鱼腥草注射液的质量稳定性研究

曾茂贵 李颖

鱼腥草注射液是鱼腥草经水蒸气蒸馏的挥发油饱和水溶液灭菌制成的注射液。主要有效成分包括:癸酰乙醛、甲基正壬酮、月桂烯、癸醛等［1-2］，具有抗病毒、抗菌［3］、增强机体免疫功能［4-5］、抑制炎症对毛细血管通透性的增加、镇痛［6］、抗过敏、平喘、止咳祛痰［7-8］等作用。近年来，鱼腥草注射液在临床上的应用日渐广泛，其不良反应也逐渐凸现。由鱼腥草注射液静脉滴注所引起的皮肤过敏、过敏性休克、呼吸困难、水肿、胃肠反应、听力、视力下降等不良反应［9-13］时有发生。其中某些不良反应较为严重［14］，甚至危及生命［15］。有研究表明［16］，鱼腥草注射液有效成分之一癸酰乙醛(鱼腥草素)化学性质不稳定，极易发生聚合，这可能是鱼腥草注射液发生过敏的原因之一，提示鱼腥草注射液的不良反应可能与成分有关。但是，鱼腥草注射液中所含的挥发性成分复杂且微量，而目前的质量控制方法仅限于某个成分的含量测定，在其质量研究领域留下了空白。本研究采用顶空固相微萃取—气相色谱—质谱联用方法，由成分分析入手，全面、系统地考察鱼腥草注射液中挥发性成分的种类和含量随时间的变化情况，对鱼腥草注射液中挥发性成分的质量稳定性达到比较全面的把握，也为中药注射液稳定性研究提供了思路。

1 仪器与材料

1.1 实验材料

鱼腥草注射液(福建三爱药业有限公司，批号:120604，120611，120502)

1.2 实验仪器

Thermo Polaris Q气相色谱—质谱联用仪(美国Thermo-Finnegan公司)SPME萃取手柄、聚二甲基硅氧烷(PDMS，100μm)萃取头、聚二甲基硅氧烷/二乙烯基苯(PDMS/DVB，60μm)萃取头、15 ml带聚四氟乙烯瓶塞的顶空取样瓶(美国Supelco公司)色谱柱HP-5 MS毛细管色谱柱(30 m×0.25 mm，0.25 μm)(日本岛津公司)ODS(C18)固相萃取头100 mg/1 ml(大连依利特分析仪器有限公司)601数显超级恒温水浴(江苏金坛市华欧实验仪器厂)CP225D型、BS423S型分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)SHH-250SD型药品稳定性试验箱(重庆市永生实验仪器厂)。

2 实验条件与方法

2.1 实验条件

2.1.1 色谱条件 色谱柱HP-5 MS毛细管色谱柱(30 m×0.25 mm，0.25 μm);载气为氦气;进样口温度 250℃;升温程序:初始温度 60℃，保持5分钟，以6℃/min升温至240℃;恒流模式，流速 0.8 ml/min，不分流。

2.1.2 质谱条件 电子轰击(EI)离子源;电子能量70 ev;离子阱温度230℃;质量扫描范围m/z:30～500 amu。质谱数据运用NIST98标准谱库进行检索。

2.2 实验方法

2.2.1 长期稳定性试验 将规定批号的鱼腥草注射液在温度25℃ ±2℃、相对湿度(60±10)%的条件下放置，分别于0个月、3个月、6个月、9个月、12个月取样一次。

2.2.2 加速稳定性试验 将规定批号的鱼腥草注射液在温度40℃ ±2℃、相对湿度(75±5)%的条件下放置，分别于0个月、1个月、2个月、3个月、6个月取样一次。

2.2.3 顶空固相微萃取—气相色谱—质谱法(HS-SPMEGC-MS)分析稳定性研究期间样品所含的挥发性成分 分别以两个不同批号鱼腥草注射液为研究对象(批号:120611，120502)，精密吸取供试品5 ml，置15 ml带聚四氟乙烯瓶塞的顶空取样瓶中，经超级恒温水浴加热至55℃，预平衡40分钟，使用聚二甲基硅氧烷(PDMS，100μm)固相微萃取头顶空萃取40分钟(55℃)，取样完毕，于250℃气相色谱进样口解吸附30秒，按2.1项下实验条件进行GC-MS成分分析，经NIST98标准谱库检索结合人工谱图解析，确定鱼腥草注射液的挥发性成分。

3 实验结果

鱼腥草注射液挥发性成分HS-SPME-GC-MS总离子流图见图1;其中5种含量较高挥发性成分在加速、长期稳定性考察过程中变化情况见图2～4;两鱼腥草注射液五种含量较高挥发性成分质量稳定性数据见表1、2。

