高效液相色谱-蒸发散射检测器法测定中药钩藤中钩藤碱的含量

麦海燕 曲彩红 江先合

高效液相色谱-蒸发散射检测器法测定中药钩藤中钩藤碱的含量

麦海燕 曲彩红 江先合

目的 探究利用高效液相色谱-蒸发散射检测器法测定中药钩藤中钩藤碱的含量的效果。方法 选择15 g钩藤药粉, 将其分为两份, 对照组进行高效液相色谱-紫外检测器检测, 实验组进行高效液相色谱-蒸发散射检测器检测, 观察两组方法检测的准确率和所需时间。结果 以精密钩藤碱样品的含量为“金标准”, 发现高效液相色谱-蒸发散射检测器检测可以更加准确地判定中药钩藤中钩藤碱的含量情况(P＜0.05)。同时实验组检测的天数少于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 高效液相色谱-蒸发散射检测器检测的方法更有利于对中药钩藤中钩藤碱的测定, 值得临床进一步研究。

高效液相色谱-蒸发散射检测器法；钩藤；钩藤碱；含量

钩藤属于藤本植物, 又名大钩丁。茎枝呈圆柱形或类方形, 有细纵纹。节上有向下弯曲的单钩和双钩, 钩下有托叶痕。而钩藤碱则是从钩藤的带钩枝条中取出的一种生物碱。钩藤碱具有降低血管阻力、抑制外周血扩散的作用, 在治疗高血压等疾病方面有显著效果。钩藤碱对人类带来了极大的好处, 因此, 作者通过对比高效液相色谱-蒸发散射检测器检测和高效液相色谱-紫外检测器检测法来为进一步精确测定中药钩藤中钩藤碱的含量提供合理的依据［1］。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 此次试验所需要的仪器有：高效液相色谱系统、配蒸发散射和紫外两种检测器。选用4.6 mm×200.0 mm, 5 μm的Dikma DiamonsilC18的色谱柱。精确度为0.01的电子天平、离心机、多用途漩涡混合器和超纯水系统。对照品：钩藤碱对照品。由南昌贝塔生物科技有限公司提供, 产品批号为10172-080117,乙腈、甲醇均为色谱纯；醋酸铵由天津市化工研究所提供。钩藤干药材统一产自湖南。

1.2 方法 首先制备对照溶液。精密称取5.0 g钩藤碱对照品, 置于10 ml容量瓶中, 用无水甲醇定容浓度为0.5 mg/ml,作为对照液, 经0.45 μm微孔滤膜过滤。取续滤液为储备液。然后处理钩藤药材, 将钩藤药材进行粉碎, 准确量取15 g粉末, 将其分为两份。分别加入50 ml甲醇混匀, 置于4℃冰箱中冷浸12 h,然后分别超声30 min, 均定容于100 ml容量瓶内。最后分别经过0.22 μm微孔过滤膜过滤［2］。然后对两组药品进行含量检测。

实验组样品采用高效液相色谱-蒸发散射检测器法测定。流动相：乙腈联合0.01 mol/L的醋酸铵；采用梯度法洗脱, 乙腈在20 min内比例由20:80递增至40:60；流速为1.0 ml/min；柱温为30℃；进样量为20 μl。蒸发散射检测器参数：飘逸管温度为105℃。载气流速3.0 ml/min, 放大倍数为2；分流器关闭。对照组采用高效液相色谱-紫外检测器法测定。流动相：甲醇联合0.01 mol/L的磷酸二氢钾溶液；采用梯度法洗脱, 乙腈在40 min内比例由30:70递增至40:60, 41 min乙腈比例恢复30:70；流速为1.0 ml/min；柱温为30℃；进样量为20μl。对比两组药品检测所需的时间。同时与对照样品进行比较, 观察两组样品测得含量的准确率。

1.3 统计学方法 采用SPSS13.0软件进行数据处理, 计量资料以均数±标准差( x-±s)表示, 采用t检验, 计数资料以率(%)表示, 采用χ2检验,以P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

所有样品在形态、大小等方面差异无统计学意义(P＞0.05)。以钩藤碱对照品作为“金标准”, 实验组即采用高效液相色谱-蒸发散射检测器法测定的样品含量准确率为97.4%。对照组即采用高效液相色谱-紫外检测器检测定的样品含量准确率为66.7%, 两组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。详见表1。并且两组患者检验花费的时间差异也有统计学意义(P＜0.05)。详见表2。

