正交试验筛选平田头菇菌丝体液体培养基

刘西周　郭成金

摘要：采用正交试验对平田头菇菌丝体液体培养基进行筛选。结果表明，平田头菇菌丝体液体培养基最佳配方是25 g/L葡萄糖、250 g/L马铃薯（浸提液）、40 g/L麦麸（浸提液）、4 g/L蛋白胨、5 g/L KH2PO4、2.5 g/L MgSO4·7H2O、16 mg/L 维生素B1，pH值自然，28 ℃静置培养 10 d，其菌丝体生物量（干质量）可达13.52 g/L。

关键词：平田头菇；液体培养基；菌丝体；生物量；正交分析

中图分类号： S646.104+.3 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2014）07-0261-02

收稿日期：2013-10-17

作者简介：刘西周（1984—），男， 甘肃陇南人，硕士，助理实验师，研究方向为蕈菌设施化栽培与植物组织培养。

通信作者：郭成金，教授，研究方向为蕈菌与植物细胞营养生理。E-mail：chengjin6866@163.com。平田头菇[Agrocybe pediades（Fr.）Fayod]属粪伞科（Bolbitiaceae）田蘑属（Agrocybe），因具有独特的风味、丰富的营养及特殊的抑肿瘤等药用价值，受到越来越多的关注[1-2]。平田头菇主要分布在芦苇湿地等区域，但近些年由于湿地面积不断萎缩，环境受到严重破坏，野生菌种资源数量急剧下降。目前对平田头菇的研究鲜见报道，未见其液体培养基筛选相关研究。本研究通过对平田头菇菌丝体液体培养基筛选，旨在为其人工驯化等进一步研究开发提供支持。

1材料与方法

1.1供试菌种

平田头菇子实体采自天津市七里海湿地，菌种保藏于天津师范大学蕈菌研究所。

1.2培养基

1.2.1PDA综合培养基[3]200 g/L马铃薯，200 g/L棉籽皮，18 g/L琼脂，20 g/L葡萄糖，3 g/L KH2PO4，1.5 g/L MgSO4，4 mg/L维生素B1，pH值自然。

1.2.2碳源初选培养基及其配制方法碳源初选培养基：分别以15 g/L葡萄糖、15 g/L蔗糖、15 g/L甘露醇、15 g/L麦芽糖、200 g/L马铃薯（浸提液）、20 g/L玉米渣（浸提液）为供试碳源，加入3 g/L蛋白胨、3 g/L KH2PO4、1.5 g/L MgSO4·7H2O、微量维生素B1，pH值自然，配制碳源初选培养基，分装于100 mL锥形瓶中，每瓶50 mL，每个处理3次重复，加纱布通气塞后，0.12 MPa灭菌20 min，备用。

1.2.3氮源初选培养基及其配制方法氮源初选培养基：分别以3 g/L蛋白胨、3 g/L酵母粉、30 g/L麦麸（浸提液）、3 g/L 硝酸铵、 3 g/L硝酸钾、3 g/L氯化铵为供试氮源，加入20 g/L葡萄糖、3 g/L KH2PO4 、1.5 g/L MgSO4·7H2O，pH值自然，分装于100 mL锥形瓶，每瓶50 mL，每个处理3次重复，加纱布通气塞后，0.12 MPa灭菌20 min，备用[4]。

1.3试验方法

1.3.1菌丝体培养及其称重提前4 d将菌种活化。无菌条件下挑取强壮菌丝体前端，接于平板培养基上，28 ℃培养 4～5 d 备用。

从菌落边缘挑取直径0.8 cm均匀大小的菌种圆块，接种于对应的液体培养基，每瓶3块，28 ℃静置2 d，摇瓶 5 min/d。

将滤纸编号、称重，恒温培养10 d后将培养产物抽滤，于80 ℃烘干至恒重并称重，2次质量差值为菌丝体生物量（干质量）。

1.3.2碳源、氮源培养基正交试验根据碳源、氮源初选培养基筛选试验结果，从中各选出2个最适合的碳源和氮源，按L9（34）设计4 因素3 水平正交试验进行复选，与3 g/L KH2PO4、1.5 g/L MgSO4·7H2O、4 mg/L 维生素B1组成9个试验配方，正交因素与水平设计见表1。

3结论

研究表明，平田头菇培养基最佳配方是25 g/L葡萄糖、250 g/L马铃薯（浸提液）、40 g/L麦麸（浸提液）、4 g/L蛋白胨、5 g/L KH2PO4、2.5 g/L MgSO4·7H2O、16 mg/L 维生素B1，pH值自然，28 ℃静置培养 10 d，其菌丝体生物量（干重）可达13.52 g/L。本研究为平田头菇人工驯化等进一步研究奠定了基础。

参考文献：

[1]戴玉成，杨祝良. 中国药用真菌名录及部分名称的修订[J]. 菌物学报，2008，27（6）：801-824.

