慢性阻塞性肺疾病急性加重患者呼吸道病毒及非典型病原体的检测分析

童春堂 尤兰华 郭沛艳 李雪辉 陈杭薇

慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是一种常见的危害人类健康的慢性呼吸系统疾病，严重影响患者的生活质量，随着人口老龄化及环境污染的加重，其患病率呈逐年增高[1]。COPD患者每次病情的急性加重严重都会损害肺功能，加速病情进展，因而减少COPD急性加重成为延缓该病病情进展、改善生活质量的重要措施。既往研究发现大约50%的AECOPD和细菌感染有关，而AECOPD与呼吸道病毒及非典型病原体感染的关系报道较少[2]。本研究应间接免疫荧光法(immunofluorescence assay,IFA)快速定性检测AECOPD患者血清中九种呼吸道病原体IgM抗体，旨在了解其在AECOPD患者中的感染情况，现报道如下。

对象与方法

一、检测对象

2012年6月1日至2013年9月1日收住北京军区总医院呼吸内科的211例AECOPD患者，诊断标准符合2011年修订版GOLD指南[2]，排除近期接种流感疫苗患者。其中男性128例，女性83例，年龄46～98(77.4±9.4)岁，临床症状包括咳嗽、咳黄痰、喘憋加重等,其中发热患者18例 (体温>37.5 ℃)，记录其入院季节、年患病次数等。

二、检测试剂

九项呼吸道感染病原体IgM抗体检测试剂盒(国食药监械(进)字2010第3400365号)为西班牙VIRCELL公司原装进口产品。采用间接免疫荧光法(IFA)技术，可同时检测流感病毒A/B(influenza virus A/B,FluA/B)、副流感病毒(parainfluenza virus,PIV)1/2/3型、呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)、腺病毒(adenovirus,ADV)、嗜肺军团菌(Legionellapneumophila,LP)血清1型、肺炎支原体(mycoplasma pneumoniae,MP)、Q热立克次体(Q fever rickettsia,QFR)、肺炎衣原体(chlamydia pneumonia,CP)九种IgM抗体。

三、检测方法

1. 标本收集与处理：①患者入院24 h内，静脉穿刺采集血液2～3 ml，以离心半径8 cm，2000 r/min离心5 min后取血清待测，按照1︰1比例稀释血清样本；②向稀释后的血清加入吸附剂以避免干扰IgM检测，处理后的血清以离心半径8 cm，3000 r/min离心10～15 min，在载玻片的每孔中加入15 μl吸附剂处理过的血清，放入湿盒于37 ℃下温育90 min；③用磷酸盐缓冲液缓慢冲洗载玻片后放置水平摇床摇动10 min，再用蒸馏水缓慢水流冲洗；④将载玻片自然晾干，每孔加入15 μl荧光素标记的抗人IgM磷酸缓冲液后放入湿盒37 ℃温育30 min，晾干后加封闭介质，加盖玻片，即刻荧光显微镜下观察结果，如不能立即观察，可避光放置于2～8 ℃不超过24 h。

2. 结果判断：阳性：Flu、PIV、ADV、RSV对阳性血清的细胞核、胞浆或胞膜出现苹果绿色荧光(在PIV和RSV中可能同时观察到着色的合胞)；LP、CP或QFR中所有的细菌呈现苹果绿色荧光；MP对阳性血清在细胞外围呈现苹果绿色荧光。阴性：LP、CP和QFR无荧光，MP、Flu、ADV、PIV和RSV的细胞呈红色。

四、统计学方法

应用SPSS19.0软件对数据进行统计学处理，率的比较运用χ2检验。

结 果

一、不同季节组AECOPD患者IgM抗体检测结果

AECOPD患者中不同季节IgM抗体总阳性率比较，χ2=15.6，bP=0.001，其中春季IgM抗体总阳性率为57.5%(46/80)，通过不同季节间的两两比较，显著高于夏季和秋季的30%(12/40)、22.9%(8/35)，差异均有统计学意义；春季FluA IgM抗体阳性率为27.5%(22/80)，Fisher确切概率法计算aP=0.02，通过不同季节间的两两比较，显著高于夏季的5%(2/40)，差异有统计学意义。其它病原体不同季节间IgM抗体阳性检出结果差异无统计学意义。见表1。

