口蹄疫基因工程疫苗研究进展

宋昌霖

摘要：口蹄疫是感染偶蹄动物的急性、热性、高度接触性传染病，预防的该病的首要方式为疫苗接种。传统口蹄疫疫苗存在长期带毒、毒力返强等不安全因素，因此新型疫苗的研制迫在眉睫。就新型口蹄疫疫苗的研究进展进行了综述。

关键词：口蹄疫；新型疫苗；构建；效力

中图分类号：S851.3文献标识码：B文章编号：1007-273X（2014）05-0073-01

口蹄疫（Foot and mouth disease，FMD）是猪、牛、羊等主要家畜和其他家养、野生偶蹄动物共患的一种急性、热性、高度接触性传染病，曾多次在世界范围内暴发流行，造成巨大政治、经济损失。鉴于此，世界动物卫生组织（OIE）将其列为A类传染病之首。疫苗接种是预防口蹄疫的重要手段，安全、高效的疫苗是预防口蹄疫发生先决条件。传统口蹄疫疫苗多为灭活疫苗和弱毒疫苗，但此类疫苗由于面临长期带毒、毒性较大、产生抗体缓慢和毒力返强等不安全因素，国内外研究者致力于研究新型疫苗以解决传统口蹄疫所产生的问题。本文就新型口蹄疫苗研究进展作详细阐述。

1活载体疫苗

口蹄疫活载体疫苗是利用基因杂交技术将FMDV的主要抗原基因插入某种缺陷病毒的基因组中构建而成的重组病毒，该重组病毒能在动物细胞内表达FMDV抗原蛋白，刺激机体产生免疫反应。如腺病毒、痘病毒以及由痘病毒衍生而来的非复制型载体[1]。因为口蹄疫病毒是通过呼吸道感染的，而且容易形成持续感染，所以研制黏膜免疫疫苗也是重点，例如沙门氏菌、分枝结核杆菌作载体的活载体疫苗。活载体疫苗是近年口蹄疫新型疫苗研究的热点之一。

1.1口蹄疫重组腺病毒载体疫苗

贾俊涛等[2]等究选择O型FMDV VPI基因上保守序列作为可能的干扰位点，合成了siRNA，重组表达载体pShuttle-VPl。将rAdeno-VPl感染IBRS-2细胞后，12 h后再加入100 TCID50的FMDVO/HKN/2003。结果显示，重组腺病毒能够抑制FMDV的复制。卢曾军分别构建了FMDV O、A型P1-2A和3C编码区基因重组腺病毒，O/Ad5-P12X3C免疫豚鼠后获得较好的保护性免疫反应，免疫猪28d后用同型的FMDV攻击，免疫猪的保护率为75%。

1.2口蹄疫重组痘病毒载体疫苗

金明兰等[4]对FMDV衣壳蛋白前体P1-2A和蛋白酶3C基因重组痘病毒在豚鼠、仔猪体内的毒性、分布及抗体消长规律进行了研究，结果表明，FMD重组鸡痘病毒免疫的动物在整个试验期间，未表现出明显的临床症状和不良反应，病理组织切片检测无明显的组织学变化；PCR、RT—PCR检测各主要脏器内检测到FPV DNA和FMDV DNA，且在大部分组织能存在3 d左右；FMD重组鸡痘病毒均可诱导免疫动物产生较高水平的抗FMDV特异性抗体和中和抗体。Ma等[5]用鸡痘病毒作载体构建了表达FMDV P1-2A、3C和IL-18基因的重组疫苗，进一步证明了该重组疫苗的免疫效果。在攻毒试验中，免疫猪保护率可达到80%。

1.3口蹄疫重组沙门氏菌载体疫苗

刘明秋等[6]将口蹄疫病毒疫苗基因的真核表达质粒pB01电转化到减毒的猪霍乱沙门菌C3500中，构建成抗O型口蹄疫病毒的重组活菌苗pB01/S.cho.血清凝集实验显示即具有免疫原性.采用口服方式免疫家兔，检测重组菌在家兔体内诱导的免疫应答。

2合成肽疫苗

口蹄疫合成肽肽疫苗是利用化学合成法人工根据抗原表位的氨基酸序列合成抗原决定簇的小肽，再链接到大分子载体，并加入佐剂制成的疫苗。合成的小肽由多个B细胞和T细胞抗原表位决定，具有高纯度和稳定的特性。我国已研制出了猪用O型口蹄疫合成

