清开灵滴丸中栀子苷的HPLC含量测定研究

2014-09-04胡亚男

中国实用医药 2014年2期

胡亚男

胡亚男

目的建立清开灵滴丸中栀子苷的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法(HPLC)对清开灵滴丸中栀子苷进行了含量测定实验研究。结果栀子苷线性范围为0.05936～0.8904 μg，回归方程为y=1.50×106x+4.80×103,R2=1.000；平均回收率为97.93%(RSD=2.36%)。同时测定了七批供试品中栀子苷的含量。结论本方法可作为清开灵滴丸中栀子苷含量测定的一种准确、灵敏、可行的方法。

清开灵滴丸；栀子；栀子苷；高效液相色谱法

清开灵滴丸由胆酸、珍珠母、猪去氧胆酸、栀子、水牛角、板蓝根、黄芩苷、金银花等八味中药组成。具有清热解毒，镇静安神的功效。方中栀子为茜草科植物栀子(Gardenia jasminoides Ellis)的干燥成熟果实，收载于《中国药典》2005年版一部[1]。栀子具有凉血止血、清热解毒、泻热利湿等功效。据文献报导，其主要活性成分为栀子苷。参照《中国药典》2005年版一部[1]及相关文献[2-4]项下方法，建立高效液相色谱法测定其含量。方法学试验证明，该方法结果满意、灵敏、准确、重现性好。可作为该药内在质量的监控指标。

1 仪器与试药

1.1 仪器日本岛津LC-2010高效液相色谱仪、日本岛津LC-20A 高效液相色谱仪、日本岛津UV-2450紫外-可见分光光度计、SartoriusME5百万分之一电子天平、METTLER AE240十万分之一天平、METTLER AE100万分之一天平、超声波清洗仪、资生堂CAPCELL PAK-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5μm)。

1.2 试药与试剂栀子苷对照品(批号：110749-200512，供含量测定用)：由中国药品生物制品检定所提供。样品：由江苏正大清江制药有限公司(批号： 080216)、内蒙古包头中药厂(批号： 070519、 070520、070521)、海南赛立克药业有限公司(批号：080103、080201、080202)提供。乙腈为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均为分析纯。

2 试验条件的选择

2.1 提取时间的选择以甲醇为提取溶剂，分别考察了超声提取20、30、40 min三种方法对含量的影响，结果如下：20 min，取药量2.0234 g，含量1.659 mg/g;30 min,取药量2.0155 g，含量1.726 mg/g; 40 min,取药量2.0327 g，含量1.728 mg/g。试验结果表明，超声20 min提取含量较低，而超声30 min和40 min提取结果基本一致，所以选用超声30 min提取法。

2.2 色谱条件的选择

2.2.1 流动相的选择参照《中国药典》2005年版一部“栀子”含量测定项下，以乙腈-水(10 ∶ 90)、(12 ∶ 88)、(15 ∶ 85)为流动相，进行试验。试验结果表明，以乙腈-水(12 ∶ 88)为流动相，可使栀子苷与其他成分达到基线分离，且峰形较好，故选择该流动相。

2.2.2 检测波长的选择取栀子苷对照品溶液在190～300 nm波长范围内进行光谱扫描，结果栀子苷在238.64 nm处有最大吸收，参照《中国药典》2005年版一部“栀子”项下【含量测定】项下规定，确定测定波长为238 nm。

2.3 溶液的配制对照品溶液的配制: 取栀子苷对照品适量，精密称定，置100 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1 ml含栀子苷30 μg)。供试品溶液的配制: 取本品150丸，研碎，取2 g，精密称定，精密加入甲醇50 ml，称定重量，超声处理30 min(功率250 W，频率40 Hz),放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀即得。阴性空白溶液的配制: 取栀子空白对照品，同供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液，即得。

3 方法与结果

3.1 色谱条件与系统适用性试验资生堂CAPCELL PAK-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；检测波长238 nm；流动相：乙腈-水(12∶88)；流速：1.0 ml/min；柱温：30℃；进样量：10 μl；理论板数按栀子苷峰计算应≥1500。

3.2 空白干扰试验取阴性空白对照溶液，在上述色谱条件下测定，结果阴性对照品色谱图中，在与栀子苷对照品色谱图相对应的保留时间处无色谱峰出现，表明处方中其它药味所含组分对栀子苷的测定无干扰。

3.3 线性关系考察精密称取栀子苷对照品2.968 mg，置100 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密吸取2 μl、5 μl、10 μl、15 μl、25 μl、30 μl，分别注入液相色谱仪，测定峰面积值。以峰面积积分值对进样量进行回归分析，结果栀子苷在0.05936～0.8904 μg范围内呈良好的线性关系，回归方程为y=1.50×106x+4.80×103,R2=1.000。标准曲线测定结果如下：进样量0.05936 μg，峰面积积分值89764；进样量0.1484 μg，峰面积积分值226917；进样量0.2968 μg，峰面积积分值453003；进样量0.4452 μg，峰面积积分值679068；进样量0.7420 μg，峰面积积分值1116751；进样量0.8904 μg，峰面积积分值1339570。

3.4 精密度试验精密吸取按拟定的方法制备的供试品溶液(批号：070521)10 μl,重复进样6次，测定供试品中栀子苷峰面积积分值。结果如下：各组的峰面积分值分别为：1135152、1119011、1113402、1122785、1146711、1136928，结果RSD(%)为1.11%。试验结果表明，精密度良好。

3.5 稳定性试验取同一批号样品(批号：070521)，按拟定的方法制备供试品溶液，精密吸取10 μl，分别在0 h、3 h、6 h、9 h、12 h进样，测定供试品中栀子苷的峰面积积分值。结果如下：0 h进样，峰面积积分分值分别为1107034；3 h进样，峰面积积分分值分别为1077805；6 h进样，峰面积积分分值分别为1113762；9 h进样，峰面积积分分值分别为1112106；12 h进样，峰面积积分分值分别为1124646，结果RSD(%)为1.58%。试验结果表明，精密度良好。试验结果表明，供试品溶液中栀子苷在12 h内稳定性良好。

3.6 重现性试验取同一批号样品(批号：070521)，分别按上述供试品溶液的配制方法制备6份样品溶液，测得峰面积积分值并计算含量，平均含量=1.713 mg/g，RSD=1.78%。结果：重现性试验良好。

3.7 加样回收试验采用加样回收法，精密称取已知栀子苷含量的样品(批号:070521)6份，精密称取1 g，分别加入1 ml(14.15 mg/10 ml)栀子苷对照品溶液，按【样品含量测定】项下方法操作并测定每份的含量，计算回收率，结果：平均回收率=97.93%，RSD=2.36%。试验结果表明，回收率在95%～105%之间，RSD为2.36%，准确度较好。

3.8 样品含量测定测定法精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10 μl，分别注入高效液相色谱仪，测定，即得。样品的含量测定结果见表1。