[2]周会明，柴红梅，赵永昌. 田头菇属真菌研究进展[J]. 中国食用菌，2009，28（6）：3-8.

[3]郭成金. 蕈菌生物学[M]. 天津：天津科学技术出版社，2005：159.

[4]刘西周，郭成金.采 用L9（34）正交设计方法筛选血耳菌丝体液体培养基[J]. 中国食用菌，2009，28（1）：36-38.

[5]邢来君，李明春. 普通真菌学[M]. 北京：高等教育出版社，1999：50-58.

[6]李春喜. 生物统计学[M]. 北京：科学出版社，1997：263-265.

[7]王振河，万学东，武忠伟，等. 正交设计优化裂褶菌发酵全液多糖提取工艺[J]. 中国野生植物资源，2007，26（4）：50-51，56.

[8]王战勇，张建东，李莹，等. 北虫草液体培养基的研究[J]. 辽宁石油化工大学学报，2004，24（1）：19-21，25.

[9]陈文强，邓百万，陈永刚，等. 用L9（34）正交试验筛选裂褶菌液体培养基[J]. 食品与生物技术学报，2005，24（4）：38-41.endprint

摘要：采用正交试验对平田头菇菌丝体液体培养基进行筛选。结果表明，平田头菇菌丝体液体培养基最佳配方是25 g/L葡萄糖、250 g/L马铃薯（浸提液）、40 g/L麦麸（浸提液）、4 g/L蛋白胨、5 g/L KH2PO4、2.5 g/L MgSO4·7H2O、16 mg/L 维生素B1，pH值自然，28 ℃静置培养 10 d，其菌丝体生物量（干质量）可达13.52 g/L。

关键词：平田头菇；液体培养基；菌丝体；生物量；正交分析

中图分类号： S646.104+.3 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2014）07-0261-02

收稿日期：2013-10-17

作者简介：刘西周（1984—），男， 甘肃陇南人，硕士，助理实验师，研究方向为蕈菌设施化栽培与植物组织培养。

通信作者：郭成金，教授，研究方向为蕈菌与植物细胞营养生理。E-mail：chengjin6866@163.com。平田头菇[Agrocybe pediades（Fr.）Fayod]属粪伞科（Bolbitiaceae）田蘑属（Agrocybe），因具有独特的风味、丰富的营养及特殊的抑肿瘤等药用价值，受到越来越多的关注[1-2]。平田头菇主要分布在芦苇湿地等区域，但近些年由于湿地面积不断萎缩，环境受到严重破坏，野生菌种资源数量急剧下降。目前对平田头菇的研究鲜见报道，未见其液体培养基筛选相关研究。本研究通过对平田头菇菌丝体液体培养基筛选，旨在为其人工驯化等进一步研究开发提供支持。

1材料与方法

1.1供试菌种

平田头菇子实体采自天津市七里海湿地，菌种保藏于天津师范大学蕈菌研究所。

1.2培养基

1.2.1PDA综合培养基[3]200 g/L马铃薯，200 g/L棉籽皮，18 g/L琼脂，20 g/L葡萄糖，3 g/L KH2PO4，1.5 g/L MgSO4，4 mg/L维生素B1，pH值自然。

1.2.2碳源初选培养基及其配制方法碳源初选培养基：分别以15 g/L葡萄糖、15 g/L蔗糖、15 g/L甘露醇、15 g/L麦芽糖、200 g/L马铃薯（浸提液）、20 g/L玉米渣（浸提液）为供试碳源，加入3 g/L蛋白胨、3 g/L KH2PO4、1.5 g/L MgSO4·7H2O、微量维生素B1，pH值自然，配制碳源初选培养基，分装于100 mL锥形瓶中，每瓶50 mL，每个处理3次重复，加纱布通气塞后，0.12 MPa灭菌20 min，备用。

1.2.3氮源初选培养基及其配制方法氮源初选培养基：分别以3 g/L蛋白胨、3 g/L酵母粉、30 g/L麦麸（浸提液）、3 g/L 硝酸铵、 3 g/L硝酸钾、3 g/L氯化铵为供试氮源，加入20 g/L葡萄糖、3 g/L KH2PO4 、1.5 g/L MgSO4·7H2O，pH值自然，分装于100 mL锥形瓶，每瓶50 mL，每个处理3次重复，加纱布通气塞后，0.12 MPa灭菌20 min，备用[4]。