摘要：口蹄疫是感染偶蹄动物的急性、热性、高度接触性传染病，预防的该病的首要方式为疫苗接种。传统口蹄疫疫苗存在长期带毒、毒力返强等不安全因素，因此新型疫苗的研制迫在眉睫。就新型口蹄疫疫苗的研究进展进行了综述。

关键词：口蹄疫；新型疫苗；构建；效力

中图分类号：S851.3文献标识码：B文章编号：1007-273X（2014）05-0073-01

口蹄疫（Foot and mouth disease，FMD）是猪、牛、羊等主要家畜和其他家养、野生偶蹄动物共患的一种急性、热性、高度接触性传染病，曾多次在世界范围内暴发流行，造成巨大政治、经济损失。鉴于此，世界动物卫生组织（OIE）将其列为A类传染病之首。疫苗接种是预防口蹄疫的重要手段，安全、高效的疫苗是预防口蹄疫发生先决条件。传统口蹄疫疫苗多为灭活疫苗和弱毒疫苗，但此类疫苗由于面临长期带毒、毒性较大、产生抗体缓慢和毒力返强等不安全因素，国内外研究者致力于研究新型疫苗以解决传统口蹄疫所产生的问题。本文就新型口蹄疫苗研究进展作详细阐述。

1活载体疫苗

口蹄疫活载体疫苗是利用基因杂交技术将FMDV的主要抗原基因插入某种缺陷病毒的基因组中构建而成的重组病毒，该重组病毒能在动物细胞内表达FMDV抗原蛋白，刺激机体产生免疫反应。如腺病毒、痘病毒以及由痘病毒衍生而来的非复制型载体[1]。因为口蹄疫病毒是通过呼吸道感染的，而且容易形成持续感染，所以研制黏膜免疫疫苗也是重点，例如沙门氏菌、分枝结核杆菌作载体的活载体疫苗。活载体疫苗是近年口蹄疫新型疫苗研究的热点之一。

1.1口蹄疫重组腺病毒载体疫苗

贾俊涛等[2]等究选择O型FMDV VPI基因上保守序列作为可能的干扰位点，合成了siRNA，重组表达载体pShuttle-VPl。将rAdeno-VPl感染IBRS-2细胞后，12 h后再加入100 TCID50的FMDVO/HKN/2003。结果显示，重组腺病毒能够抑制FMDV的复制。卢曾军分别构建了FMDV O、A型P1-2A和3C编码区基因重组腺病毒，O/Ad5-P12X3C免疫豚鼠后获得较好的保护性免疫反应，免疫猪28d后用同型的FMDV攻击，免疫猪的保护率为75%。

1.2口蹄疫重组痘病毒载体疫苗

金明兰等[4]对FMDV衣壳蛋白前体P1-2A和蛋白酶3C基因重组痘病毒在豚鼠、仔猪体内的毒性、分布及抗体消长规律进行了研究，结果表明，FMD重组鸡痘病毒免疫的动物在整个试验期间，未表现出明显的临床症状和不良反应，病理组织切片检测无明显的组织学变化；PCR、RT—PCR检测各主要脏器内检测到FPV DNA和FMDV DNA，且在大部分组织能存在3 d左右；FMD重组鸡痘病毒均可诱导免疫动物产生较高水平的抗FMDV特异性抗体和中和抗体。Ma等[5]用鸡痘病毒作载体构建了表达FMDV P1-2A、3C和IL-18基因的重组疫苗，进一步证明了该重组疫苗的免疫效果。在攻毒试验中，免疫猪保护率可达到80%。

1.3口蹄疫重组沙门氏菌载体疫苗

刘明秋等[6]将口蹄疫病毒疫苗基因的真核表达质粒pB01电转化到减毒的猪霍乱沙门菌C3500中，构建成抗O型口蹄疫病毒的重组活菌苗pB01/S.cho.血清凝集实验显示即具有免疫原性.采用口服方式免疫家兔，检测重组菌在家兔体内诱导的免疫应答。

2合成肽疫苗

口蹄疫合成肽肽疫苗是利用化学合成法人工根据抗原表位的氨基酸序列合成抗原决定簇的小肽，再链接到大分子载体，并加入佐剂制成的疫苗。合成的小肽由多个B细胞和T细胞抗原表位决定，具有高纯度和稳定的特性。我国已研制出了猪用O型口蹄疫合成