表1 HS-SPME-GC-MS对鱼腥草注射液(批号:120502)挥发性成分稳定性试验结果

表2 HS-SPME-GC-MS对鱼腥草注射液(批号:120611)挥发性成分稳定性试验结果

图1 鱼腥草注射液挥发性成分HS-SPME-GC-MS总离子流图

图2 鱼腥草注射液(120502)5种含量较高挥发性成分在长期稳定性考察过程中变化情况

图3 鱼腥草注射液(120611)5种含量较高挥发性成分在加速稳定性考察过程中变化情况

图4 鱼腥草注射液(120611)5种含量较高挥发性成分在长期稳定性考察过程中变化情况

4 小结与讨论

通过HS-SPME-GC-MS技术对两个不同批号鱼腥草注射液中所含的挥发性成分进行加速、长期稳定性研究，稳定性试验0个月时，两批号鱼腥草注射液挥发性成分种类基本一致，同种成分相对含量亦相近;从稳定性试验过程的各个阶段GC-MS鉴定的挥发性成分组成情况来看，共有组分有49种，共有化合物峰面积占检出挥发性成分总峰面积的百分比均大于95%。实验结果表明:鱼腥草注射液中主要挥发性成分的种类没有显著变化，即随着贮存时间的推移，未发现新成分产生，而原有主要挥发性成分的相对含量也未发生大的波动。本研究涉及的两个批号鱼腥草注射液中5种含量较高挥发性成分在加速、长期稳定性考察过程中的变化情况图证实了以上结论。

鱼腥草注射液中最主要的两种药效成分——鱼腥草素和甲基正壬酮含量波动甚微，是相当稳定的。就鱼腥草素而言，先前有些文献报道［16］其质量很不稳定，易发生分解或聚合反应，是导致鱼腥草注射液不良反应的原因之一。但经稳定性研究，在鱼腥草注射液贮存过程中，鱼腥草素相对含量变化极小，性质稳定。另有文献报道［17］鱼腥草注射液的不良反应与甲基正壬酮的含量有相关，本研究结果认为甲基正壬酮在考察期内含量基本稳定，未对制剂质量产生影响。

［3.3.1］-2-壬烯-9-醇、α-杜松醇、异榄香素等挥发性成分有时会检测不到，但鉴于这些成分在制剂中的相对含量很低(都低于0.3%)，从整体上看，可认为这样的成分变化对鱼腥草注射液的质量、安全性和疗效不会产生影响。

但是针对鱼腥草注射液稳定性的研究，由于时间和其它客观因素所限，本研究仅选择同一厂家的两个批号制剂进行研究，样品量较小，所得结论的确证仍需要后续研究更长时间的考察和不同厂家提供的更大样本量的支持。

［1］《中药辞海》编审工作委员会.中药辞海(第二卷)［M］.北京:中国医药科技出版社，1996.

［2］李爽，于庆海，金佩河.鱼腥草的有效成分、药理作用及临床应用的进展［J］.沈阳药科大学学报，1997，14(2):144-147.

［3］江苏新医学院.中药大辞典［M］.12版.上海:上海科学技术出版社，2003:1439.

［4］梅岩.鱼腥草和桑菊饮对免疫功能有影响的实验研究［J］.国外医学中医中药分册，1996，18(4):49.

［5］宋志军，王潮临，程建祥，等.鱼腥草、田基和丁公藤注射液对大鼠免疫功能的影响［J］.中草药，1993，24(12):643.

［6］陆敏康，孟庆叶.鱼腥草注射液与湿润烧伤膏治疗烧伤28例［J］.湖南中医杂志，1999，15(6):491.

［7］巩聿清，武玉锦.鱼腥草的临床药理研究进展［J］.中国药业，2005，14(3):73-74.

［8］赵子凯，李丽芬，石扣兰，等.“复方养阴清肺汤”镇咳、祛痰、抗炎及抑菌作用的实验研究［J］.中医药研究，1999，15(20):39-41.

［9］陈碧华.鱼腥草注射液不良反应3例［J］.实用药物与临床，2005，8(6):9.

［10］李曼，赵志恒，王忠，等.鱼腥草注射液安全性的计量学评价［J］.中国药物警戒，2012，9(2):85-88.

［11］王书杰，王丽萍.鱼腥草注射液不良反应126例文献分析［J］.中国药业，2005，14(10):62.

［12］李亚莉.鱼腥草注射液不良反应的回顾性分析［J］.中国药师，2005，8(2):164.

［13］王军，姜毅，华碧春.鱼腥草注射液致不良反应228例报告分析［J］.中国医药导报，2006，3(17):192.

［14］单文治，毛飞，顾苏俊.鱼腥草注射液的严重不良反应分析［J］.科学技术与工程，2006，6(12):1681-1682，1685.

［15］薛秀清，蔡晓虹.鱼腥草注射液引起死亡1例［J］.河南中医，2006，26(9):80.

［16］魏定基.鱼腥草注射液静脉给药不良反应分析［J］.临床合理用药杂志，2010，3(4):60-61.

［17］叶世芸，卢顺林，李云超，等.鱼腥草注射液不良反应与甲基正壬酮含量的相关性［J］.中国医院药学杂志，2011，31(14):1166-1169.