风疹IgM抗体测定的影响因素及质量控制

宋 康 熊建明 刘思寨

(四川省雅安市疾病预防控制中心 625000)

风疹是一种呼吸道传染病，所致疾病分为两种:风疹和先天性风疹综合症(CRS)，后者包括白内障、心脏疾病和耳聋等［1］，孕妇在怀孕早期感染风疹影响胎儿发育［2］，因此，风疹的早期血清学检测非常重要，检测风疹IgM抗体的方法主要有酶联免疫法(抗体捕获ELISA法)，该法灵敏度高、特异性强，但在实际操作中有诸多干扰因素，为了得到准确的实验结果，必须进行严格的质量控制。

1 材料与方法

1.1 风疹病毒IgM抗体检测试剂盒由珠海海泰生物制药有限公司生产，试剂均在有效期内使用。

1.2 质量控制阴性对照值介于0-0.15，阳性对照值介于0.3-1.8，临界对照平均值介于0.15-0.8，证明实验成立;否则试验结果无效，重新试验。

1.3 结果判定样品A值。

2 结果

影响试验因素及质量控制

2.1 标本

2.1.1 标本采集后应尽快送检，因送检时间与IgM抗体检出率密切相关［3］。

2.1.2 标本要避免出现严重溶血、高血脂和细菌污染，样本溶血:以辣根过氧化酶为标记的elisa测定中，会导致非特异性显色，干扰测定结果［4］，被细菌污染的标本同溶血一样，也可产生非特异性显色而干扰检测结果［4］。

2.1.3 血清标本2℃ -8℃下保存一周，若长时间应置于-70℃保存。

2.1.4 要避免标本反复冻融［5］，因反复冻融所产生的机械剪切力将对标本中的蛋白等分子产生破坏作用，从而引起假阴性结果。

2.2 实验过程

2.2.1 试剂盒使用前先在室温平衡20min以上，以便在温育时很快达到反应要求温度，避免弱阳性标本产生假阴性结果。

2.2.2 加样时标本要混匀，应将液体及标本加在孔底，不外溅，避免加在孔壁上部，加样量要准确。

2.2.3 洗板在ELISA试验中洗板非常关键，如果洗板不干净将直接影响测定结果。

2.2.4 温育过高过低都会影响试验，基层实验室有时用孵箱代替水浴锅，冬天温度低，开关门箱内温度迅速降低，孵箱内温度达不到37℃，测定时临界对照平均值常常低于0.15，试验不成立，因此温育要在水浴锅里进行。

2.2.5 酶标仪测定测定前先用棉签把酶标板底部的水珠擦干净，检查各孔是否有气泡，否则测定值会变高，有可能产生假阳性结果。

2.3 仪器

2.3.1 移液器定期进行校正。

2.3.2 水浴锅要有外部温度计对仪器温度进行校准。

2.3.3 洗板机定期检查加样孔是否畅通，每次用完后立即用蒸馏水反复进行内部冲洗。

2.4 质量控制

2.4.1 质控图法常规质控图(Levey-Jennings)将IHC血清放在常规样本中，进行20次检测，计算均值和标准差(SD)。并绘制质控图。一般不直接使用IHC检测OD值，而使用IHC的OD值与该次检测的Cutoff的比值。如换算成单位，则直接使用IHC的单位浓度来计算均值和标准差。IHC“失控”的该次检测结果无效，要对该次试验所有的标本进行重新检测。

常规质控图的优点:简单易行，便于基层使用 只需一个质控。

常规质控图的缺点:需要进行20次IHC的检测，才能做质控图只有一个质控，规则简单。

2.4.2 “即刻法”质控结果 即刻法质控使用:先将IHC的测定值与Cutoff比值从小到大排列。计算均值(X)和标准差(SD)。利用公式计算SDI上限和SDI下限值。将SDI上限、SDI下限值与SDI值中的数字比较。当SDI上限值和SDI下限值＜n2SD时，表示处于控制范围内，可以继续往下测定。继续重复以上各项计算当SDI上限和SDI下限有一值处于n2SD和n3SD值之间时，说明该值在2SD～3SD范围，处于“告警”状态。当SDI上限和SDI下限有一值＞n3SD时，说明该值已在3SD范围之外，属“失控”。IHC“失控”的该次检测结果无效，要对该次试验所有的标本进行重新检测。

即刻法质控有三个以上的数值就可以判断是否有异常值的存在［7］，但前三次结果对后续质控结果影响较大［8］。

2.4.3 每次试验设空白对照、阴性对照、阳性对照各一孔，临界对照三孔、内部质控一孔。

2.5 人员素质

2.5.1 检验人员要定期接受培训，以提高检验的准确性。综上所述，风疹测定影响因素较多，故在实际操作中要加强质量管理，认真避免或减少影响因素，力求结果准确，为疾病的诊断提供可靠的依据。

［1］Chapter 12.Rubella，in Epidemiology and Prevention of Vaccine-Preventable Diseases.2004，Centers for Disease Control and Prevention:Atlanta.p.145-158.

［2］Robertson，s.E，et al，Rubella and congental rubella syndronae:global update，Rev Panam Salud Publica，2003，14(s)p.306-15.

［3］李瑞忠，大理州2000-2001年麻疹实验室监测结果分析.中国初级卫生保健，2002，16(增刊):49-51.

［4］岳献荣，孟毓.酶联免疫吸附试验检测各环节中应注意问题［J］.中国临床研究，2010.23(2):150-151.

［5］李会英.酶联免疫吸附实验影响因素的分析［J］.检验医学与临床，2007，4(10):985-986.

［6］周微雅、卢秋维，不同条件对酶联吸附试验的影响［J］.实用医技杂志，2010，17.(8):744.

［7］王玉兰.临床免疫学和免疫检验［M］.北京:人们卫生出版社出版，2003，253-270.

［8］赖玉洁.“即刻法”室内质控的局限性［J］.中国输血杂志，2004，17(6):442.