山茱萸总苷对坐骨神经损伤Balb/c小鼠神经传导速度及脊髓运动神经元内 Gap-43表达的影响

齐 爽，刘 燕，陈 鹏

(吉林大学中日联谊医院，吉林 长春 130033)

如何促进周围神经损伤后的修复和再生一直是外科学的研究热点。山茱萸是我国传统中药，近年来的研究发现，其总苷成份可以显著增加脑损伤大鼠新生成熟神经元及血管数目，改善其神经系统功能[1]；但对周围神经损伤后的神经再生与修复影响尚无报导。生长相关蛋白(Growth associated protein,Gap-43)有促进神经轴突生长的作用，是神经生长发育、损伤修复时的首选分子标志物[2]。本研究旨在通过观察山茱萸总苷对坐骨神经损伤Balb/c小鼠神经传导速度( MCV) 及其相应水平脊髓损伤的运动神经元中GAP-43表达的影响，为山茱萸总苷治疗周围神经损伤提供理论依据。

1 材料与方法

1.1动物分组及造模

84只雄性、健康、鼠龄8周、体重(20±2) g的Balb/c小鼠由同一动物饲养员采用专门鼠笼分笼管理，饲养管理条件一致。采用1%硫喷妥钠100 mg/kg腹腔注射麻醉。局部脱毛，消毒。沿右侧臀大肌纤维方向做右臀及大腿上部皮肤切口，分开臀肌显露坐骨神经使其与周围组织分离。坐骨结节下0.5 cm处完全切断神经干，12倍手术显微镜下用11-0医用无损伤线做断端吻合，逐层闭合创口。

综上所述，大红柳滩地区金矿开采过程中，应以保护环境为基础，提升地区经济发展。在开采中会对环境产生一定的负效应，相关企业和人员需要提升对环境保护的重视度，保持生态环境与经济利益的平衡发展，确保金矿开采科学性和合理性，最大程度降低因开采金矿产生的环境问题。结合金矿开采实际情况，对地质环境、水资源等进行分析，采取针对性措施，降低负效应，全面抓紧金矿开采管理规范，保护环境，促进经济与生态的可持续发展。

随机分为山茱萸总苷高剂量组(320 mg/kg/d)，中剂量组(160 mg/kg/d)，低剂量组 (80 mg/kg/d)及生理盐水对照组，每组16例。各组均采取灌胃方法给药。连续给药至处死。各按术后3天、5天、1周、2周，4周、8周、12周分为7个时间点进行观察。

1.2相关指标检测

之前就听我妈说过，这家人成分是很微妙的。家里男人是鄂州搞房地产的，经常不在家。儿子和我一个小学，马上要上初中。而现在和孩子在家里的是他的后妈。

在机械设备制造中，自动化技术的出现，使其能够依托于计算机来对机械设备制造的各个环节进行集成化控制，从而使自动化技术发挥更大的作用。利用自动化技术来进行集成化的机械设备制造，能够使不同的加工工序按照线性的方式进行排序，从而实现各个生产环节的科学整合，并通过相应的子系统对这些生产环节进行控制，从而提高各个生产环节之间的协作性，使机械设备制造分工更加清晰明确，进而为机械设备制造提供了可靠的技术保证。

总苷是中药山茱萸的主要药效部分，具有免疫抑制，降血糖，抗炎，抗氧化，抗心律失常等多重功效[4]。在移植排斥反应的防治及各种免疫性及炎症性疾病治疗的临床应用上也取得了良好效果[5，6]。而对其促进神经损伤后修复的研究较少。

拉力试验机是一种常用的力学检测设备，是保证材料拉伸、压缩、弯曲、撕裂、剥离等试验顺利进行的基础检测设备。其主要结构为工作台、计算机控制系统、动力传动系统、测力机构、传感器等[2]。操作者只需将需检测的零件和夹具安放于拉力试验机上，并操纵计算机控制界面，即可开始检测。

①MCV：采用 Medtronic Keypoint 肌电/ 诱发电位仪，对术后第4、8、12周的各组小鼠双侧坐骨神经作检测。室温在24℃，1%硫喷妥钠腹腔麻醉后，常规消毒术野，俯卧位显露坐骨神经，同芯针电极刺入小鼠比目鱼肌肌腹内为记录电(M点)，接地电极置于鼠尾部。以平行刺激电极(两极固定间距为2 mm)分别于坐骨神经吻合口近侧坐骨结节水平(P点)及远侧坐骨神经分支处(D点)，给以超强刺激(电流10 mA)。

1.3统计学分析

②Gap-43:术后3天、5天、1周、2周、4周、8周时间点，各组取6只小鼠，仰卧位固定，用灌注穿刺针由心尖穿至主动脉根部，用生理盐水50-100 ml快速灌注，冲洗血液，待右心耳流出清亮液体时，用新鲜4%多聚甲醛磷酸缓冲液300-400 ml持续灌注固定30 min，先快后慢。灌注完毕后，用咬骨钳咬开椎管，完整且无损伤暴露、游离L4-L6节段脊髓，切取组织，用10%中性甲醛固定标本72 h，酒精逐级脱水后石蜡包埋，备做免疫组化染色。每张切片随机选取5个视野照相，在放大200倍下，应用图像分析软件分析Gap-43的表达。

