舒脉宁注射液中人参皂苷Rg1和Re的含量测定

2014-08-29郝少君李文俊张正臣

河北医药 2014年8期

郝少君李文俊张正臣

·药学研究·

郝少君李文俊张正臣

目的用高效液相色谱(HPLC)法测定舒脉宁注射液中人参皂苷Rg1、Re的含量。方法色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为乙腈-0.05%磷酸。结果人参皂苷Rg1在0.05～0.45 mg/ml时呈良好的线性关系；人参皂苷Rg1的平均回收率为99.84% (RSD=1.35%)。人参皂苷Re在0.04～0.36 mg/ml时呈良好的线性关系；人参皂苷Re的平均回收率为100.36% (RSD=1.01%)。结论该方法简便、准确、分离效果良好，专属性强，可用于舒脉宁注射液的质量评价。

舒脉宁注射液；人参皂苷Rg1；人参皂苷Re；高效液相色谱法

舒脉宁注射液是以人参、莪术、当归、川芎4味药材制成的中药注射液，具有补气行血，活血化瘀、通脉搜络的功效。方中人参为君药，本实验以高效液相色谱法对舒脉宁注射液中人参皂苷Rg1、Re进行含量测定研究。

1 仪器与试药

岛津-高效液相色谱仪，岛津LC-10ATVP泵，SPD-10A VP紫外检测器，77251自动进样器，N2000双通道色谱工作站；AS3120A超声波清洗器；AL104电子分析天平(瑞士梅特勒公司)。人参皂苷Rg1对照品 (含量测定用，批号110703-200221)和人参皂苷Re对照品(含量测定用，批号110754-200218)由中国药品生物制品检定所提供；舒脉宁注射液由解放军第371医院制剂室提供。乙腈、甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；C18(5 μm，150 mm×4.6 mm)；流动相为乙腈-0.05%磷酸(20∶80)；流速：1.0 ml/min；检测波长203 nm；进样量：10 μl。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液的制备：分别精密称取人参皂苷Rg1、Re对照品适量，加甲醇制成每毫升含人参皂苷Rg1 0.5 mg、Re0.4 mg的混合对照品溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备：精密量取本品10 ml，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取3次，10 ml/次，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，10 ml/次，弃去氨试液，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，10 ml/次，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性对照品溶液的制备：按处方量称取不含人参的其他药味，按制剂工艺制成制剂后，以供试品溶液的制备方法，制成阴性溶液。

2.3 系统适用性试验在上述色谱条件下，分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液，各进样10 μl，记录色谱图，结果：理论塔板数按人参皂苷Rg1峰计算：n=6 525(≥3 000)；主峰与杂质峰的分离度>1.5；阴性溶液在人参皂苷Rg1、Re出峰处不干扰。符合系统适用性试验的要求。见图1。

人参皂苷Rg1、Re混合对照品(A)，舒脉宁注射液样品(B)，缺人参的阴性样品(C)

(1)人参皂苷Rg1；(2)人参皂苷Re

图1 舒脉宁注射液HPLC图

2.4 线性关系试验精密量取对照品溶液1、3、5、7、9 ml置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成不同浓度的对照品溶液，精密量取各10 μl，分别注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积(X)对进样浓度(C，μg/ml)进行线性回归，得人参皂苷Rg1回归方程为y=3E+06x-16 190，r=0.9995；人参皂苷Re回归方程为y=4E+06x+984.4，r=0.9996。结果表明：人参皂苷Rg1在0.05～0.45 mg/ml范围内线性良好；人参皂苷Re在0.04～0.36 mg/ml范围内线性良好。见表1。

2.5 精密度试验取线性关系实验项下的3号人参皂苷Rg1、Re混合对照品溶液，按上述色谱条件重复进样5次，结果人参皂苷Rg1峰面积的RSD=0.33%(n=5)，人参皂苷Re峰面积的RSD=0.27%(n=5)。表明本法的精密度良好。

