HIV感染患者CD4+T淋巴细胞凋亡率与计数的相关性分析

臧希卉

吉林省疾病预防控制中心消毒所，吉林长春 130000

相关研究证明，人免疫缺陷病毒(HIV)感染后，会逐渐耗竭在免疫系统调节中起着重要作用的CD4+T 淋巴细胞，最终会导致获得性免疫缺陷综合症AIDS (即艾滋病)[1]。多年来，大量的研究在于观察CD4+T 淋巴细胞的凋亡在HIV/AIDS 的发病机理中所起到的重要作用，但是很少有研究表达CD4+T 淋巴细胞凋亡率和CD4+T 淋巴细胞计数之间的关联性。本项试验通过流式细胞术来研究HIV 感染患者CD4+T 淋巴细胞的凋亡状况，并探讨和分析该指标和CD4+T 淋巴细胞计数的相互关系，取得了较好的结果，现进行如下报道。

1 对象与方法

1.1 研究对象

收集45例患HIV 的感染者，都是经过性传播途径而被感染，均采用蛋白印迹方法经确诊属于HIV-1，患者年龄从19～40岁，平均的年龄是（26.1±3.7）岁，其中男性患者共25例，女性患者共20例，没有使用过抗HIV 的治疗，排除没有其它症状的感染者；另外选取45例和HIV 感染类似的HIV 阴性志愿者来作为对照组进行比较。

1.2 检测方法

采用FITC 标记CD4 单抗和溶血素以及Annexin V-FITC 凋亡检测试剂盒，对于CD4+T 淋巴细胞计数采用和50 μL 抗凝血混合均匀，在室温避光保存15 min 后,加入450uL 溶血素,再在室温避光保存15 min 后，通过FACS MULISET 软件进行检测并分析对比研究。CD4+T 淋巴细胞凋亡的检测方法是：用200 μL 抗凝全血加溶血素后，马上轻轻混匀，在室温避光保存15 min 以后，离心5 min 去上清，在4 ℃条件下，PBS (pH 值为7.2,0.01 mol/L)对细胞洗涤2 次，然后采用FACS CELLQUEST 软件进行检测和分析。

1.3 统计学原理

所有的资料采用SPSS 18.0 的统计学软件进行综合分析实验结果，HIV 感染者和对照组患CD4+T 淋巴细胞的凋亡率之间对比采用秩和进行检验；两组间计数资料相关性采用是Spearman等级相关分析。如果P＜0.05，表明其差异具有统计学意义。

2 结果

HIV 感染组CD4+T 淋巴细胞的凋亡率是(6.81±2.29)%，要远高于对照组的凋亡率(2.76±0.88）%，该两组CD4+T 淋巴细胞的凋亡率对比，具有显著的差异（Z=-5.391，P＜0.01），具有统计学意义。本研究组细胞计数个数平均值为（362.5±6.3）,和HIV 感染组CD4+T 淋巴细胞的凋亡率之间存在明显负相关关系（r=-0.875，P＜0.01）。

3 讨论

在临床上HIV 感染者有个很明显的特征是：CD4+T 淋巴细胞的数量如果有进行性的下降，就会伴随着细胞功能的快速下降[2]。Ledru E 等[3-4]相关研究证明，感染者的体内外HIV 感染以后所导致的细胞凋亡，极有可能是CD4+T 淋巴细胞出现进行性减少的一个非常重要的原因。CD4+T 淋巴细胞出现进行性减少机制通常和下面两个因素密切相关：①HIV 编码的蛋白，比如Tat 蛋白等，常以抗原与超抗原的形式对于机体免疫细胞进行反复的刺激，造成慢性免疫活化状况，并经过活化引发细胞死亡与活化T细胞自主死亡的机制，来加速CD4+T 细胞量的减少；②促凋亡蛋白通过TNF 受体细胞凋亡与线粒体细胞凋亡两个信息途径，诱发T 淋巴细胞的凋亡，结果造成了CD4+T 淋巴细胞的大幅减少[5]。Herbein 等相关研究[6]证明，HIV 不但会造成被感染CD4+T 细胞的凋亡，并且还会导致没受感染的旁观者T 淋巴细胞的凋亡数目急剧增加。由于凋亡做为机体的自我保护功能，在自动清除感染细胞的同时，却并未能够抑制HIV 于单核/巨噬细胞内的复制，最终导致没有受到感染的细胞同样出现死亡，造成对于HIV 细胞复制出现失控状态，进而发展成出现严重的免疫缺陷，引发AIDS 等相关的机会性的感染。当人体全血中CD4+T 淋巴细胞的水平在降至200 个/μL 以下的时候，就非常容易引起各类机会感染，这也是HIV 感染患者最大的威胁[7]。

通过本次研究的结果证明：HIV 感染组CD4+T 淋巴细胞的凋亡率要远高于对照组的凋亡率，该两组CD4+T 淋巴细胞的凋亡率对比，差异具有统计学意义。此外，本研究组细胞计数个数平均值为（362.5±6.3）,和HIV 感染组CD4+T 淋巴细胞的凋亡率之间存在明显负相关关系，这和成浩等[8]有关文献报道比较一致。所以，对于HIV 感染患者的疾病进程的监测，除了应当监控传统的CD4+T 淋细胞的计数与病毒载量，还应当检测出细胞的凋亡率，今后在实施艾滋病的治疗和新药的研制开发时，还应当把细胞的凋亡率的改变作为治疗效果的重要观察指标进行参考。

综上所述，CD4+T 淋巴细胞的凋亡率增加属于HIV 感染者CD4+T 淋巴细胞计数出现降低的主要原因，HIV 感染患者的CD4+T 淋巴细胞量的减少和细胞的凋亡率存在着密切的关系，所以检测HIV 感染者的CD4+T 的淋巴细胞凋亡率，更有利于判断患者的疾病发展进程。

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