BRMS1和Survivin在乳腺癌中的表达及临床意义

王大勇

·论著·

BRMS1和Survivin在乳腺癌中的表达及临床意义

王大勇

目的 观察BRMS1和Survivin在人乳腺癌组织中的表达及二者的相互关系，探讨其对乳腺癌发生、发展、转移及预后的影响。方法采用免疫组织化学SP法检测160例乳腺癌、70例乳腺良性增生和40例癌旁正常组织BRMS1、Survivin的表达水平，并结合临床病理资料进行分析。结果BRMS1在乳腺癌、乳腺良性增生和癌旁正常组织中的阳性表达率分别为34.4%、81.4%、95.0%，与乳腺良性增生和癌旁正常组织比较，乳腺癌组织BRMS1表达明显降低(P<0.05)。Survivin在乳腺癌、乳腺良性增生和癌旁正常组织的阳性表达率分别为78.8%、17.1%、0，与乳腺良性增生和癌旁正常组织比较，乳腺癌组织Survivin表达明显增加(P<0.05)。BRMS1和Survivin在乳腺癌组织的异常表达与TNM临床分期、淋巴结转移状况有关(P<0.05)，Survivin表达亦与组织学分级有关，二者表达均与患者年龄、肿瘤大小无关，且呈明显负相关(P<0.05)。结论BRMS1和Survivin对于乳腺癌的发生、发展、转移及预后具有重要意义，可作为乳腺癌诊断及判断预后的标志物。

乳腺癌； BRMS1；Survivin

乳腺癌是严重危害女性健康的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率在我国呈逐年上升趋势，患者死亡的主要原因为病变早期即有癌细胞的侵袭和远处转移。因此，对乳腺癌转移机制的研究成为临床提高乳腺癌治愈率的关键。乳腺癌转移抑制因子(breast cancer metastasis suppressor 1,BRMS1)是近年来新发现的一种肿瘤转移抑制基因[1]，在肿瘤远处转移过程中发挥明显的抑制作用。有研究表明BRMS1过表达通过抑制NF-κB的活性，进而抑制肿瘤转移促进基因或抗凋亡基因的表达，最终导致肝癌细胞凋亡和阻断肿瘤转移[2]。Survivin是凋亡抑制蛋白家族成员之一，在多种实体瘤组织中都有高表达，是目前认为作用最强的凋亡抑制因子[3]。本研究采用免疫组织化学法观察乳腺癌组织BRMS1和 Survivin的表达水平及二者间的关系，并分析其临床意义，为乳腺癌的诊断和判断预后提供科学依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取我院2010年3月至2011年12月手术切除、且经病理确诊的乳腺癌组织存档蜡块标本160例。患者均为女性，年龄28～78岁，中位年龄44.5岁。所有患者均无肝、肾及免疫系统疾病，术前均未接受放疗、化疗和内分泌治疗，临床病理资料完整。组织学分类参照2003年WTO乳腺癌分类标准：非特殊型浸润性导管癌126例，导管原位癌16例，浸润性小叶癌15例，髓样癌3例。同时选取距肿瘤边缘5 cm以上的癌旁组织40例和乳腺良性增生组织70例为对照。TNM临床分期：Ⅰ期28例，Ⅱ期89例，Ⅲ期43例。160例乳腺癌中有腋窝淋巴结转移者89例，无腋窝淋巴结转移者71例。

1.2 主要试剂 鼠抗人BRMS1单克隆抗体、兔抗人 Survivin多克隆抗体购自Santa Cruz公司。免疫组化SP试剂盒购自上海生工生物工程技术服务有限公司。

1.3 实验方法 标本用10%甲醛固定，石蜡包埋，切成4 μm厚的石蜡切片，65℃烘烤，脱蜡，采用免疫组织化学染色 SP法测定BRMS1和Survivin的表达，严格按照试剂盒说明书操作，用已知阳性切片作为阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照：3%H2O237℃孵育10 min灭活内源性过氧化物酶，PBS洗涤；微波修复抗原，PBS洗涤；10%山羊血清封闭，室温孵育10 min；用1∶50稀释的BRMS1和Survivin多克隆抗体4℃过夜孵育，PBS冲洗；加生物素标记的抗人IgG抗体室温孵育30 min，PBS冲洗；辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素室温孵育30 min，PBS冲洗；DAB显色；苏木素染色，封片，光镜观察。

1.4 判定标准 BRMS1和Survivin阳性染色的判定标准为细胞质(核)内检出棕黄色颗粒。随机选取5个有代表性的视野计数200个细胞，若阳性细胞占同类细胞的百分比<10%即为阴性。

