天腹腔注射浓度为15mg/kg的NEU-P11，其余操作同CLP组。

1.2 血清中LDH、CK 的测定

术后 6 h 以浓度 7%水合氯醛溶液麻醉大鼠。腹主动脉采血 2 mL，置入 5 mL规格的消毒 EP 管中，4℃冰箱放置凝固后，以 8000 g 离心 5 min，取上层血清，-20℃保存备用。标本收集后用生化试剂盒测定LDH、CK的活性(南京建成生物医学工程研究所)。

1.3 心肌组织中MDA、SOD含量测定

取下心脏，制备成心肌组织匀浆，用黄嘌呤氧化酶法测定心肌中过氧化物歧化酶( SOD) 活性, 用硫代巴比妥酸盐法测定心肌中丙二醛( MDA) 含量。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 Neu-p11对血清中LDH和CK活性的影响

与Sham组相比，CLP组血清中LDH和CK活性明显增高 (P<0.05)，Neu-p11组可显著降低LDH、CK活性(P<0.05)，见表1。

表1 各组血清中LDH和CK活性的变化

2.2 Neu-p11对心肌中MDA和SOD含量的影响

与Sham组相比，CLP组心肌组织中MDA含量显著增高，SOD 含量显著下降(P<0.05)，Neu-p11组可降低心肌MDA，增加心肌SOD含量(P<0.05)，见表2。

表2 各组心肌中MDA和SOD含量的变化

3 讨论

随着社会的快速发展以及免疫抑制药物的使用和耐药菌的出现,脓毒症的发病率以每年1.5%的速度增长,成为危重病人主要的死亡原因之一。尽管对于脓毒症的研究投入了大量的人力、物力和财力,包括采用抗炎制剂的临床治疗,但收效甚微。心肌损伤是脓毒症常见的并发症,也是影响脓毒症转归的重要因素，临床上表现为心律失常、低血压和心力衰竭，可进一步加重其他器官功能进一步损害。据统计,脓毒症合并心功能障碍使脓毒症死亡率由不合并心功能的20%增长到70%-90%，因此,针对脓毒症心肌损伤的发病机制开展深入研究及早期防治,对提高脓毒症的救治水平具有重要意义[1]。

LDH、CK 是目前常用的心肌损害有关酶学检查，它们广泛存在于细胞浆内，故心肌细胞损伤时，二者进入血液中，活性升高，因此，血清中CK 和LDH 的量与心肌损伤和坏死程度呈正相关[2]。本研究通过大鼠脓毒症模型研究 NEU-P11对大鼠心肌细胞的保护作用。结果显示，CLP组的 LDH 和 CK 水平明显高于假手术组，而NEU-P11组的 LDH 和 CK 水平明显低于CLP组，差异有统计学意义，以上结果表明，提示脓毒症大鼠心肌组织受到了损害，NEU-P11能够明显减轻脓毒症引起的心肌组织的损伤。

MDA 是细胞内发生脂质过氧化反应的终产物，是反映体内氧化应激反应的重要指标之一，其含量多少可反映细胞膜脂质过氧化的程度，可间接反映细胞损伤程度。SOD 是广泛存在于需氧物体内的一种金属酶，能催化超氧阴离子自由产生歧化反应，是体内最为重要的自由基清除剂[3]。本实验结果显示，在大鼠脓毒症模型上，CLP组大鼠心肌组织中MDA含量增高，SOD含量降低，而NEU-P11治疗组能明显升高心肌中SOD,降低MDA的含量，提示NEU-P11可通过提高心肌组织抗氧化能力，保护心肌细胞膜，进而保护受损的心肌。

综上所述，NEU-P11对脓毒症大鼠的心肌损伤有明显的保护作用，其机制可能是通过激活抗氧化酶，提高SOD 的含量，减少过多氧自由基对组织的损伤，最终表现出对心肌损伤的保护作用，但其作用的起始点及环节有待于进一步研究。

[1]彭娜. 乌司他丁对脓毒症心肌损伤的保护作用及机理探讨 [D]. 广东: 南方医科大学, 2010.

[2]董六一，邵 旭，江勤，等. 牡荆素对大鼠实验性心肌缺血损伤的保护作用及其机制 [J].中草药，2011,42(7)：1378-1383.

[3]冯毅，马亚飞，张林波，等. 葛根素预处理对缺血再灌注心肌脂质过氧化与内质网应激的影响 [J].中国医学创新，2014,11(8)：11-12.

2013年衡阳市科学技术发展计划项目 2013KJ10

R332

B

1009-6019(2014)08-0131-02