杜仲、人参及其合剂对D-半乳糖衰老小鼠模型SOD和GSH-Px活性的影响*

焦 铭，孙 雪，李 笔，吴 喆**

(1.湖北科技学院基础医学院，湖北 咸宁 437100；2.湖北科技学院2010级临床医学本科)

杜仲为杜仲科植物杜仲(Eucommia ulmoides Oliver)的干燥树皮，是中国名贵滋补药材。杜仲具有补肝肾，强筋骨，清除体内垃圾，加强人体细胞物质代谢，防止肌肉骨骼老化，平衡人体血压，分解体内胆固醇，降低体内脂肪，恢复血管弹性，利尿清热，广谱抗菌，兴奋中枢神经，提高白血球数量，增强人体免疫力等显著功效[1]。人参为五加科人参属植物，是驰名中外、老幼皆知的名贵药材。李时珍在《本草纲目》中对人参极为推崇，认为它能“治男妇一切虚症”[2]。但有关杜仲、人参及其合剂对SOD和GSH-Px的影响目前研究较少。本文利用D-半乳糖诱导的衰老小鼠模型，测定上述药物对SOD和GSH-Px活性的影响，旨在为杜仲、人参功能开发、利用及作用机制的探讨提供理论和实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

杜仲、人参由咸宁市药材公司提供，均制成含生药浓度为6.38 mg/ml的水煎剂(合剂中两味药材比例为杜仲 ∶人参=2∶1)，4℃冰箱保存。SOD、GSH-Px试剂盒(南京建成生物制品研究所)、D-半乳糖(国药集团化学试剂有限公司，AR)。

昆明种小白鼠60只，雌雄各半，体质量25～30 g，湖北省医学实验动物中心提供，动物合格证号为SCXK(鄂)2003-0005，购进后适应2 d。

1.2 仪器

JY 10001电子天平(上海精密科技仪器有限公司)，HHS-12-1恒温水浴锅(南京博古医疗器械厂)，PL 2003型电子天平(上海特勒-托利多公司)，UV-2550 Probe型紫外可见分光光度计(Shimadzu公司)。

1.3 动物分组与给药

将小鼠分为6组，每组10只。分别为：①衰老模型组：每日背部皮下注射D-半乳糖100 mg/kg，同时每日用与Vit E组等量生理盐水灌胃；②杜仲组：按上述剂量每日背部皮下注射D-半乳糖，同时每日灌服杜仲水煎剂100 mg/kg；③人参组：按上述剂量每日背部皮下注射D-半乳糖，同时每日灌服人参水煎剂50 mg/kg；④合剂组：按上述剂量每日背部皮下注射D-半乳糖，同时每日灌服合剂水煎剂50 mg/kg；⑤Vit E组：按上述剂量每日背部皮下注射D-半乳糖，同时每日灌服Vit E 100 mg/kg；⑥空白对照组：按上述剂量每日背部皮下注射生理盐水，同时每日用与Vit E组等量生理盐水灌胃。各组小鼠自由进食和饮水，持续4周。

1.4 样品制备

最后一次给药后，禁食不禁水12 h，眼眶取血，分离血清，并迅速取肝脏，用生理盐水漂洗，吸干，称重，用4 °C生理盐水制成10 %组织匀浆备用。

1.5 指标测定

血清、肝脏组织中的SOD、GSH-Px活性测定严格按照试剂盒中说明书所示方法进行。

1.6 统计学分析

2 结 果

2.1 杜仲、人参对小鼠血清和肝脏SOD、GSH-Px活性的影响

与空白对照组相比，衰老组SOD、GSH-Px活性都有不同程度下降，说明其抗氧化能力下降；与衰老组相比，Vit E组和药物水煎剂组均能增加小鼠血清和肝脏SOD、GSH-Px的活性，并具备一定量效关系。结果见表1。

表1 杜仲、人参对小鼠血清和肝脏SOD、GSH-Px活性的影响(n=10，U/ml)

2.2 杜仲、人参及其合剂提高小鼠血清、肝脏SOD活性的差异

相比衰老组，杜仲、人参及其合剂均能显著提高小鼠血清、肝脏中SOD的活力，其中合剂能发挥其配伍功效，使活力提高更为明显。结果见图1。

图1 药物提高小鼠血清、肝脏SOD活性比较

2.3 杜仲、人参及其合剂提高小鼠血清、肝脏GSH-Px活性的差异

相比衰老组，杜仲、人参及其合剂均能显著提高小鼠血清、肝脏中GSH-Px的活力，其中合剂能发挥其配伍功效，使活力提高更为明显。结果见图2。

图2 药物提高小鼠血清、肝脏GSH-Px活性比较

3 讨 论

自由基与一些疾病以及人体的衰老是相关的，而机体对体内自由基的清除主要依靠某些酶类，包括超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)等。随年龄增长，机体清除自由基的能力也相应降低，自由基产生和清除的平衡被打破，造成机体衰老加速[3]。所以，机体内SOD和GSH-Px活力大小可以反映机体清除自由基的能力。

D-半乳糖衰老模型在国内外是用于衰老机制、抗氧化性和抗衰老药物研究的最常用病理模型[4]。通过一定时间的连续注射D-半乳糖，造成机体代谢紊乱，最终引起机体衰老。本实验证实，杜仲、人参和他们的合剂能够提高衰老模型小鼠体内SOD和GSH-Px的活力，从而具有延缓衰老的功效。杜仲、人参入药已经有2000多年的历史了，但对他们的合剂研究却鲜有报道，其配伍效应的具体机制还有待挖掘。对杜仲-人参合剂提高机体抗氧化性的进一步研究，将会对了解中药如何增强机体免疫力，方剂具体成分之间的互补相成效应大有裨益。

[1]胡伟.杜仲化学成分现代研究[J].中医临床研究，2013，5(9): 113

[2]马萍，胡荣，王小英，等.中药人参治疗糖尿病的研究进展[J].湖北中医药大学学报，2013，15(1): 63

[3]焦铭，梁毅，李洪涛，等.脲和盐酸胍诱导过氧化氢酶去折叠的研究[J].化学学报，2003，61(9): 1362

[4]关萍，郭搏，王惠，等.D-半乳糖促小鼠衰老模型的衰老程度与自然生长鼠龄的比较[J].动物医学进展，2013，34(1): 71