1.5 统计学分析 应用SPSS 10.0统计软件，采用χ2检验比较各组间蛋白表达差异，相关性比较采用Spearman等级相关性分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 BRMS1和Survivin在乳腺癌、乳腺良性增生及癌旁组织的表达 免疫组化结果显示，BRMS1和Survivin主要定位于细胞核和细胞质中，呈线状棕黄色颗粒。在乳腺癌组织、乳腺良性增生组织和癌旁组织，BRMS1的阳性表达率分别为34.4%(55/160)、81.4%(57/70)、95.0%(38/40)，BRMS1在乳腺癌组织的阳性表达率显著低于乳腺良性增生组织和癌旁组织，差异有统计学意义(P<0.05)；Survivin的阳性表达率分别为78.8%(126/160)、17.1%(12/70)、0(0/40)，Survivin在乳腺癌组织的阳性表达率显著高于乳腺良性增生组织和癌旁组织，差异有统计学意义(P<0.05)；BRMS1和Survivin在乳腺良性增生组织和癌旁组织的表达均差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 不同乳腺组织BRMS1和Survivin表达的比较

2.2 BRMS1和Survivin表达与乳腺癌临床病理特征的关系 BRMS1表达与患者年龄、肿瘤大小、病理类型、组织分级无关(P>0.05)，而与TNM临床分期和淋巴结转移情况密切相关，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期乳腺癌患者BRMS1阳性表达率分别为69.6%、51.1%、22.5%，差异有统计学意义(P<0.05)；有淋巴结转移者和无转移者相比，BRMS1阳性表达率显著降低，分别为29.1%和51.6%，差异有统计学意义(P<0.05)。Survivin表达亦与患者年龄、肿瘤大小、病理类型无关，但与组织分级、TNM临床分期及淋巴结转移情况密切相关(P<0.05)。见表2。

表2 BRMS1和Survivin表达与乳腺癌临床病理特征的关系

2.3 BRMS1和Survivin在乳腺癌中表达的相关性 160例乳腺癌组织中，BRMS1和Survivin的表达呈明显负相关(r=-0.493，P<0.01)。见表3。

表3 BRMS1和Survivin在乳腺癌中表达的相关性比较 例

注：r=-0.493,P<0.01

3 讨论

恶性肿瘤致死的主要原因是早期即有癌细胞的侵袭和转移，包括肿瘤转移促进基因和肿瘤转移抑制基因在内的多种基因参与这一调控过程。对这些基因的相关研究不仅有助于我们更深入理解肿瘤侵袭转移的机制，而且也可作为肿瘤治疗的新靶点和诊断、判断预后的新指标。

BRMS1是2000年由Seraj等[4]发现的一种转移抑制基因，现已明确证实BRMS1具有显著地肿瘤转移抑制作用，但不影响肿瘤本身的生长。Stark等[5]采用免疫组化和RT-PCR技术比较了乳腺癌原发灶和脑转移灶中BRMS1的表达水平，结果显示与原发灶相比，脑转移灶BRMS1的表达降低了10倍。此外，近年来大量研究表明，BRMS1在胃癌、卵巢癌、子宫内膜癌、口腔鳞癌、喉癌、黑色素瘤等多种肿瘤中的表达水平均明显降低[6]。我们采用免疫组化法检测BRMS1的蛋白表达水平，结果显示乳腺癌组织BRMS1阳性表达率显著低于乳腺良性增生组织和癌旁组织，差异有统计学意义(P<0.05)，乳腺良性增生组织和癌旁组织间比较差异无统计学意义(P>0.05)，且乳腺癌组织BRMS1的表达与TNM临床分期和淋巴结转移情况密切相关，提示BRMS1失表达与乳腺癌病变进程密切相关，可作为预后评估及判断乳腺癌患者是否发生淋巴结转移的可靠指标。

Survivin即生存素，是迄今发现最强的凋亡抑制因子，在乳腺癌、胃癌、食管癌、肺癌等多种恶性肿瘤组织中均异常高表达[3]。我们的实验结果显示，乳腺癌组织Survivin阳性表达率显著高于乳腺良性增生组织和癌旁组织，差异有统计学意义(P<0.05)，这与文献报道的Survivin在乳腺癌中表达率为76.3%的研究结果[7]一致。另外，Survivin的表达与乳腺癌组织分级、TNM临床分期和淋巴结转移情况密切相关，提示Survivin在病变早期即被激活而过表达，进而抑制细胞凋亡过程，导致肿瘤细胞生存时间延长。