二、不同年龄组AECOPD患者IgM抗体检测结果

不同年龄AECOPD患者IgM抗体阳性率比较，P>0.05，差异无统计学意义，见表2。

表1 不同季节组AECOPD患者IgM抗体检测结果

表2 不同年龄组AECOPD患者IgM抗体检测结果

表3 不同患病次数AECOPD患者IgM抗体检测结果

三、不同年患病次数AECOPD患者IgM抗体检测结果

AECOPD患者年患病次数≥2次与≤1次的IgM抗体总阳性率分别为46.2%(73/158)、35.8%(19/53)，P>0.05，差异无统计学意义，见表3。

四、呼吸道病原体IgM抗体混合阳性检出情况

混合阳性率5.2%(11/211)，其中Flu合并其他病原体阳性者分别为7例，见表4。

表4 呼吸道病原体抗体混合阳性检出情况

讨 论

COPD是一种常见的慢性呼吸系统疾病，在全球各个地区均有较高的患病率，以持续存在气流受限为特征，并呈进行性发展[3]。反复的急性加重是导致患者肺功能严重受损及死亡的主要原因，位居世界死亡原因的第4位，给社会及家庭带来沉重的经济负担，大多COPD 患者每年会出现2～5次的急性加重[4]。因此，做好AECOPD的预防和诊治，对于减少急性加重、延缓肺功能下降、提高患者生活质量乃至节约有限的医疗资源均有重大意义。

研究表明细菌感染是AECOPD最主要的原因[5-6]，但近年来随着呼吸道病毒及非典型病原体(主要指肺炎支原体、嗜肺军团菌、肺炎衣原体)检测方法的改进和研究的深入，发现呼吸道病毒及非典型病原体感染与AECOPD密切相关[7-8]，其中约14%～40% 的AECOPD与病毒感染相关[9-10]，AECOPD患者入院后尽快明确致病病原体，对于选择恰当的抗感染药物具有指导意义。本研究中采用的检测试剂盒基于IFA技术，可对血清中反映新近发生感染的九种呼吸道病原体IgM抗体行定性检测，结果发现阳性率较高，并存在一定比例的混合感染，以Flu合并其它病原体最为多见，符合我们先前报道的混合感染是其特点的状况[11]。

一些COPD患者因高龄、患有多种并发疾病，或长期吸入糖皮质激素，机体免疫力差，在流行季节较容易感染各种病原体导致病情急性加重，由于目前尚无有效的抗病毒药物，接种流感病毒疫苗成为预防AECOPD的重要手段[12]。本研究中AECOPD患者春季IgM抗体总阳性率显著高于夏季和秋季，其中以FluA IgM抗体阳性率显著高于夏季为特点，提示COPD患者在稳定期应做好疫苗接种。另外，应该关注呼吸道病毒及非典型病原体感染与AECOPD年加重次数的关系，本研究中按年患病次数将AECOPD患者分为两组，年患病次数≥2次组的IgM抗体阳性率高于≤1次组，但差异无统计学意义。

呼吸道病毒及非典型病原体尤其是流感病毒感染与AECOPD关系密切，严重影响患者的临床疗效及生活质量，混合感染不容忽视，同时提醒COPD患者在呼吸道病毒及非典型病原体流行的季节应做好预防工作。

参 考 文 献

1 文富强. 重视慢性阻塞性肺疾病的合并症[J/CD]. 中华肺部疾病杂志: 电子版,2013,6(2)：99-102.

2 Sethi S. Bacterial infection and the pathogenesis of COPD[J]. Chest,2000,117(5 Suppl 1): 286S-291S.

3 柳 涛,蔡柏蔷. 慢性阻塞性肺疾病诊断、处理和预防全球策略(2011年修订版)介绍[J]. 中国呼吸与危重监护杂志,2012,11(1): 1-12.

4 吴 清. 慢性阻塞性肺疾病急性加重期病原菌感染及耐药研究[J]. 中华医院感染学杂志,2012,22(23): 5234-5235.

5 徐 平,宋卫东,刘媛媛,等. 慢性阻塞性肺疾病急性细菌性加重患者病原菌分析[J]. 中国感染与化疗杂志,2010,10(2): 108-111.

6 石宝平,钱叶长,王丽华,等. 慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者病原体检测分析[J]. 山东医药,2010,50(15): 18-20.

7 Ko FW,Ip M,Chan PK,et al. Viral etiology of acute exacerbations of COPD in Hong Kong[J]. Chest,2007,132(3): 900-908.

8 徐 健,王慧玲. 肺炎支原体、衣原体IgM抗体在慢性阻塞性肺疾病急性加重期的检出率研究[J]. 大连医科大学学报,2009,31(2): 207-209.

9 李 兵,李雪辉,陈杭薇. 慢性阻塞性肺疾病急性发作患者流感病毒检测结果[J]. 中国临床保健杂志,2012,15(3): 253-254.

10 Seemungal T,Harper-Owen R,Bhowmik A,et al. Respiratory viruses,

symptoms,and inflammatory markers in acute exacerbations and stable chronic obstructive pulmonary disease[J]. Am J Respir Crit Care Med,2001,164(9): 1618-1623.

11 童春堂,陈杭薇,尤兰华,等. 成人呼吸道病毒及非典型病原体快速检测的临床研究[J]. 中华肺部疾病杂志: 电子版,2013,6(4): 307-311.

12 Sumitani M,Tochino Y,Kamimori T,et al. Additive inoculation of influenza vaccine and 23-valent pneumococcal polysaccharide vaccine to prevent lower respiratory tract infections in chronic respiratory disease patients[J]. Internal medicine (Tokyo,Japan),2008,47(13): 1189-1197.