周围神经损伤后的神经再生过程复杂且缓慢。精密的显微缝合仅能恢复损伤神经的连续性，不能完全解决神经再生的质量、传导速度以及靶器官功能恢复问题[3]。再生神经与周围组织粘连、失神经支配的肌肉发生萎缩及退行性变现象常见。因此，通过药物来提高损伤神经缝合后再生质量具有重要的研究意义。

2 结果

①MCV：COG 各剂量组在术后4、8、12周，波幅和运动神经传导速度方面与对照组之间比较，均存在显著差异，各时间点高、中剂量组与低剂量组之间比较，均存在显著差异，而高、中剂量组之间则无显著差异。术后 4周、8周、12周各组AMP与MNCV比较见表1-3。②Gap-43：术后各时间点脊髓Gap-43的平均光密度值比较结果显示：坐骨神经损伤后3天、5天、1周，各剂量组Gap-43平均光密度逐渐增加，2周时达最高，随后的第4周、第8周则逐渐呈逐渐下降。各组间差异性明显，其中高剂量组，中剂量组明显高于低剂量和对照组，差异性显著。

动作电位波幅(AMP)与潜伏期由仪器自动显示，用游标卡尺测量并输入刺激电极间距离，仪器自动计算得出运动神经传导速度(MNCV)。公式如下：

组别术后4周 术后8周术后12周高剂量4.52±0.16abc23.51±0.15abc25.64±1.06abc中剂量4.14±0.18ab19.56±0.31ab23.08±0.33ab低剂量2.42±0.04a15.43±0.35a19.71±0.44a对照组2.01±0.1312.52±0.0717.92±0.71

COG各剂量组与对照组比较a0.010.05

组别术后4周 术后8周术后12周高剂量41.1±0.72abc63.9±1.64abc64.8±1.52abc中剂量37.4±0.93ab58.4±1.17ab59.7±0.83ab低剂量33.8±0.79a52.6±0.79a54.1±0.39a对照组28.6±0.5550.4±0.4647.7±3.36

COG各剂量组与对照组比较a0.010.05

表3 不同时间点脊髓Gap-43平均光密度值比较

COG 各剂量组与对照组比较，aP<0.01，b0.010.05

3 讨论

MNCV=两刺激电极间距离/动作电位潜伏期差值。

但与此同时，各类关于牛肉丸非法添加添加剂的报道也接踵而至。早在2011年3月24日，辽沈晚报就发布了报道《便宜的“牛肉丸”是添加剂做的》；就在今年，中国新闻网上发表了一篇名叫《牛肉丸并非真“姓” 一颗肉丸N种添加剂》的文章。长时间以来，新闻媒体对牛肉丸的口诛笔伐甚嚣尘上。那么，牛肉丸里的添加剂是不是像报道里说的那么可怕？牛肉丸里都有哪些添加剂？这些添加剂在制作肉丸的过程中起什么作用？是否真如报道所说的那般恶毒呢？

生长相关蛋白(growth associated proteins，Gap-43) 主要是由神经元胞体产生，主要分布于生长锥。在神经生长阶段，神经元的生长锥在神经发育和再生中引导轴突的生长和延伸，Gap-43是富含于神经生长锥中的胞膜相关蛋白，它通过促进细胞骨架蛋白中的肌动蛋白聚集，增强生长锥的活力，启动和促进神经轴突的生长，分化、再生及突触重建[7]。因此，它与神经元生长发育、突触形成及神经可塑性密切相关[8]。

本研究通过各组坐骨神经损伤后小鼠脊髓前角运动神经元Gap-43免疫组织化学染色后的Gap-43的平均光密度值的测量分析发现：坐骨神经损伤后相应脊髓节段的Gap-43被激活并大量表达，应用山茱萸总苷后高中剂量组的Gap-43表达明显高于低剂量组及对照组，存在明显的量效关系；2周达到高峰，并于8周后仍能持续表达。神经电生理检测结果提示随着时间延长，各组的神经传导速度与波幅均不断增长。山茱萸总苷各剂量组各时间点的波幅和运动神经传导速度较对照组均具有明显的优势。表明山茱萸总苷可促进 GAP-43 表达上调，缩短轴突重建时间，能够促进周围神经损伤后的再生及神经功能的恢复。

总之，山茱萸总苷可加速坐骨神经损伤后神经髓鞘及轴索再生，其机制可能为增加脊髓内的Gap-43 蛋白的表达。

作者简介：齐爽(1980-)，女，博士，从事周围神经、骨与关节软组织损伤再生与修复的研究。

参考文献：

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[2]Aigner L,Arber S,Kapthammer JP,Laux T,Sehneider C,Botteri F,Brenner HR,Caroni P.Overexpression of the neural growth-associated protein GAP-43 induces nerve sprouting in the adult nervous system of transgenic mice[J].Cell,1995,83:269.

[3]朱家恺,劳镇国,于国中,等.115 例上肢神经损伤修复方法的分析[J].中华医学杂志,1986,66(8):453-456.

[4]于 淼，王晓先，等.山茱萸的药理作用研究进展[J].东南国防医药，2010，12(3)：240-243.

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[6]付桂香，李建民，周 勇，等．山茱萸总苷抗炎免疫抑制作用及其机理的大鼠实验研究[J]．中华微生物学和免疫学杂志，2007,27(4)：316．

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[8]Benowitz L I,Routtenberg A.GAP-43:an intrinsic determinant of neuronal development and plasticity[J].Trends Neurosci,1997,20(2):84.