血管生成素-2、血管内皮生长因子与微血管密度在子宫内膜异位症中的表达及临床意义

何勤径

·论著·

血管生成素-2、血管内皮生长因子与微血管密度在子宫内膜异位症中的表达及临床意义

何勤径

目的研究血管生成素-2，血管内皮生长因子与微血管密度指标检测在子宫内膜异位症中的表达及临床意义。方法选择确诊的子宫内膜异位患者30例，术中取子宫内膜异位病灶和在位新鲜组织。同时选取同期正常子宫内膜30例做为对照组。术前所有患者空腹取静脉血采用ELISA法进行测定Ang-2、VEGF；术中取新鲜内膜组织，采用免疫组化的方法对子宫内膜异位的标本进行Ang-2、VEGF和MVD指标测定。结果血清和组织中Ang-2、VEGF均有不同程度的表达。与对照组比较，子宫内膜异位组和子宫内膜在位组的Ang-2、VEGF含量升高，3组间比较差异有统计学意义(P<0.05)；与子宫内膜在位组比较，血清和组织中子宫内膜异位组的Ang-2、VEGF含量明显升高，2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。子宫内膜异位组和子宫内膜在位组中CD34标记的MVD表达与对照组比较均有不同成功的升高，其中以子宫内膜异位组升高最明显，3组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论检测子宫内膜异位症患者血清和病灶组织中Ang-2、VEGF和MVD的表达，有利于判断子宫内膜异位症的病情发展，为其发生机制和临床治疗提供基础。

血管生成素-2；血管内皮生长因子；微血管密度；子宫内膜异位症

子宫内膜异位症(endometriosis，EMT)是影响广大女性的身心健康的常见病，本病虽然是良性病变却有浸润、转移和复发等类似恶性病变的性质，可引起不孕不育、痛经、性交痛及慢性盆腔痛等[1]，已成为威胁女性生命健康的难治之症。临床治疗本病多采取药物治疗和手术治疗，副作用大，效果不明显，另外本病的发病机制尚未完全明确[2]，因此针对本病的基础研究和临床研究受到临床广大医护工作者的不断重视。本研究主要通过对血管生成素-2(angiopoietin-2，Ang-2)、血管内皮生长因子(ascular endothelial growth factor，VEGF)和微血管密度(microvessel density，MVD)的观察它们在子宫内膜异位症中的表达及临床意义，为临床治疗和诊断提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2010年8月至2012年8月于我院通过腹腔镜手术或开腹手术后经病理检查确诊的子宫内膜异位患者30例，年龄30～46岁，平均(35.29±7.6)岁，术中取子宫内膜异位病灶和在位新鲜组织。同时选取同期与我院进行子宫肌瘤切除术、不孕和卵巢囊肿行手术治疗的患者的正常子宫内膜30例做为对照组，年龄32～48岁，平均(38.34±7.3)岁。2组患者术前月经规律，3个月内无激素应用史，6个月内无妊娠及哺乳史，无生殖系统其他合并疾病，无心脑肾等严重内科疾病合并症，2组患者一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 术前所有患者空腹取静脉血5 ml，静置2 h后3 500 r/min离心10min，取上清液于-20℃冷藏用于Ang-2、VEGF的指标检测。采用ELISA法进行测定，所有试剂均购自北京中杉金桥生物技术有限公司，操作步骤严格按照试剂盒说明书进行，所有标本均在同一条件下进行检测。

1.2.2 术中取新鲜内膜组织，用0.9%氯化钠溶液冲洗杂志后，于10%甲醛溶液中进行固定，常规脱水、浸蜡和包埋，5连续切片，采用免疫组化的方法对子宫内膜异位的标本进行Ang-2、VEGF和MVD指标测定。所有试剂均购自北京中杉金桥生物技术有限公司，操作步骤严格按照试剂盒说明书进行，所有标本均在同一条件下进行检测。

1.2.3 Ang-2、VEGF指标检测[3]：采用OLYMPUS-BX41光学显微镜随机选择5个视野，经HMIAS-2000全自动彩色图像分析系统采集图像并进行存储，计算每张切片中阳性目标的平均吸光度。

1.2.4 MVD指标检测：CD34是管内皮细胞的特异性标记物[5]，对新生毛细血管的生长情况有较明确的反映。根据文献中Weidner报道的方法[4]进行操作和结果判定。采用OLYMPUS-BX41光学显微镜随机选择5个视野，经HMIAS-2000全自动彩色图像分析系统采集图像并进行存储，计数CD34标记的平均阳性微血管数目为MVD值。