摘要：口蹄疫是感染偶蹄动物的急性、热性、高度接触性传染病，预防的该病的首要方式为疫苗接种。传统口蹄疫疫苗存在长期带毒、毒力返强等不安全因素，因此新型疫苗的研制迫在眉睫。就新型口蹄疫疫苗的研究进展进行了综述。

关键词：口蹄疫；新型疫苗；构建；效力

中图分类号：S851.3文献标识码：B文章编号：1007-273X（2014）05-0073-01

口蹄疫（Foot and mouth disease，FMD）是猪、牛、羊等主要家畜和其他家养、野生偶蹄动物共患的一种急性、热性、高度接触性传染病，曾多次在世界范围内暴发流行，造成巨大政治、经济损失。鉴于此，世界动物卫生组织（OIE）将其列为A类传染病之首。疫苗接种是预防口蹄疫的重要手段，安全、高效的疫苗是预防口蹄疫发生先决条件。传统口蹄疫疫苗多为灭活疫苗和弱毒疫苗，但此类疫苗由于面临长期带毒、毒性较大、产生抗体缓慢和毒力返强等不安全因素，国内外研究者致力于研究新型疫苗以解决传统口蹄疫所产生的问题。本文就新型口蹄疫苗研究进展作详细阐述。

1活载体疫苗

口蹄疫活载体疫苗是利用基因杂交技术将FMDV的主要抗原基因插入某种缺陷病毒的基因组中构建而成的重组病毒，该重组病毒能在动物细胞内表达FMDV抗原蛋白，刺激机体产生免疫反应。如腺病毒、痘病毒以及由痘病毒衍生而来的非复制型载体[1]。因为口蹄疫病毒是通过呼吸道感染的，而且容易形成持续感染，所以研制黏膜免疫疫苗也是重点，例如沙门氏菌、分枝结核杆菌作载体的活载体疫苗。活载体疫苗是近年口蹄疫新型疫苗研究的热点之一。

1.1口蹄疫重组腺病毒载体疫苗

贾俊涛等[2]等究选择O型FMDV VPI基因上保守序列作为可能的干扰位点，合成了siRNA，重组表达载体pShuttle-VPl。将rAdeno-VPl感染IBRS-2细胞后，12 h后再加入100 TCID50的FMDVO/HKN/2003。结果显示，重组腺病毒能够抑制FMDV的复制。卢曾军分别构建了FMDV O、A型P1-2A和3C编码区基因重组腺病毒，O/Ad5-P12X3C免疫豚鼠后获得较好的保护性免疫反应，免疫猪28d后用同型的FMDV攻击，免疫猪的保护率为75%。

1.2口蹄疫重组痘病毒载体疫苗

金明兰等[4]对FMDV衣壳蛋白前体P1-2A和蛋白酶3C基因重组痘病毒在豚鼠、仔猪体内的毒性、分布及抗体消长规律进行了研究，结果表明，FMD重组鸡痘病毒免疫的动物在整个试验期间，未表现出明显的临床症状和不良反应，病理组织切片检测无明显的组织学变化；PCR、RT—PCR检测各主要脏器内检测到FPV DNA和FMDV DNA，且在大部分组织能存在3 d左右；FMD重组鸡痘病毒均可诱导免疫动物产生较高水平的抗FMDV特异性抗体和中和抗体。Ma等[5]用鸡痘病毒作载体构建了表达FMDV P1-2A、3C和IL-18基因的重组疫苗，进一步证明了该重组疫苗的免疫效果。在攻毒试验中，免疫猪保护率可达到80%。

1.3口蹄疫重组沙门氏菌载体疫苗

刘明秋等[6]将口蹄疫病毒疫苗基因的真核表达质粒pB01电转化到减毒的猪霍乱沙门菌C3500中，构建成抗O型口蹄疫病毒的重组活菌苗pB01/S.cho.血清凝集实验显示即具有免疫原性.采用口服方式免疫家兔，检测重组菌在家兔体内诱导的免疫应答。

2合成肽疫苗

口蹄疫合成肽肽疫苗是利用化学合成法人工根据抗原表位的氨基酸序列合成抗原决定簇的小肽，再链接到大分子载体，并加入佐剂制成的疫苗。合成的小肽由多个B细胞和T细胞抗原表位决定，具有高纯度和稳定的特性。我国已研制出了猪用O型口蹄疫合成