栝楼丛生芽快繁体系的建立

周凤琴等

摘要：利用栝楼的嫩芽作为外植体，进行离体组织培养，通过正交试验选择最适pH值和激素浓度，筛选出栝楼丛生芽的最适诱导培养基。结果表明，消毒时间为3 min时外植体损伤较小；pH为5.8的培养基外植体长势旺盛；3号芽诱导培养基丛生芽比较旺盛；2号生根培养基得到的根多且壮。栝楼丛生芽的快速繁殖体系为：0.1%HgCl2 溶液外植体表面消毒3 min；丛生芽诱导的最适pH为5.8；最佳芽诱导培养基为：MS+0.5 mg/L 6-BA + 0.5 mg/L NAA；最佳芽生根培养基为：MS+ 0.2 mg/L NAA。

关键词：栝楼；嫩芽；组织培养；快速繁殖

中图分类号：S567.23+9 文献标识号：A 文章编号：1001-4942（2014）03-0046-03

AbstractThe in vitro tissue culture method of Trichosanthes kirilowii Maxim. was established using tender buds as explants. By orthogonal test， the optimum pH value， 6-BA and NAA concentrations， and the best induction medium of multiple buds were selected. The results showed that disinfecting for 3 minutes had less injury on explants. The explants grew well on the medium with pH of 5.8. The multiple buds in the third bud induction medium were vigorous. And the second rooting medium had more and stronger roots. In conclusion， the rapid propagation system of Trichosanthes kirilowii Maxim. for multiple buds induction was disinfecting explants for 3 minutes using 0.1% HgCl2；the optimum pH value was 5.8；the optimum bud induction medium was MS+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA； and the optimum rooting medium was MS+0.2 mg/L NAA.

Key wordsTrichosanthes kirilowii Maxim.； Tender bud； Tissue culture； Rapid propagation

栝楼 （Trichosanthes kirilowii Maxim.），为葫芦科多年生草质藤本植物，其根（中药名为天花粉）、种子（中药名为栝楼仁）、果实（中药名为栝楼实）、果皮（中药名为栝楼皮）均可入药，有化痰散结，治咳嗽、胸闷的功效，还能滑肠通便，治疗便秘[1～3]。栝楼是雌雄异株的植物，种子繁殖雌雄难辨，分根法繁殖系数较低，使良种生产发展受到一定的限制[5]。利用植物组织培养法进行快速繁殖，所需材料少，繁殖效率高，不受季节和气候的影响，还可以节约成本、生产脱毒苗等[6]。现有报道大多通过愈伤诱导进行栝楼快繁，存在变异率高，所需周期长等问题[7～9]。作者通过对组培快繁条件的探索，逐步建立起栝楼的丛生芽诱导体系，加快了栝楼无性繁殖的速度，而且通过丛生芽增殖的方式，保持了母本的优良特性，对于栝楼种苗的快速繁育具有重要意义。

1材料与方法

1.1试验材料

样品取自山东中医药大学药用植物园。经山东中医药大学教授周凤琴鉴定为葫芦科植物栝楼（Trichosanthes kirilowii Maxim.），4月初从植株上取当年生嫩芽做外植体。

1.2试验方法

1.2.1消毒时间的确定先用75%乙醇浸泡外植体1 min，再用灭菌水冲洗2次，并用0.1%HgCl2对外植体进行表面消毒，分为2组，分别消毒3 min和5 min；最后用灭菌水彻底冲洗外植体6～7次。超净工作台提前启动灭菌后，将外植体放在铺有灭菌滤纸的培养皿上，剪取长约1.5 cm的嫩芽，备用。

1.2.2pH值的确定配制培养基后调节pH值分别至5.8、5.9，观察不同pH值对丛生芽生长的影响。

1.2.3诱导芽分化培养基的确定以MS为基本培养基，在此基础上，附加6-BA 0.5、4.0 mg/L两个浓度水平和 NAA 0.1、0.5 mg/L两个浓度水平进行正交试验，组成4种诱导培养基，每种培养基5瓶，每个三角瓶接种4个外植体，观测统计每种培养基诱导外植体分化丛生芽的结果，以确定最适诱导培养基。

培养条件：培养温度（25±5）℃，光照强度1 000 lx，光照时间12 h/d 。

1.2.4生根培养基的确定以MS为基本培养基，在此基础上，附加NAA 0.1、0.2 mg/L两个浓度水平，组成两组生根培养基，每组10瓶，每瓶4个外植体，观测统计每种培养基诱导外植体生根的结果，以确定最适生根培养基。

培养条件：培养温度（25±5）℃，光照强度1 000 lx，光照时间12 h/d 。

2结果与分析

2.1不同消毒时间对外植体生长及分化的影响

外植体用0.1% HgCl2消毒灭菌，接种后21 d观察结果（表1）显示，消毒5 min的污染率低，但严重影响其分化率。消毒3 min的虽外植体污染率稍高，但其分化率更高，长势更好。因此，确定外植体用0.1% HgCl2 溶液表面消毒时间为3 min。