1.3试验方法

1.3.1菌丝体培养及其称重提前4 d将菌种活化。无菌条件下挑取强壮菌丝体前端，接于平板培养基上，28 ℃培养 4～5 d 备用。

从菌落边缘挑取直径0.8 cm均匀大小的菌种圆块，接种于对应的液体培养基，每瓶3块，28 ℃静置2 d，摇瓶 5 min/d。

将滤纸编号、称重，恒温培养10 d后将培养产物抽滤，于80 ℃烘干至恒重并称重，2次质量差值为菌丝体生物量（干质量）。

1.3.2碳源、氮源培养基正交试验根据碳源、氮源初选培养基筛选试验结果，从中各选出2个最适合的碳源和氮源，按L9（34）设计4 因素3 水平正交试验进行复选，与3 g/L KH2PO4、1.5 g/L MgSO4·7H2O、4 mg/L 维生素B1组成9个试验配方，正交因素与水平设计见表1。

3结论

研究表明，平田头菇培养基最佳配方是25 g/L葡萄糖、250 g/L马铃薯（浸提液）、40 g/L麦麸（浸提液）、4 g/L蛋白胨、5 g/L KH2PO4、2.5 g/L MgSO4·7H2O、16 mg/L 维生素B1，pH值自然，28 ℃静置培养 10 d，其菌丝体生物量（干重）可达13.52 g/L。本研究为平田头菇人工驯化等进一步研究奠定了基础。

参考文献：

[1]戴玉成，杨祝良. 中国药用真菌名录及部分名称的修订[J]. 菌物学报，2008，27（6）：801-824.

[2]周会明，柴红梅，赵永昌. 田头菇属真菌研究进展[J]. 中国食用菌，2009，28（6）：3-8.

[3]郭成金. 蕈菌生物学[M]. 天津：天津科学技术出版社，2005：159.

[4]刘西周，郭成金.采 用L9（34）正交设计方法筛选血耳菌丝体液体培养基[J]. 中国食用菌，2009，28（1）：36-38.

[5]邢来君，李明春. 普通真菌学[M]. 北京：高等教育出版社，1999：50-58.

[6]李春喜. 生物统计学[M]. 北京：科学出版社，1997：263-265.

[7]王振河，万学东，武忠伟，等. 正交设计优化裂褶菌发酵全液多糖提取工艺[J]. 中国野生植物资源，2007，26（4）：50-51，56.

[8]王战勇，张建东，李莹，等. 北虫草液体培养基的研究[J]. 辽宁石油化工大学学报，2004，24（1）：19-21，25.

[9]陈文强，邓百万，陈永刚，等. 用L9（34）正交试验筛选裂褶菌液体培养基[J]. 食品与生物技术学报，2005，24（4）：38-41.endprint

摘要：采用正交试验对平田头菇菌丝体液体培养基进行筛选。结果表明，平田头菇菌丝体液体培养基最佳配方是25 g/L葡萄糖、250 g/L马铃薯（浸提液）、40 g/L麦麸（浸提液）、4 g/L蛋白胨、5 g/L KH2PO4、2.5 g/L MgSO4·7H2O、16 mg/L 维生素B1，pH值自然，28 ℃静置培养 10 d，其菌丝体生物量（干质量）可达13.52 g/L。

关键词：平田头菇；液体培养基；菌丝体；生物量；正交分析

中图分类号： S646.104+.3 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2014）07-0261-02

收稿日期：2013-10-17

作者简介：刘西周（1984—），男， 甘肃陇南人，硕士，助理实验师，研究方向为蕈菌设施化栽培与植物组织培养。

通信作者：郭成金，教授，研究方向为蕈菌与植物细胞营养生理。E-mail：chengjin6866@163.com。平田头菇[Agrocybe pediades（Fr.）Fayod]属粪伞科（Bolbitiaceae）田蘑属（Agrocybe），因具有独特的风味、丰富的营养及特殊的抑肿瘤等药用价值，受到越来越多的关注[1-2]。平田头菇主要分布在芦苇湿地等区域，但近些年由于湿地面积不断萎缩，环境受到严重破坏，野生菌种资源数量急剧下降。目前对平田头菇的研究鲜见报道，未见其液体培养基筛选相关研究。本研究通过对平田头菇菌丝体液体培养基筛选，旨在为其人工驯化等进一步研究开发提供支持。

