虎眼万年青体内抗氧化性的研究

徐 暘，何滟澦，闫 静

(黑龙江中医药大学药学院，哈尔滨150040)

虎眼万年青(Ornithogalum caudatum Ait)为百合科虎眼万年青属常绿多年生草本植物的干燥全草，又名胡连万年青、海葱、葫芦兰、珍珠草、鸟乳花，属常见的观赏花卉，原产于非洲南部，我国各地广泛栽培[1－2].虎眼万年青味甘、性微寒，归肝、脾经，具有清热解毒，消坚散结的功能，是民间常用中药材，将其茎叶捣碎外敷可以消除疔疮痈疖、无名肿痛，内服则能化瘀解毒，治疗肝硬化、肝炎等疾病[3]，近年研究发现其有很强的抗癌活性[4－6]，目前对于虎眼万年青的研究主要集中在抗肿瘤及其对机体调节免疫方向和化学成分方向，对于其抗氧化作用的实验研究尚未见报道.因此，本文用虎眼万年青乙醇提取物中粗总皂苷对小鼠体内抗氧化功能进行了研究，为进一步深入探讨虎眼万年青具有抗癌、镇痛抗炎和提高免疫力等生物活性提供理论和技术支持.

1 材料和方法

1.1 仪器

R－202旋转蒸发器(上海申胜生物技术有限公司);JY系列药物电子天平(上海民桥精密科学仪器有限公司);UV160型紫外可见光分光光度计(岛津公司).

1.2 材料

虎眼万年青购买于吉林省白山市长白县;昆明种小鼠购买于黑龙江中医药大学动物实验中心;SOD、MDA试剂盒购于南京建成生物试剂公司.

1.3 方法

1.3.1 药物的提取与分离

称取虎眼万年青干燥粗粉适量，用70%乙醇加热回流提取，提取3次，合并提取液，抽滤后55℃低压浓缩，得到虎眼万年青乙醇提取物的水溶液依次用乙醚和水饱和的正丁醇萃取，正丁醇层进行浓缩、烘干，得虎眼万年青粗总皂苷浸膏，放置4℃冰箱中备用.

1.3.2 动物处理

取昆明种小鼠50只，雌雄各半，体重18～22 g，在实验室适应性喂养7 d，随机分成5组，每组10只，灌胃给药，灌胃前小鼠禁食不禁水12 h.

第一组空白对照组给予蒸馏水(10 mL/kg)，第二组阳性对照组(Vc组)给予Vc水溶液(10 mL/kg、15 mg/kg)，现用现配;第三组高剂量组给予虎眼万年青总皂苷(20 mL/kg、30 mg/kg)，第四组中剂量组给予虎眼万年青总皂苷(10 mL/kg、15 mg/kg)，第五组低剂量组给予虎眼万年青总皂苷(5 mL/kg、7.5 mg/kg).

1.3.3 SOD和MDA的含量测定

每天灌胃给药1次，连续灌胃14 d，最后一次灌胃后30 min后摘眼球取血，血液凝固后，4℃，3 000 r/min离心10 min，制成血清待用.将采完血的小鼠颈椎脱臼法处死，取出肝脏，用冰冷的生理盐水洗涤数次，滤纸吸干水分，称取1 g放入小烧杯中剪碎，转入玻璃匀浆器中，用0.86%的生理盐水配成10%的肝组织匀浆，充分研磨数次后使组织匀浆化后以4 000 r/min离心10 min，收集上清液待用.

SOD活性检测:分别轻取血清10 μL和10%的肝组织匀浆液30 μL，按照检测试剂盒说明书操作，依次加入各种试剂，混匀，置37℃恒温水浴锅加热40 min后，加入显色剂，混匀，室温放置10 min，于550 nm波长处，1 cm光径比色杯，蒸馏水调零，比色，测定测试管及对照管的吸光度值.

血清中总SOD活力(U/mL)=[(对照管吸光度值一测定管吸光度值)/对照管吸光度值]/50%×反应体系的稀释倍数×样本测试前的稀释倍数

组织匀浆中SOD活力(U/mL)=[(对照管吸光度值一测定管吸光度值)/对照管吸光度值]/50% ×反应液总体积/取样量(mL)/待测样本蛋白浓度(mgproL/mL)

MDA含量检测:分别轻取血清10 μL和10%的肝组织匀浆液10 μL，按照检测试剂盒说明书，将试剂依次加入各个试管，涡旋混匀器混匀，试管口用保鲜膜扎紧，用针头刺一小孔，95℃水浴40 min，取出后流水冷却，532 nm波长处，l cm光径比色杯，蒸馏水调零，比色，测定各管的吸光度.

