红花总黄素对肝纤维化大鼠肝功能和相关血清指标的影响

★ 李伟镇 张旭红 黄清松

(1.广东省第一荣军医院药剂科 广东 广州 510260；2.广东药学院基础学院 广东 广州 510006)

肝纤维化是指各种原因引起的动态创伤-愈合过程，以肝胶原及其他基质蛋白增高为特征,引起肝脏结构改变,导致肝功能下降，是因慢性反复损伤诱发的一种肝脏持续修复反应。期间出现肝细胞的变性、坏死，炎症细胞浸润，细胞因子作用以及肝组织中细胞外基质过度产生和沉积等。“正虚血瘀”作为肝纤维化的病理因素,为各家的主要共识[1-3]。红花为常用的活血化瘀传统中药，具活血通经、散瘀止痛功效。红药总黄素是红花中所含的一组水溶性生物碱，具有广泛的生物活性。相关研究显示红药总黄素具有促进机体免疫功能、抗氧化[4]、改善贫血(血虚)、抗血栓、刺激骨髓造血机能[5]、提高心肌细胞内cAMP含量、降低心肌氧耗等作用[6]。本研究通过建立大鼠CCl4肝纤维化模型，观察红花总黄素对肝纤维化大鼠肝功能和相关血清指标的影响，为红花总黄素治疗肝纤维化的开发利用提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 以Wistar雄性大鼠为实验动物, 由广东省医学实验动物中心提供，生产许可证号：SCXK(粤)2008-0002。

1.1.2 药品制备 红花购自广东宝芝林中药有限公司，以料液比1∶10(g/mL)室温浸提，提取剂为蒸馏水，时间30min，共浸提2次，合并浸提液，离心，去除药渣。加入5倍无水乙醇，于4℃环境下静置12h，过滤，水溶沉淀后滤过，过大孔树脂柱得红花总黄素水溶液，调整浓度至1.0g生药/mL。

1.1.3 试剂 分析纯CCl4由苏州百与化工有限公司提供；血清GPT、GOT、Bil、TP、ALB试剂盒购自上海申索佑福医学诊断用品有限公司；血清HA、LN、PCⅢ、IV-C试剂盒由上海海研所提供。

1.1.4 主要仪器 半自动生化分析仪(康泰医学系统有限公司，型号：BC300)。

1.2 方法

1.2.1 给药 取Wistar雄性大鼠分为4组，每组10只：对照组，模型组，红花总黄素低、高剂量组。除正常组外，其它各组大鼠首次皮下注射纯CCl45mL/kg，以后皮下注射含20% CCl4的花生油3mL/kg，2次/周，连续12周[7]。第7周起，低、高剂量红花总黄素组灌胃相应剂量红花总黄素水溶液，1次/天。

1.2.2 检测血清指标 末次给药并禁食16h，观察各组大鼠症状并称体重,然后以3%戊巴比妥麻醉大鼠，经颈总动脉取血，分离血清，-20℃保存备用。严格按试剂盒说明书中操作方法检测各组大鼠血清肝功能指标GPT、GOT、Bil、TP、ALB及肝纤维化4项指标HA、LN、PCIII、IV-C。

2 结果

2.1 大鼠一般状态 正常组大鼠体重明显增加,毛发光泽顺滑，动作灵敏。模型组大鼠体态消瘦，体重减轻，毛色蓬松干枯，现萎靡、嗜卧、活动减少。红花总黄素低、高剂量组大鼠上述表现较模型组有良性逆转。

2.2 对大鼠血清肝功能指标的影响 与正常组比较，模型组大鼠血清GPT、GOT、Bil水平明显升高(P<0.01)，TP、ALB水平明显降低(P<0.05)。与模型组比较，低、高剂量红花总黄素组血清GPT、GOT、Bil水平明显降低(P<0.05或P<0.01)，高剂量红花总黄素组血清TP、ALB水平明显升高(P<0.05)。见表1。

表1 各组大鼠血清肝功能指标水平±s，n=10)

2.3 对大鼠血清肝纤维化指标的影响 模型组较正常组大鼠血清HA、LN、IV-C、PCⅢ水平显著升高(P<0.01)。低、高剂量红花总黄素组较模型组大鼠血清HA、LN、IV-C、PCⅢ水平均明显降低(P<0.05或P<0.01)。见表2。

表2 各组大鼠血清肝纤维化指标水平±s，n=10)

3 讨论

CCL4诱导大鼠肝损伤模型是研究肝损害和肝纤维化的经典方法。其机制为CCL4经肝细胞微粒体内细胞色素P450代谢裂解成的三氯甲基自由基而致脂质过氧化,并介导肝细胞损伤,如肝细胞脂肪变及坏死，从而激活贮脂细胞,导致胶原分泌增加,形成肝纤维化[8]。同时，脂质过氧化使肝细胞膜受损,导致肝细胞内ALT、AST等酶外漏,血清ALT和AST活性增高[9]。血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)为反映肝细胞合成代谢功能的指标，肝功能受损时,二者在血液中浓度随之降低，其降低程度与肝功能损害程度呈正相关。肝损伤后，因胆红素代谢和排泄障碍导致血清Bil水平增高。因此,血清ALT、AST、Bil、TP、ALB水平为反映肝功能受损程度的指标。HA主要由肝内皮细胞摄取分解,肝细胞损害时,肝内皮细胞降解HA减少,血清HA水平升高；LN由肝星状细胞合成,在肝硬化/肝纤维化时，LN合成量显著增加；PCⅢ和CⅣ是组成基底膜网状结构的主要成分,参与构成细胞外基质,正常人肝细胞PCⅢ和CⅣ含量极微,肝纤维化早期，PCⅢ和CⅣ含量明显增加,与持续沉积的LN最终形成完整的基底膜,导致肝脏纤维化和硬化。因此，血清HA、LN、PCIII、IV-C水平为反映肝纤维化程度的重要指标[10]，统称为“肝纤四项”，即肝纤维化四项检查。

本实验结果显示，与正常组比较，模型组大鼠血清GPT、GOT、Bil、HA、LN、IV-C、PCⅢ水平明显升高(P<0.01)，TP、ALB水平明显降低(P<0.05)，提示肝纤维化大鼠模型制备成功；给予红花总黄素治疗后，大鼠血清Bil、GPT、GOT、HA、LN、IV-C、PCⅢ水平明显降低(P<0.05或P<0.01)，TP、ALB水平明显升高(P<0.05)，提示红花总黄素能有效地改善CCL4所致大鼠肝损伤,增强肝脏功能,延缓肝纤维化的形成。其具体机制有待进一步的研究。

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