表1 人参皂苷Rg1、人参皂苷Re线性关系实验结果

2.6 稳定性试验取同一供试品溶液分别在0、2、4、6、8 h进样，测得人参皂苷Rg1峰面积的RSD=0.95%(n=5)，人参皂苷Re峰面积的RSD=0.90% (n=5)，结果表明在测定条件下，供试品溶液在8 h内基本稳定。

2.7 重复性试验按上述“供试品溶液的制备”方法，对同一批样品分别制备5份供试品溶液，按上述色谱条件，各吸取10 μl进样测定，结果人参皂苷Rg1平均含量为0.14 mg/ml，RSD为1.18%；人参皂苷Re平均含量为0.10 mg/ml，RSD为1.0%。

2.8 回收率试验精密量取已知含量的样品5 ml，5份分别精密加入人参皂苷Rg1、Re混合对照品溶液(人参皂苷Rg1 0.5 mg/ml、Re 0.4 mg/ml)1.3 ml；按上述“供试品溶液的制备”方法制备供试品溶液，按上述色谱条件，各吸取10 μl进样测定，计算回收率。见表2、3。

表2 人参皂苷Rg1回收率试验结果

表3 人参皂苷Re回收率试验结果

2.9 样品测定取不同批号的样品，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，按外标法，用峰面积计算样品含量。见表4。

3 讨论

[1-3]，用乙腈-0.05%磷酸溶液系统，使用(20∶80)、(25∶75)、(30∶70)配比，经试验(20∶80)配比色谱图良好，最后选定乙睛-0.05%磷酸溶液(20∶80)为最佳条件。

表4 舒脉宁注射液中人参皂苷Rg1和人参皂苷Re的含量测定结果 mg/ml

正丁醇提取次数的考察精密量取本品10 ml两份，1份用水饱和的正丁醇提取3次，10 ml/次，1份用水饱和的正丁醇提取4次，10 ml/次，正丁醇提取液分别放置，各用用氨试液洗涤2次，10 ml/次，弃去氨试液，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，10 ml/次，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得两份供试品溶液。照前法测定，2份供试品溶液色谱图中，人参皂苷Rg1峰峰面积差异不大，液相色谱法峰面积误差一般控制在为2%。说明提取次数3次即可保证提取完全。

舒脉宁注射液由人参、莪术、川芎、当归组成，临床观察治疗气虚血瘀型缺血性中风具有很好的疗效[4]。其中人参补正固本、大补元气、开心益智、保中守神为益气之主药。研究表明，人参主要成分为人参皂苷，主要药理作用为改善微循环，提高组织抗缺氧能力，抑制血小板聚集，有 Ca2+拮抗作用，影响前列腺素代谢[5]。

原质控标准采用的是HPLC法测定当归、川芎中的阿魏酸的含量，考虑人参为该方中君药，人参皂苷Rg1、Re为主要有效成分，对其定量测定方法进行试验[6，7]。结果该方法简便、准确、分离效果良好，专属性强，可用于舒脉宁注射液的质量评价。

参考文献

1 国家药典委员会.中国药典2010版(一部).北京：化学工业出版社，2010.

2 陈舒茵，申洪超，黎瑞汝，等.高效液相色谱法测定律复康胶囊中人参皂苷Re和Rg1的含量.中国现代药物应用，2010,4：1-2.

3 付桂香，赵世萍，范保全，等.高效液相色谱法测定人参五味子糖浆中人参皂苷Rg1和Re的含量.药物分析杂志，2004,24：206-208.

4 郭镔荣,郝少君,王同聚,等.舒脉宁注射液治疗气虚血瘀型缺血性中风的临床观察.实用医药杂志,2010,27:132-133.

5 王筠默.人参药理研究的进展.人参研究,2001,13:2.

6 杨素芹，刘文惠，张继敏，等.高效液相色谱-紫外检测法测定肾康超微胶囊中黄芪甲苷的含量.河北医药，2011，33：3645-3646.

7 田永利，许志宇，葛林，等.总黄酮类化合物含量测定方法和药理作用研究进展.河北医药，2010，32：2094-2096.

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.08.052

453000 河南省新乡市，中国人民解放军第371中心医院