血清中MDA含量=[(测定管吸光度值－测定空白管吸光度值)/(标准管吸光度值－标准空白管吸光度值)]×标准品浓度(10 nmol/mL)

组织中MDA含量=[(测定管吸光度值－测定空白管吸光度值)/(标准管吸光度值－标准空白管吸光度值)]×标准品浓度(10 nmol/mL)/待测样品蛋白浓度(mgproL/mL)

1.3.4 数据分析

2 结果分析

虎眼万年青粗总皂苷浓度为高、中、低(30、15、7.5 mg/kg)时小鼠血清中SOD的活力均显著高于空白组中SOD的活力;小鼠血中MDA的含量极显著的低于空白组(P＜0.01).与空白组相比，高、中、低各剂量组中MDA的含量均存在显著性差异，高、中剂量组中SOD的活力存在显著性差异(P＜0.01)，低剂量组中SOD的活力存在显著性差异(P ＜0.05);与 Vc对照组(15 mg/kg)相比，高剂量组血中SOD的活力显著高于对照组(P＜0.01)，高剂量组血中MDA的含量无显著性差异.实验组血中SOD的活力随着浓度的增高而提高，MDA的含量也随着浓度的增高而降低.

虎眼万年青乙醇提取物中粗总皂苷浓度的高、中、低(30、15、7.5 mg/kg)在小鼠肝组织中 MDA的含量极显著的低于空白组(P＜0.01)，SOD的活力均显著高于空白组中的SOD的活力(P＜0.01).与空白组相比，高剂量组中MDA的含量与SOD的活力均有显著性差异(P＜0.01)，中、低剂量组中MDA的含量存在显著性差异(P＜0.05);与Vc对照组(15 mg/kg)相比，高剂量组中MDA的含量显著低于Vc对照组(P＜0.05)，SOD的活力无显著性差异.虎眼万年青乙醇提取物可以显著的提高小鼠体内SOD的活力和显著的降低体内MDA的含量，尤其是高剂量组中SOD的活力显著高于空白组(P＜0.01)，MDA的含量极显著的低于空白组(P＜0.01).实验中肝组织中SOD的活力随着浓度的增高而提高，MDA的含量也随着浓度的增高而降低.

表1 虎眼万年青提取物对小鼠血清和肝组织MDA含量的影响±S，n=10)

表1 虎眼万年青提取物对小鼠血清和肝组织MDA含量的影响±S，n=10)

4.062 8 ±0.549 0 3.646 9 ±0.609 3 Vc对照组 2.229 8 ±0.814 9 2.814 1 ±0.580 4高剂量组 2.087 3 ±0.553 3 2.557 2 ±0.119 1中剂量组 2.353 6 ±0.589 6 2.896 1 ±0.479 6低剂量组/%空白组血中MDA的含量/% 肝组织中MDA的含量2.604 2 ±0.436 5 2.937 9 ±0.464 6

表2 虎眼万年青提取物对小鼠血清和肝组织SOD活力的影响(±S，n=10)

表2 虎眼万年青提取物对小鼠血清和肝组织SOD活力的影响(±S，n=10)

血中SOD的活力/(U·mL－1)肝组织中SOD的活力/(U·mL－1)99.171 ±10.399 4 85.039 8 ±3.989 4 Vc对照组 294.407 ±11.298 0 101.478 6 ±3.431 1高剂量组 314.534 0 ±19.288 3 102.976 0 ±3.336 0中剂量组 190.583 ±15.590 5 87.423 0 ±4.562 7低剂量组空白组113.58 ±16.013 2 85.735 0 ±5.248 6

3 讨论

丙二醛(MDA)是动物体内多元不饱和脂质氧化的终产物之一，其含量的高低可以反映体内不饱和脂质的过氧化程度，间接地反映出细胞膜的损伤程度.从表1可以看出，虎眼万年青乙醇提取物中粗总皂苷可以有效的降低MDA在血液和肝脏中的数量，降低机体被脂质过氧化，减轻机体被自由基损坏的程度.超氧化物歧化酶(SOD)是体内一种重要的氧自由基清除剂，能够平衡机体的氧自由基，从而避免当体内超氧阴离子自由基浓度过高时引起的不良反应，对机体的氧化与抗氧化平衡有着重要的作用.当体内自由基水平失衡时会导致各种疾病(肿瘤、衰老、炎症等)，SOD能清除超氧离子自由基O2

－·，保护细胞免受损伤.因此SOD活力的高低与衰老、肿瘤、炎症等有着密切的关系.如表2可以看出虎眼万年青乙醇提取物可以显著的增加体内SOD的数量，提高体内SOD的活力，其高剂量组(30 mg/kg)的抗氧化能力可以与Vc(15 mg/kg)对照组抗氧化的能力相仿，随着药物浓度的增高，体内的SOD的活力也随之增大.

虎眼万年青乙醇提取物中含有皂苷、生物碱、黄酮、香豆素类等多种成分，本实验采用70%乙醇加热回流提取虎眼万年青总皂苷进行动物实验，高剂量组(30 mg/kg)的抗氧化能力可以与Vc(15 mg/kg)对照组抗氧化的能力相近，通过SOD和MDA的结果分析得知虎眼万年青总皂苷成分具有一定的抗氧化效果，可以有效的提高体内清除超氧阴离子自由基的能力和降低MDA在血液和肝脏中的数量，有助于增强机体清除自由基的能力，具有一定的抗氧化作用，这对保护细胞，延缓衰老具有重要意义，但其作用机理和有效活性成分则有待于进一步研究.

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[3]彭世勇，关丽霞，佟 岩，等.虎眼万年青的组织培养与快速繁殖[J].辽宁农业职业技术学院学报，2006，8(3):6－7.

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