2 结果

2.1 3组患者血清中Ang-2、VEGF含量的比较 研究发现，血清中Ang-2、VEGF均有不同程度的表达。与对照组比较，子宫内膜异位组和子宫内膜在位组的Ang-2、VEGF含量明显升高，3组间比较差异有统计学意义(P<0.05)；与子宫内膜在位组比较，子宫内膜异位组的Ang-2、VEGF含量明显升高，2组比较差异有统计学院意义(P<0.05)。见表1。

表1 3组患者血清中Ang-2、VEGF含量的比较

表1 3组患者血清中Ang-2、VEGF含量的比较

组别Ang-2VEGF异位内膜组76±12*#214±21*#在位内膜组58±13*178±20*正常对照组35±12 126±19

注：与对照组比较，*P<0.05；与在位内膜组比较，#P<0.05

2.2 3种组织标本中Ang-2、VEGF吸光度值和MVD表达的比较 Ang-2、VEGF和CD34在3种组织中均有不同程度的表达。与对照组比较，子宫内膜异位组和子宫内膜在位组的Ang-2、VEGF吸光度值升高，3组间比较差异有统计学意义(P<0.05)；与子宫内膜在位组比较，子宫内膜异位组的Ang-2、VEGF吸光度值明显升高，2组比较差异有统计学院意义(P<0.05)。另外，子宫内膜异位组和子宫内膜在位组中CD34标记的MVD表达与对照组比较均有不同成功的升高，其中以子宫内膜异位组升高最明显，3组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 不同子宫内膜中Ang-2、VEGF的吸光度值及MVD表达的比较

表2 不同子宫内膜中Ang-2、VEGF的吸光度值及MVD表达的比较

组别Ang-2VEGFMVD异位内膜组0.29±0.18*#0.34±0.11*#42.68±13.85*#在位内膜组0.17±0.13*0.48±0.09*31.47±18.46*正常对照组0.12±0.090.37±0.1622.03±17.07

注：与对照组比较，*P<0.05；与在位内膜组比较，#P<0.05

3 讨论

子宫内膜异位症是指子宫内膜腺体及间质细胞生长在子宫腔以外的部位，是妇科常见的良性肿瘤，但是这种良性病变的内膜组织可像恶性肿瘤一样侵袭血管产生增生、浸润、扩散、种植与转移，引起月经不调、痛经、盆腔疼痛、不孕不育等[6]，严重威胁广大女性的健康，为生活和工作带来巨大的影响。虽然目前对于子宫内膜异位的发生机制尚未完全阐明，但许多临床文献已经表明，国内外学者逐渐越来越重视这方面的相关研究[7]。

在大量医学工作者的努力下，随着医学的不断进步和对子宫内膜异位症的研究不断深入，有文献报道，新生血管是子宫内膜异位病情发展的重要基础，而且研究发现，多种细胞因子和生长因子参与了血管生成的调控，其中Ang-2、VEGF和MVD的表达在临床研究范围内得到了广泛的重视[8]。子宫内膜异位症发生时，血管内皮细胞增生活跃，Ang-2和VEGF是强效和特异的血管生成因子，在某些病理环境下刺激毛细血管增生，提高血管通透性[9]，为异位生长的腺上皮细胞提供赖以生存的物质基础，因此病灶组织在大量新生血管的支持下不断发展。Ang-2与肿瘤血管形成数目、临床分期、预后关系密切[10]。在血管生成的调节过程中，Ang-2与血管内皮细胞特异性酪氨酸激酶受体Tie-2结合，竞争性抑制Ang-1引起的Tie-2受体的磷酸化，使血管稳定性遭到破坏，从而促进新生血管的重构。VEGF是特异性作用于血管内皮细胞的最重要的血管生成因子，尤其是在缺氧、贫血等诱导因素下，当其与受体结合后能够刺激毛细血管增生，增强血管通透性，为异位生长的细胞提供生长环境和物质基础，从而诱发新生血管的生成。研究证明，Ang-2与VEGF两者对促进血管生成具有相辅相成、互相促进的作用[11]。当VEGF存在时能够促进Ang-2的表达，使血管不稳定性增加，加剧诱发新生血管形成，反之，当VEGF不存在时，Ang-2的主要作用是使血管数目减少，血管退化。说明VEGF 与Ang-2关系密切，在促进血管生成的过程中有协同作用[12]，此观点有助于为子宫内膜异位的发病机制和临床研究提供重要的理论基础。另外，MVD是评价血管生成的指标，特异性高，可反映子宫内膜毛细血管的生长情况，含量越高，新生血管越丰富，而CD34是血管内皮细胞的特异性标记物，其表达可反映MVD的定量分析。

