八珍汤中芍药苷的质量浓度测定

张大雷，张吉林，才志成

(黑龙江省公安厅刑事技术总队，哈尔滨150008)

八珍汤源自古方《正体类要》，是四君子汤和四物汤的合方，由人参、熟地、川芎、白芍、当归、茯苓、白术、甘草8味中药组成，经古今广泛临床实践证明可同时具备补气补血双重功效的经典方剂[1－3].其中芍药苷是八珍汤的重要活性成分之一，具有有降低血液黏度、抗血小板聚集、改善微循环、扩张血管、神经保护、降血糖、抗氧化、抗惊厥等作用[4－6].因此，本文选择芍药苷作为目标成分对八珍汤复方进行质量浓度测定.

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

Waters高效液相色谱仪(W2695Separations Module、W2996Photodiode Array Detector、自动进样器，Empower化学工作站);751型紫外可见分光光度计(上海光谱仪器有限公司);R－201旋转蒸发仪(上海申生科技有限公司);恒温水浴锅;真空干燥箱(上海一恒仪器有限公司);电子天平(美国奥好斯科技有限公司);DPS统计软件(北京中农博思科技发展有限公司).

芍药苷(中国药品生物制品检定所，批号为:110736－200320);乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯;水为二次蒸馏水.所有药材人参(Panax ginseng C.A.Mey.)、熟地黄(Radix Rehmanniae praeparata)、白芍(Paeonia lactiflora Pall.)、当归(Angelica sinensis(Oliv.)Diels)、白术 (Atractylodes macrocephala Koidz.)、茯 苓 (Poriacocos(Schw.)Wolf)、川芎(Ligusticum chuanxiong Hort.)、甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch.)均经鉴定符合中国药典2005版规定的质量标准要求.

1.2 色谱条件

色谱柱:Symmetry C18(4.6 mm ×250 mm，5 μm);流动相:乙腈 －0.05%磷酸水溶液(15∶85);检测波长:230 nm;流速:1.0 mL/min;柱温:30 ℃;进样量:20 μL.

图1 (A) 芍药苷空白样品色谱图(B)样品中芍药苷色谱图(C)芍药苷标准品色谱图

1.3 系统适应性试验

取供试品溶液10 μL，注入高效液相色谱仪测试，芍药苷的保留时间为tR=8.273 min，理论塔板数以芍药苷计不低于5 000，芍药苷色谱峰与相邻未知色谱峰的分离度大于1.5.

1.4 空白实验

按处方比例，制成不含芍药的阴性样品溶液，按上述色谱条件进样，结果在芍药苷保留时间8.273 min处没有峰，说明其他成分对芍药苷的测定无干扰.见图1(A)、(B)、(C).

1.5 标准曲线的制备

精密称取芍药苷标准品，甲醇定容，配成质量浓度分别为0.014、0.028、0.056、0.112、0.224 mg/mL的对照品溶液，分别取20 μL注入高效液相色谱仪中，在上述色谱条件下进样分析，以芍药苷质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，并计算线性回归方程.测得芍药苷的线性回归方程为 Y=40798281 X+2855，r=0.9998(n=5)，结果表明:芍药苷在0.014～0.224 mg/mL范围内呈良好线性关系.结果见表1.

表1 高效液相测定芍药苷标准溶液峰面积值结果(n=5)

1.6 精密度实验

分别精密吸取芍药苷(0.028 mg/mL)对照品溶液，连续5次进样，测定芍药苷的峰面积，测得芍药苷峰面积的RSD值分别为0.37%(n=5)，表明该方法精密度良好.结果见表2.

表2 芍药苷精密度实验结果(n=5)

1.7 稳定性实验

分别精密吸取样品溶液，在 0、3、6、12、24 h 分别进样分析测定，测定芍药苷的峰面积，并计算RSD值，考察所测成分芍药苷在0～24 h内的稳定性.测定芍药苷峰面积的RSD值分别为0.34%(n=5)，结果显示其在0～24 h内稳定.结果见表3.

表3 样品中芍药苷稳定性实验结果(n=5)

1.8 重复性实验

分别平行制备5份样品溶液进样，测定样品中芍药苷的质量浓度，并计算RSD值，考察方法的重复性.测得样品中芍药苷的质量浓度分别为2.2260 mg/g，RSD 值为1.65%(n=5)，结果表明本方法的重复性较好.结果见表4.

表4 样品中芍药苷重复性实验结果(n=5)

1.9 回收率实验

取已测得芍药苷质量浓度的样品溶液各9份，分别加入相当于样品80%、100%、120%的芍药苷对照品溶液，测定芍药苷的质量浓度，计算加样回收率，并计算RSD值.测得芍药苷的回收率为98.85%，RSD 为0.08%(n=3).结果见表5.

表5 芍药苷加样回收率(n=3)

2 样品测定

精密称取八珍汤浓缩浸膏适量，用甲醇溶解，定容于5 mL的容量瓶中，摇匀，并用微孔滤膜(0.45 μm)过滤后进样，测定峰面积，计算样品中芍药苷的质量浓度.结果见表6，色谱图见图1.

表6 样品中芍药苷质量比测定结果(n=3)

3 结语

本实验建立了八珍汤复方中芍药苷的HPLC测定方法，线性范围宽、稳定性好、重现性好、专属性强、操作简便、无干扰，对八珍汤的质量控制具有重要的意义.本方法同样适用于八珍汤苷类部位中芍药苷的质量比测定，对苷类部位纯化工艺研究和进一步开发提供了理论依据.

[1]郭晓娜，封银曼.八珍汤临床及实验研究进展[J].光明中医，2007，22(4):62－63.

[2]张 超，南莉莉，孙 志，等.八珍汤物质基础及其药理学研究进展[J].上海医药，2008，29(6):273－276.

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