3小结与讨论

3.1以栝楼嫩芽为外植体，在保证消毒效果的前提下，选择0.1% HgCl2溶液表面消毒3 min为宜。如消毒时间过长，栝楼嫩芽愈伤组织多数变成黑褐色，且随着愈伤组织的生长也不易消失。所以在控制污染率的前提下，消毒时间越短越好。

3.2建立栝楼丛生芽快繁体系：最适pH为5.8，栝楼丛生芽诱导培养基为 MS+0.5 mg/L 6-BA +0.5 mg/L NAA，最适生根培养基为：MS+0.2 mg/L NAA。采用丛生芽诱导方式进行栝楼组培快繁，30～35 d组培苗高度即达20 cm以上，和愈伤组织诱导方式[7～9]相比缩短了快繁时间。

3.3试验过程中发现，栝楼的取材时间及部位对外植体的分化诱导率有较明显的影响。3～4月份新发嫩芽顶端的分生组织容易诱导分化。相比较而言，取材时间更重要。

参考文献：

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：52，104-105.

[2]郎进爆， 张贤超， 王珍儿. 栝楼的特性及其开发利用[J]. 上海农业科技， 2004（2）：91.

[3]时岩鹏， 姚庆强， 刘拥军， 等. 栝楼化学成分的研究及其ɑ-菠菜甾醇的含量测定（Ⅰ） [J]. 中草药， 2002， 33（1）： 14-16.

[4]Byers V S， Levin A S， Waites L A， et al. A phase Ⅰ/Ⅱ study of trich osnath in treantmert of HIV disease [J]. AIDS， 1990（4）：1189-1196.

[5]郑向丽，陈敏健，韩海东，等.福建道地瓜蒌的特征特性及栽培技术[J].福建农业科技，2010（3）：47-48.

[6]林贵美，李小泉，韦华芳，等.栝楼组织培养与快繁研究[J].广东农业科学，2010（2）：32-33.

[7]佟宏霞， 李喜文， 邢 苗. 栝楼组织培养和植株再生研究[J] . 中国中药杂志， 1996，21（12）： 721-722.

[8]郑树松， 苑华毅， 王莉江. 药用植物栝楼的组织培养及其表达蛋白的分析[J].生物工程学报， 2001， 17（4）：420-422.

[9]朱勤，杨六萍，杨许琴，等. 食籽栝楼离体快繁的初步研究[J].安徽农业科学， 2006， 34（16）：3965-3966.

3小结与讨论

3.1以栝楼嫩芽为外植体，在保证消毒效果的前提下，选择0.1% HgCl2溶液表面消毒3 min为宜。如消毒时间过长，栝楼嫩芽愈伤组织多数变成黑褐色，且随着愈伤组织的生长也不易消失。所以在控制污染率的前提下，消毒时间越短越好。

3.2建立栝楼丛生芽快繁体系：最适pH为5.8，栝楼丛生芽诱导培养基为 MS+0.5 mg/L 6-BA +0.5 mg/L NAA，最适生根培养基为：MS+0.2 mg/L NAA。采用丛生芽诱导方式进行栝楼组培快繁，30～35 d组培苗高度即达20 cm以上，和愈伤组织诱导方式[7～9]相比缩短了快繁时间。

3.3试验过程中发现，栝楼的取材时间及部位对外植体的分化诱导率有较明显的影响。3～4月份新发嫩芽顶端的分生组织容易诱导分化。相比较而言，取材时间更重要。

参考文献：

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：52，104-105.

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[9]朱勤，杨六萍，杨许琴，等. 食籽栝楼离体快繁的初步研究[J].安徽农业科学， 2006， 34（16）：3965-3966.

3小结与讨论

3.1以栝楼嫩芽为外植体，在保证消毒效果的前提下，选择0.1% HgCl2溶液表面消毒3 min为宜。如消毒时间过长，栝楼嫩芽愈伤组织多数变成黑褐色，且随着愈伤组织的生长也不易消失。所以在控制污染率的前提下，消毒时间越短越好。

3.2建立栝楼丛生芽快繁体系：最适pH为5.8，栝楼丛生芽诱导培养基为 MS+0.5 mg/L 6-BA +0.5 mg/L NAA，最适生根培养基为：MS+0.2 mg/L NAA。采用丛生芽诱导方式进行栝楼组培快繁，30～35 d组培苗高度即达20 cm以上，和愈伤组织诱导方式[7～9]相比缩短了快繁时间。

3.3试验过程中发现，栝楼的取材时间及部位对外植体的分化诱导率有较明显的影响。3～4月份新发嫩芽顶端的分生组织容易诱导分化。相比较而言，取材时间更重要。

参考文献：

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：52，104-105.

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[9]朱勤，杨六萍，杨许琴，等. 食籽栝楼离体快繁的初步研究[J].安徽农业科学， 2006， 34（16）：3965-3966.