本研究发现，血清和组织中Ang-2、VEGF均有不同程度的表达。与对照组比较，子宫内膜异位组和子宫内膜在位组的Ang-2、VEGF含量升高，3组间比较差异有统计学意义(P<0.05)；与子宫内膜在位组比较，血清和组织中子宫内膜异位组的Ang-2、VEGF含量明显升高，2组比较差异有统计学院意义(P<0.05)。子宫内膜异位组和子宫内膜在位组中CD34标记的MVD表达与对照组比较均有不同成功的升高，其中以子宫内膜异位组升高最明显，3组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。

子宫内膜异位症是在多种因素共同作用下形成的，是一个复杂的过程。血管生成对本病的发生发展有着重要的意义。Ang-2、VEGF和MVD是诱导血管生成的重要生物学因子，对其深入研究有助于为临床治疗提供广阔思路。本研究通过对Ang-2、VEGF和MVD进行检测，探讨他们在血清和不同组织中的含量水平，为抗血管治疗的方法提供更多的理论依据，使针对血管生成的术前辅助治疗方法能够成为术后预防复发子宫内膜异位症的重要方法[13-15]。

综上所述，通过检测子宫内膜异位症患者血清和在位及异位病灶组织中Ang-2、VEGF和MVD的表达，能够对判断子宫内膜异位症的发生和发展起到指导作用，可为日后对其发生机制和临床治疗提供广阔的思路和理论基础。

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2 王爽，张晓玲.Ang-2、VEGF在卵巢子宫内膜异位症中表达及相关性研究.实用妇产科杂志，2010，26：594-597.

3 赵洁，薛素萍，曲银娥，等.HIF-1和VEGF在子宫内膜异位症增生期内膜中的表达及意义.中国实验诊断学，2012，16：429-431.

4 weidner N，Folkman J，Pozza F，et al.Tumor angiongenesis：a new significant and independen prognostic indicator in early-stage breast carcinoma.Natl Cancer Inst,1992,84：1875.

5 吴惠琰.TNF．n、VEGF和MVD在子宫内膜异位症中的表达及意义.实用诊断与治疗杂志，2006，20：244-245.

6 景和，陈映竹．子宫内膜异位症．郎景和，陈映竹主编．女性生殖健康与疾病．郑州：郑州大学出版社，2002．106.

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8 张晓玲，程玉芬，黄欧平，等.血清血管内皮生长因子对诊治子宫内膜异位症的临床价值.江西医学院学报，2009，49：35-37.

9 Lingberg AM，Stalhandske P，Petal U．Genome of coxsakievirius B3.Virology，2005，80：50，63．

10 Ahmad SA，Liu W,Jung YD，et al．The effects of angiopoictin-1 and-2 on tumor growth and angiogenesis in human colon eanccr．Ahmed SA，2001，61：1255-1259.

11 Holash J，Maisonpieire PC，Compton D，et al．Vesse cooption regression and growth in tumors mediated by angiopoietin and VEGF．Science，1999，284：1994-1998.

12 Macho A．Non-pungent Capsaicinoidsfrom Sweet Pepper Synthesis and Evaluation of the Chemopreventive and Anticaneer Potential．Eur J Nutr，2003，42：2-9．

13 王爽,张晓玲.Ang-2、VEGF在子宫内膜异位症中的研究进展.实用临床医学，2008，9：132-136.

14 刘淑艳.子宫内膜异位症患者外周血和腹腔液中血管生成素-2和血管内皮细胞生长因子水平的检测及临床意义.海南医学，2012,21:86-87.

15 范俊,董文韬．栾少红.子宫内膜异位症患者血清、腹腔液中Ang-2和ENS的表达变化及意义.山东医药，2008，48：47-48.

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.07.026

518100 广东省深圳市龙岗区妇幼保健院

R 711.71

A

1002-7386(2014)07-1025-03

2013-10-15)