1材料与方法

1.1供试菌种

平田头菇子实体采自天津市七里海湿地，菌种保藏于天津师范大学蕈菌研究所。

1.2培养基

1.2.1PDA综合培养基[3]200 g/L马铃薯，200 g/L棉籽皮，18 g/L琼脂，20 g/L葡萄糖，3 g/L KH2PO4，1.5 g/L MgSO4，4 mg/L维生素B1，pH值自然。

1.2.2碳源初选培养基及其配制方法碳源初选培养基：分别以15 g/L葡萄糖、15 g/L蔗糖、15 g/L甘露醇、15 g/L麦芽糖、200 g/L马铃薯（浸提液）、20 g/L玉米渣（浸提液）为供试碳源，加入3 g/L蛋白胨、3 g/L KH2PO4、1.5 g/L MgSO4·7H2O、微量维生素B1，pH值自然，配制碳源初选培养基，分装于100 mL锥形瓶中，每瓶50 mL，每个处理3次重复，加纱布通气塞后，0.12 MPa灭菌20 min，备用。

1.2.3氮源初选培养基及其配制方法氮源初选培养基：分别以3 g/L蛋白胨、3 g/L酵母粉、30 g/L麦麸（浸提液）、3 g/L 硝酸铵、 3 g/L硝酸钾、3 g/L氯化铵为供试氮源，加入20 g/L葡萄糖、3 g/L KH2PO4 、1.5 g/L MgSO4·7H2O，pH值自然，分装于100 mL锥形瓶，每瓶50 mL，每个处理3次重复，加纱布通气塞后，0.12 MPa灭菌20 min，备用[4]。

1.3试验方法

1.3.1菌丝体培养及其称重提前4 d将菌种活化。无菌条件下挑取强壮菌丝体前端，接于平板培养基上，28 ℃培养 4～5 d 备用。

从菌落边缘挑取直径0.8 cm均匀大小的菌种圆块，接种于对应的液体培养基，每瓶3块，28 ℃静置2 d，摇瓶 5 min/d。

将滤纸编号、称重，恒温培养10 d后将培养产物抽滤，于80 ℃烘干至恒重并称重，2次质量差值为菌丝体生物量（干质量）。

1.3.2碳源、氮源培养基正交试验根据碳源、氮源初选培养基筛选试验结果，从中各选出2个最适合的碳源和氮源，按L9（34）设计4 因素3 水平正交试验进行复选，与3 g/L KH2PO4、1.5 g/L MgSO4·7H2O、4 mg/L 维生素B1组成9个试验配方，正交因素与水平设计见表1。

3结论

研究表明，平田头菇培养基最佳配方是25 g/L葡萄糖、250 g/L马铃薯（浸提液）、40 g/L麦麸（浸提液）、4 g/L蛋白胨、5 g/L KH2PO4、2.5 g/L MgSO4·7H2O、16 mg/L 维生素B1，pH值自然，28 ℃静置培养 10 d，其菌丝体生物量（干重）可达13.52 g/L。本研究为平田头菇人工驯化等进一步研究奠定了基础。

参考文献：

[1]戴玉成，杨祝良. 中国药用真菌名录及部分名称的修订[J]. 菌物学报，2008，27（6）：801-824.

[2]周会明，柴红梅，赵永昌. 田头菇属真菌研究进展[J]. 中国食用菌，2009，28（6）：3-8.

[3]郭成金. 蕈菌生物学[M]. 天津：天津科学技术出版社，2005：159.

[4]刘西周，郭成金.采 用L9（34）正交设计方法筛选血耳菌丝体液体培养基[J]. 中国食用菌，2009，28（1）：36-38.

[5]邢来君，李明春. 普通真菌学[M]. 北京：高等教育出版社，1999：50-58.

[6]李春喜. 生物统计学[M]. 北京：科学出版社，1997：263-265.

[7]王振河，万学东，武忠伟，等. 正交设计优化裂褶菌发酵全液多糖提取工艺[J]. 中国野生植物资源，2007，26（4）：50-51，56.

[8]王战勇，张建东，李莹，等. 北虫草液体培养基的研究[J]. 辽宁石油化工大学学报，2004，24（1）：19-21，25.

[9]陈文强，邓百万，陈永刚，等. 用L9（34）正交试验筛选裂褶菌液体培养基[J]. 食品与生物技术学报，2005，24（4）：38-41.endprint