我们研究结果显示，BRMS1和Survivin的异常表达呈现明显的负相关(r=-0.493,P<0.01)，提示二者在乳腺癌的转移过程中存在某种内在联系，共同参与了乳腺癌的远处转移过程。有研究发现，BRMS1过表达通过抑制NF-kB的活性下调包括Survivin在内的依赖于NF-kB的转移相关基因的表达，最终抑制肿瘤的转移[8]，这与我们的研究结果一致：即乳腺癌的转移过程存在BRMS1失表达和Survivin过表达。另外，BRMS1和Survivin的异常表达均与乳腺癌TNM临床分期和淋巴结转移状况密切相关，提示二者均可作为患者预后的判断指标。

综上所述，BRMS1和Survivin共同参与了乳腺癌的发生、发展、转移和预后，二者的表达水平有望成为诊断和治疗乳腺癌的新靶点。

1 Welch DR,Steeg PS,Rinker-Schaeffer CW.Molecular biology of breast cancer metastasis.Genetic regulation of human breast carcinoma metastasis.Breast Cancer Res,2000,2:408.

2 方晓，王英明，乔守怡.BRMS1过表达促进肝癌SK-HEP1细胞凋亡.复旦学报，2009，48：633-638.

3 王大勇.乳腺癌患者手术治疗前后Survivin的表达及临床意义.河北医药，2013，35：2749-2750.

4 Seraj MJ,Samant RS,Verderame MF,et al.Functional evidence for a novel human breast carcinoma metastasis suppressor,BRMS1,encoded at chromosome 11q13.Cancer Res,2000,60:2764.

5 Stark AM,Tongers K,Maass N,et al.Reduced metastasis suppressor gene mRNA expression in breast cancer brain metastases.J Cancer Res Clin Oncol,2005,131:191.

6 Kelly LM,Buggy Y,Hill A,et al.Expression of the breast cancermetastasis suppressor gene,BRMS1,in human breast carcinoma: lack of correlation with metastasis to axillary lymph nodes.Tumour Biol,2005,26: 213.

7 王昌良，郑春辉，王在国.Survivin在乳腺癌中的表达及意义.中国肿瘤外科杂志，2012，4：56-57.

8 Cicek M,Samant RS,Kinter M,et al.Identification of metastasis associated proteins through protein analysis of metastatic MDAMB 435 and metastasis suppressed BRMS 1 transfected MDAMB 435 cells.Clin Exp Metastasis,2004,21:149.

·消 息·

计量资料中有效数字的确定

本刊编辑部

ExpressionandclinicalsignificanceofBRMS1andSurvivininbreastcancer

WANGDayong.DepartmentofGeneralSurgery,BabaoshanCollieryWorker’sHospital,Hebei,Huailai075430,China

ObjectiveTo investigate the expression and clinical significance of BRMS1 and Survivin in breast cancer,and to explore the correlation between them and their effects on the pathogenesis,development,metastasis and prognosis of breast cancer.MethodsThe expression levels of BRMS1 and Survivin were detected by immunohistochemistry in 160 cases of breast cancer,70 cases of mammary glands benign proliferative lesions and 40 cases of normal tissues adjacent to breast cancer.The data was analyzed together with clinical pathological parameters.ResultsThe positive expression rates of BRMS1in breast cancer,mammary glands benign proliferative lesions and normal tissues adjacent to breast cancer were 34.4%,81.4%,95.0%,respectively,the positive expression rates of BRMS1 in breast cancer were significantly decreased,as compared with those in mammary glands benign proliferative lesions and normal tissues adjacent to breast cancer (P<0.05).However the positive expression rates of Survivin in breast cancer,mammary glands benign proliferative lesions and normal tissues adjacent to breast cancer were 78.8%,17.1%,0,respectively,the positive expression rates of Survivin breast cancer were significantly increased,as compared with those in mammary glands benign proliferative lesions and normal tissues adjacent to breast cancer (P<0.05).The abnormal expression of BRMS1 and Survivin in breast cancer tissue was correlated to TNM clinical stage and lymph node metastasis.Survivin was also related to histological grade.The abnormal expression of BRMS1 and Survivin in breast cancer tissue was not related to patient's age and tumor's size,but the expression of BRMS1 was negatively correlated with that of Survivin.ConclusionBRMS1 and Survivin play an important role in the carcinogenesis,development,metastasis and prognosis of breast cancer,which can be used as the markers in diagnosis and prognosis evaluation of breast cancer.

breast cancer;BRMS1;Survivin

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.03.007

075430 河北省怀来县，八宝山煤矿职工医院普外科

R 737.9

A

1002-7386(2014)03-0342-03

2013-10-15)