表1 两种方法准确率、灵敏度、特异性的比较(n, %)

表2 两种方法所需要的时间比较( x-±s)

3 讨论

钩藤分布于我国陕西、湖南等地。《本草图经》中写道：钩藤, 《神农本草经》不载所出州土。苏恭云出梁州, 今兴元府亦有之。叶细茎长, 节间有刺若钓钩。三月采。葛洪治小儿方多用之。又《广济》及《崔氏方》疗小儿惊癎诸汤钦,皆用吊藤皮。

中药钩藤中的钩藤碱对降血压有较好的作用。此生物碱无论对麻醉动物或不麻醉动物, 正常动物或高血压动物, 也不论静脉滴注或灌胃给药均有降压作用［3］, 且无快速耐受现象。钩藤碱能抑制双侧颈总动脉所致的加压反射, 对乙酰胆碱的降压作用不明显, 但能显著抑制甚至阻断电刺激迷走神经高中端所致的血压下降, 不能对抗肾上腺素、去甲肾上腺素的苯丙胺的升压作用, 却能明显增强肾上腺素和去甲肾上腺素的升压作用。并能使离体兔耳血管扩张, 似有对外周血管的直接作用。认为钩藤碱产生降压作用的原理主要是直接和反射性地抑制了血管运动中枢以及阻滞交感神经和神经节, 使外周血管扩张, 阻力降低所致。其直接扩张血管的作用比较强。同时钩藤碱对平滑肌还有一定的影响, 可以抑制肠带的收缩。因此, 钩藤碱是一种对治疗高血压等疾病很有用的药物成分。

高效液相色谱-蒸发散射检测器法是一种新型的测定中药钩藤中钩藤碱的方法, 随着技术的精益求精和完善, 越来越广泛的应用于医药、化工、食品等领域。此方法通过先进的自动分析仪器, 通过响应因子只与物性有关及与梯度洗脱相容等特点, 能够使钩藤碱与药材中其他成分分离较好, 达到准确的测量。此方法符合速度快、成本低的优点。由于此方法运用先进的仪器设备, 还没有广泛应用, 因此需要大量的人员对先进设备进行学习培训。同时, 由于是机器检测,准确性也会更加精确。

本次研究中以钩藤碱对照品作为“金标准”, 实验组即采用高效液相色谱-蒸发散射检测器法测定的样品含量准确率为97.4%。对照组即采用高效液相色谱-紫外检测器检测定的样品含量准确率为66.7%, 两组差异有统计学意义(P＜0.05)。并且两组患者检验花费的时间也具有明显差异。通过对中药钩藤中钩藤碱的含量测定, 使医护人员对药材的情况得到更加深入的了解, 同时方便对此种生物碱的利用［4］。因此可以看出, 高效液相色谱-蒸发散射检测器法更有利于测定中药钩藤中钩藤碱的含量。

在目前来说, 高效液相色谱-蒸发散射检测器法和高效液相色谱-紫外检测器发两种方法均是测定钩藤碱含量的有效手段, 但是高效液相色谱-蒸发散射检测法操作方便、测得的结果更加精确精确, 所得结果是一项很有意义的指标,有很大的参考价值［5］。因此广泛推广高效液相色谱-蒸发散射检测器方法测定中药钩藤中钩藤碱将是下一步研究的重点。

［1］ 胡岚岚, 汤建林, 徐颖, 等.HPLC_ELSD法测定中药钩藤中钩藤碱的含量.重庆医学, 2013, 42(10):1089-1091.

［2］ 吴卫, 周娜, 刘梅.HPLC法测定钩藤提取物中钩藤碱的含量.安徽农业科学, 2012, 40(11): 6442-6443.

［3］ 周吉银, 周世文, 汤建林.含钩藤中药复方制剂中钩藤碱含量测定方法研究进展.西北药学杂志, 2013, 28(4):434-435.

［4］ 刘清华, 葛尔宁.RP_HPLC法测定钩藤煎剂中钩藤碱含量及变化.浙江中医药大学学报, 2010, 34(2): 270-271.

［5］ 王晓颖, 刘永静, 陈丹, 等.HPLC法测定不同产地钩藤中钩藤碱的含量分析.中国中医药科技, 2011, 18(3):215-217.

2014-04-17］

510630 中山大学附属第三医院药学部